Ингавирин как принимать для профилактики гриппа: Ингавирин® — инновационный противовирусный препарат для борьбы с гриппом и ОРВИ

Действие препарата Ингавирин® заключается в значительном уменьшении признаков цитопатического и цитодеструктивного действия вируса, снижении количества инфицированных клеток, ограничении патологического процесса, нормализации состава и структуры клеток и морфологической картины тканей в зоне инфекционного процесса, как на ранних, так и на поздних его стадиях.

Противовоспалительное действие обусловлено подавлением продукции ключевых провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли (TNF-α), интерлейкинов (IL-1β и IL-6)), снижением активности миелопероксидазы.

В экспериментальных исследованиях показано, что совместное использование препарата Ингавирин® с антибиотиками повышает эффективность терапии на модели бактериального сепсиса, в том числе вызванного пенициллин-резистентными штаммами стафилококка.

Проведенные экспериментальные токсикологические исследования свидетельствуют о низком уровне токсичности и высоком профиле безопасности препарата.

По параметрам острой токсичности препарат Ингавирин® относится к 4 классу токсичности — «Малотоксичные вещества» (при определении LD50 в экспериментах по острой токсичности летальные дозы препарата определить не удалось).

Препарат не обладает мутагенными, иммунотоксическими, аллергизирующими и канцерогенными свойствами, не оказывает местнораздражающего действия. Препарат Ингавирин® не влияет на репродуктивную функцию, не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

Отсутствует влияние препарата Ингавирин® на систему кроветворения при приеме соответствующей возрасту дозы рекомендованными схемой и курсом.

Фармакокинетика

Всасывание и распределение.

При курсовом приеме препарата один раз в сутки происходит его накопление во внутренних органах и тканях. При этом качественные характеристики фармакокинетических кривых после каждого введения препарата тождественны: быстрое повышение концентрации препарата после каждого введения через 0,5-1 час после приема и затем медленное снижение к 24 часам.

Метаболизм.

Препарат не метаболизируется в организме и выводится в неизмененном виде.

Выведение.

Основной процесс выведения происходит в течение 24 часов. За этот период выводится 80 % принятой дозы: 34,8 % выводится во временном интервале от 0 до 5 часов и 45,2 % во временном интервале от 5 до 24 часов. Из них 77 % выводится через кишечник и 23 % — через почки.

Инструкция по медицинскому применениюлекарственного препарата Ингавирин® для детей с 7-ми лет

Фармакодинамика

Противовирусный препарат.

В доклинических и клинических исследованиях показана эффективность препарата Ингавирин® в отношении вирусов гриппа типа A (A(h2N1), в т.ч. пандемический штамм A(h2N1)pdm09 («свиной»), A(h4N2), A(H5N1)) и типа В, аденовируса, вируса парагриппа, респираторно-синцитиального вируса; в доклинических исследованиях: коронавируса, метапневмовируса, энтеровирусов, в том числе вируса Коксаки и риновируса.

Механизм действия реализуется на уровне инфицированных клеток за счет активации факторов врожденного иммунитета, подавляемых вирусными белками. В экспериментальных исследованиях, в частности, показано, что препарат Ингавирин® повышает экспрессию рецептора интерферона первого типа IFNAR на поверхности эпителиальных и иммунокомпетентных клеток. Увеличение плотности интерфероновых рецепторов приводит к повышению чувствительности клеток к сигналам эндогенного интерферона. Процесс сопровождается активацией (фосфорилированием) белка-трансмиттера STAT1, передающего сигнал в ядро клетки для индукции синтеза противовирусных генов. Показано, что в условиях инфекции препарат активирует синтез антивирусного эффекторного белка МхА (ранний фактор противовирусного ответа, ингибирующий внутриклеточный транспорт рибонуклеопротеиновых комплексов различных вирусов) и фосфорилированной формы PKR, подавляющей трансляцию вирусных белков, таким образом замедляя и останавливая процесс вирусной репродукции.

Действие препарата Ингавирин® заключается в значительном уменьшении признаков цитопатического и цитодеструктивного действия вируса, снижении количества инфицированных клеток, ограничении патологического процесса, нормализации состава и структуры клеток и морфологической картины тканей в зоне инфекционного процесса, как на ранних, так и на поздних его стадиях.

Противовоспалительное действие обусловлено подавлением продукции ключевых провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли (TNF-α), интерлейкинов (IL-1β и IL-6)), снижением активности миелопероксидазы.

В экспериментальных исследованиях показано, что совместное использование препарата Ингавирин® с антибиотиками повышает эффективность терапии на модели бактериального сепсиса, в том числе вызванного пенициллин-резистентными штаммами стафилококка.

Проведенные экспериментальные токсикологические исследования свидетельствуют о низком уровне токсичности и высоком профиле безопасности препарата.

По параметрам острой токсичности препарат Ингавирин® относится к 4 классу токсичности — «Малотоксичные вещества» (при определении LD50 в экспериментах по острой токсичности летальные дозы препарата определить не удалось).

Препарат не обладает мутагенными, иммунотоксическими, аллергизирующими и канцерогенными свойствами, не оказывает местнораздражающего действия. Препарат Ингавирин® не влияет на репродуктивную функцию, не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

Отсутствует влияние препарата Ингавирин® на систему кроветворения при приеме соответствующей возрасту дозы рекомендованными схемой и курсом.

Фармакокинетика

Всасывание и распределение.

В эксперименте с использованием радиоактивной метки установлено: препарат быстро поступает в кровь из желудочно-кишечного тракта, распределяясь по внутренним органам. Максимальные концентрации в крови, плазме крови и большинстве органов достигаются через 30 минут после введения препарата. Величины AUC (площадь под фармакокинетической кривой «концентрация — время») почек, печени и легких незначительно превышают AUC крови (43,77 мкг.ч/г). Величины AUC для селезенки, надпочечников, лимфатических узлов и тимуса ниже AUC крови. MRT (среднее время удержания препарата) в крови — 37,2 часа.

При курсовом приеме препарата один раз в сутки происходит его накопление во внутренних органах и тканях. При этом качественные характеристики фармакокинетических кривых после каждого введения препарата тождественны: быстрое повышение концентрации препарата после каждого введения через 0,5-1 час после приема и затем медленное снижение к 24 часам.

Метаболизм.

Препарат не метаболизируется в организме и выводится в неизмененном виде.

Выведение.

Основной процесс выведения происходит в течение 24 часов. За этот период выводится 80 % принятой дозы: 34,8 % выводится во временном интервале от 0 до 5 часов и 45,2 % во временном интервале от 5 до 24 часов. Из них 77 % выводится через кишечник и 23 % — через почки.

Ингавирин инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Ingavirin капс. 90 мг: 7 или 10 шт. (18284)

Противовирусное лекарственное средство.

В доклинических и клинических исследованиях показана эффективность в отношении вирусов гриппа типа А (А/Н1N1, в т.ч. «свиной» A/h2N1 pdm09, A/h4N2), A/H5N1)) и типа В, аденовируса, вируса парагриппа, респираторно-синцитиального вируса; в доклинических исследованиях: коронавируса, метапневмовируса, энтеровирусов, в т.ч. вируса Коксаки и риновируса.

Способствует ускоренной элиминации вирусов, сокращению продолжительности болезни, уменьшению риска развития осложнений.

Механизм действия реализуется на уровне инфицированных клеток за счет стимуляции факторов врожденного иммунитета, подавляемых вирусными белками. В экспериментальных исследованиях, в частности, показано, что препарат Ингавирин^® повышает экспрессию рецептора интерферона первого типа IFNAR на поверхности эпителиальных и иммунокомпетентных клеток. Увеличение плотности интерфероновых рецепторов приводит к повышению чувствительности клеток к сигналам эндогенного интерферона. Процесс сопровождается активацией (фосфорилированием) белка-трансмиттера STAT1, передающего сигнал в ядро клетки для индукции противовирусных генов. Показано, что в условиях инфекции препарат стимулирует выработку антивирусного эффекторного белка МхА, ингибирующего внутриклеточный транспорт рибонуклеопротеидов различных вирусов, замедляя процесс вирусной репликации.

Лекарственное средство вызывает повышение содержания интерферона в крови до физиологической нормы, стимулирует и нормализует сниженную α-интерферон продуцирующую способность лейкоцитов крови, стимулирует γ-интерферон продуцирующую способность лейкоцитов. Вызывает генерацию цитотоксических лимфоцитов и повышает содержание NK-T-клеток, обладающих высокой киллерной активностью по отношению к зараженным вирусами клеткам.

Противовоспалительное действие обусловлено подавлением продукции ключевых провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли (TNF-α), интерлейкинов (IL-1β и IL-6)), снижением активности миелопероксидазы.

В экспериментальных исследованиях показано, что совместное применение с антибиотиками повышает эффективность терапии на модели бактериального сепсиса, в т.ч. вызванного пенициллин-резистентными штаммами стафилококка.

Проведенные экспериментальные токсикологические исследования свидетельствуют о низком уровне токсичности и высоком профиле безопасности данного активного вещества.

Клинико-эпидемиологическая эффективность противовирусного препарата Ингавирин® | Шульдяков

1. ВОЗ. Информ. бюл. 2009; № 211, апр.

2. Онищенко Г.Г., Ежлова Е.Б., Лазикова Г.Ф. и др. Пандемия гриппа А / h2N1 / 09 в мире и Российской Федерации в 2009–2010 гг. и прогноз на 2010–2011 гг. Журн. микробиол. 2010; 6: 12–17.

3. Allander T., Taani M.T., Bjerkner A. et al. Cloning of human parvovirus by molecular screening of respiratory tract samples. Proc. Natl Acad. Sci. USA 2005; 102: 12 891–12 896.

4. van den Hoogen B.G., de Long J.C., Groen J. Et al. A newly discovered human pnemovirus isolated from young children with respiratory tract disease. Nature Med. 2001; 7: 719–724.

5. Hamelin M.E., Abed Y., Boivin G. Human metapneumovirus: a new player among respiratory viruses. Clin. Infect. Dis. 2004; 38: 983–390.

6. Чучалин А.Г. Синдром острого повреждения легких. Рус. мед. журн. 2006; 14 (22): 1582.

7. Schildgen O., Geikowski T., Glatzel T. et al. New variant of the human metapneumovirus associated with in an acute and severe exacerbation of asthma bronchiole. J. Clin. Virol. 2004; 31: 283–288.

8. Coronavirus SARS-agent causes atypical pneumonia (recommendation of WHO and CDC). Information new release / Покровский В.В., Малеев В.В., Киселев О.И. и др. St-Petersburg; Moscow; 2003.

9. Чешик С.Г., Вартанян Р.В. Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция: клиника, диагностика, лечение. Дет. инфекции 2004; 1: 43–46.

10. Устойчивость к осельтамивиру у госпитализированных пациентов с ослабленным иммунитетом. ВОЗ. Краткое сообщение № 18 от 2 дек. 2009 г.

11. Логинова С.Я., Борисевич С.В., Максимов В.А. и др. Изучение лечебной эффективности нового отечественного препарата Ингавирин® в отношении возбудителя гриппа А (Н3N2). Антибиотики и химиотер. 2008; 53 (7–8): 27–30.

12. Логинова С.Я., Борисевич С.В., Лыков М.В. и др. Изучение активности Ингавирина® in vitro в отношении «мексиканского» пандемического подтипа h2N1 вируса гриппа А, штаммы A / California / 04 / 2009 и А / Саlifornia / 07 / 2009. Антибиотики и химиотер. 2009; 54 (3–4): 15–17.

13. Зарубаев В.В., Кривицкая В.З., Небольсин В.Е. и др. Экспериментальное изучение противовирусной активности Ингавирина® в отношении вируса парагриппа человека. Антибиотики и химиотер. 2010; 55 (7–8): 13–16.

14. Зарубаев В.В, Слита А.В., Сироткин А.К. и др. Экспериментальное изучение противовирусной активности Ингавирина® в отношении аденовируса человека. Антибиотики и химиотер. 2010; 55 (9–10): 19–24.

15. Колобухина Л.В., Малышев Н.А., Меркулова Л.Н и др. Эффективность Ингавирина® в лечении гриппа у взрослых. Тер. арх. 2009; 3: 54–57.

16. Колобухина Л.В., Меркулова Л.Н, Григорян С.С. и др. Эффективность и безопасность препарата Ингавирин® в лечении гриппа и других ОРВИ у взрослых. Справочник поликлин. врача 2010; 9: 1–6.

17. Колобухина Л.В., Меркулова Л.Н., Щелканов М.Ю. и др. Пандемический грипп в России: отличительные особенности клинического течения и отсутствие ранней этиотропной терапии как фактор риска развития тяжелых форм заболевания. Тер. арх. 2011; 9: 48–53.

18. Welliver R., Monto A.C., Carewicz O. et al. Effectiveness of oseltamivir in preventing influenza in household contacts: a randomized controlled trial. J. A.M.A. 2001; 285: 748–754.

19. Hayden F.G., Atmar R.L., Schilling M. et al. Use of the selective oral neuraminidase inhibitor oseltamivir to prevent influenza. N. Engl. J. Med. 1999; 341: 1336–1343.

20. Использование противовирусных препаратов и риск развития лекарственной устойчивости. ВОЗ. Краткое сообщение № 12 от 25 сент. 2009 г.

21. Hayden F.G., Belshe R., Villanueva C. et al. Management of influenza in households: a prospective, randomized comparison of oseltamivir treatment with or without post exposure prophylaxis. J. Infect. Dis. 2004; 189: 440–449.

22. Каира А.Н., Ющенко Г.В., Ахмадуллина Р.Р., Черкасова Н.А. Неспецифическая профилактика гриппа и острых респираторных вирусных инфекций препаратом Анаферон на территории Московской области. Инфекц. бол. 2005; 3 (3): 64–67.

Чем нас лечат: Ингавирин. Одно действующее вещество на два препарата

Вирусология и ее вопросы

Другая статья из того же списка публикаций на сайте была опубликована в журнале «Российская стоматология» с импакт-фактором 0,139. Такой низкий показатель можно объяснить тем, что стоматология — довольно узкая область, где цитируемость по определению не может быть высокой. Но рядом с названием журнала даже не стоит пометка «рецензируемый». Если журнал узкоспециальный, это еще не значит, что статьи не должны перед публикацией проходить отбор, который производят не издатели, а коллегия экспертов-профессионалов. Похожая ситуация и с журналом «Терапевтический архив», импакт-фактор которого, однако, намного выше и составляет целых 0,693 цитирования на статью.

У журнала «Вопросы вирусологии», где была также опубликована одна из статей, размещенных на сайте препарата, импакт-фактор составляет 0,415. Хотя журнал и является рецензируемым, в нем же была опубликована и статья о неэффективности Ингавирина в нетоксичных для клеток концентрациях (по крайней мере, так сообщается в ряде источников, полного текста самой статьи «Львов Д.К., Бурцева Е.И., Прилипов А.Г. и др. «Изоляция 24.05.2009 и депонирование в Государственную коллекцию вирусов (ГКВ №2452 от 24.05.2009) первого штамма А/IIV-Moscow/01/2009(h2N1)swl, подобного свиному вирусу А(h2N1) от первого выявленного 21.05.2009 больного в Москве», Вопросы вирусологии, 2009, №5, стр.10-14» найти не удалось, а в абстракте статьи Ингавирин не упомянут вовсе).

Пожалуй, один из самых высокоимпактных журналов, в котором была опубликована статья про Ингавирин, стал Pharmaceuticals (Basel). Сейчас его импакт-фактор составляет 5,30 — вполне приемлемый для медицинского журнала уровень, однако на момент публикации статьи (2011 год) этот показатель был равен всего 1,42.

«Из чего же, из чего же?», или «Двое из ларца»

Действующее вещество препарата обозначено как 2-(имидазол-4-ил)-этанамид пентандиовой-1,5 кислоты. На какой белок-мишень вируса действует эта молекула, непонятно. Многочисленные статьи ответа на этот вопрос не дают.

Интересно отметить, что одно и то же вещество в одинаковой форме изначально позиционировалось производителями — компанией «Валента Фарм» — как два разных препарата, Дикарбамин и Ингавирин. Стоит отметить, что Дикарбамин изначально проходил испытания в качестве средства от рака. Вскоре после выпуска этих средств в продажу было признано незаконным согласно ФЗ от 12 апреля 2010 г. N 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств». Сравнение описаний Дикарбамина и Ингавирина тоже приводит к любопытным результатам. Одно и то же вещество в зависимости от упаковки начинает вести себя по-разному, например то «доступными способами в крови не определяется», то, напротив, «определяется через 10 минут в плазме крови», защищает то от вирусных заболеваний, то от последствий химиотерапии (причем оба препарата относятся к группе противовирусных и противовоспалительных средств). Лицензия Дикарбамина была отозвана в 2013 году.

Вопрос-ответ

Арбидол (МНН умифеновир, все формы выпуска) показан для профилактики и лечения гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Возможность применения препарата Арбидола при ОРВИ различной этиологии обусловлена универсальным механизмом действия препарата, заключающемся в блокировании этапа проникновения вирусов в клетку. Благодаря данному механизму действия, препарат Арбидол обладает широким спектром противовирусной активности в отношении вирусов, вызывающих различные острые респираторные инфекции.

Проведенные исследования в 2020 году в отношении коронавируса SARS-CoV-2 показали, что механизм действия молекулы умифеновира связан с блокированием этапа фузии, на уровне взаимодействия поверхностного S-белка коронавирусов и рецептора АСЕ2 на поверхности клеток человека3, что подтверждено результатами молекулярного моделирования ^1.2.4

1. Ge Y. и др. A data-driven drug repositioning framework discovered a potential therapeutic agent targeting COVID-19 // bioRxiv. 2020. С. 2020.03.11.986836. Ге Уай. и др. Структурная основа репозиции лекарственных средств для поиска потенциального терапевтического агента, нацеленного на COVID-19// bioRxiv.2020. C. 2020.03.11. 986236.
2. Kong R. и др. COVID-19 Docking Server: An interactive server for docking small molecules, peptides and antibodies against potential targets of COVID-19 // 2020. Конг Р. и др. Док-сервер COVID-19: интерактивный сервер для стыковки малых молекул, пептидов и антител для поиска потенциальных мишеней COVID-19// 2020
3. Sanders J.M. и др. Pharmacologic Treatments for Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): A Review // JAMA. 2020. Сандерс Дж. м. и др. Фармакологические методы лечения коронавирусной инфекции 2019 (COVID-19): обзор // JAMA. 2020.
4. Vankadari N. Arbidol: A potential antiviral drug for the treatment of SARS-CoV-2 by blocking the trimerization of viral spike glycoprotein ? // Int. J. Antimicrob. Agents. 2020. С. 105998. Ванкадари Н. Арбидол: потенциальный противовирусный препарат для лечения SARS-CоV-2 путем блокирования тримеризации вирусного спайкового гликопротеина ? // Int. В J. Antimicrob. Agents. 2020. С. 105998.
5. Wang X. и др. The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro // Cell Discov. 2020. Т. 6. № 1. С. 28. Ван X. и др. Противогриппозный вирусный препарат Арбидол как эффективный ингибитор атипичной пневмонии SARS-CоV-2 in vitro / / Cell Discov. 2020. Т. 6. № 1. С. 28.
6. Wu C. и др. Analysis of therapeutic targets for SARS-CoV-2 and discovery of potential drugs by computational methods // Acta Pharm. Sin. B. 2020. Ву К. и др. Анализ терапевтических мишеней для SARS-CоV-2 и обнаружение потенциальных лекарственных препаратов с помощью вычислительных методов / / акта Фарм. Грех. B. 2020 год.

Врачи предупредили, что нежелательно болеть гриппом и COVID разом — Российская газета

Близятся осенние холода, а с ними период простуд. Врачи предупреждают и о возможности эпидемии гриппа, и о том, что вероятна вторая волна коронавируса нового типа. Что предпринять, чтобы подготовиться к этим рискам наиболее эффективно?

Об этом «РГ» рассказал заведующий кафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И. Пирогова, главный инфекционист Федерального медико-биологического агентства России, доктор медицинских наук, профессор Владимир Никифоров.

Владимир Владимирович, в нашей стране создана первая в мире вакцина от COVID-19. Сможет ли она, по вашему мнению, остановить распространение вируса?

Владимир Никифоров: Коронавирус во многом разбил наши традиционные представления о вирусных инфекциях. В отличие от «стандартных» ОРВИ и гриппа он лишен сезонности — люди заболевают вне зависимости от климатических условий. Не до конца понятно, почему кто-то переносит болезнь вовсе без симптомов, а кого-то от того же заболевания приходится спасать в реанимации. В начале пандемии у России был небольшой запас времени, и мы успели развернуть дополнительные больничные места и ввести ограничительные меры, что помогло минимизировать летальность — она оказалась ниже, чем в других развитых странах. Наши ученые добились успеха, создав первую в мире вакцину, которая сейчас проходит третий этап клинических испытаний. На этой стадии планируется привить около 50 тысяч человек. Но этого, к сожалению, недостаточно, чтобы серьезно повлиять на распространение заболевания. Для того чтобы гарантированно остановить эпидемический процесс, необходимо привить эффективной вакциной 95-97 процентов населения. Вакцинацию подобных масштабов трудно себе представить, даже с учетом того, что, по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в мире ведутся работы по созданию около 140 вакцин от COVID-19. Вакцинация поможет привитым либо не заболеть, либо перенести болезнь в легкой форме. Но быстро полную победу человечества над вирусом она не обеспечит.

Многие инфекционные заболевания человечеству удалось победить именно с помощью вакцинации. Однако некоторые из них — например, корь или полиомиелит, все же возвращаются. С чем это связано?

Владимир Никифоров: Окончательно победили мы, к сожалению, единственную болезнь — натуральную оспу. В 1978 году был зафиксирован последний на планете случай натуральной оспы, а 8 мая 1980 года ВОЗ официально заявила: «Мир и все его народы одержали победу над оспой». Остальные болезни, увы, все еще остаются с нами. В Советском Союзе активно боролись с корью с помощью вакцинации детей. Сначала все было хорошо, дети практически перестали болеть. Но через несколько лет резко выросла заболеваемость среди подростков призывного возраста. Оказалось, прививка от кори не дает пожизненного иммунитета. После этого начали прививать и взрослых, у которых «детские» болезни протекают гораздо тяжелее, чем у детей. Сегодня проводить массовую вакцинацию стало гораздо сложнее: отводов по медицинским причинам больше, круг противников прививок шире. Не способствует улучшению эпидемической ситуации и приток мигрантов из различных регионов, в которых давно не делают прививки.

Особенно нежелательно «подхватить» одновременно грипп и COVID-19, поэтому я бы советовал сейчас привиться от гриппа

Вакцинация от гриппа уже началась, но от большинства ОРВИ вакцин не существует и не будет создано в обозримом будущем. Как можно защититься от них?

Владимир Никифоров: Прежде всего следует соблюдать самые простые правила гигиены: тщательно мыть или дезинфицировать руки после любых контактов, в том числе с поверхностями — на улице, в магазине, транспорте и т.д. Важно вести здоровый образ жизни: больше двигаться, бывать на свежем воздухе, сбалансированно питаться, избегать серьезных стрессов. Впрочем, это универсальный рецепт для сохранения здоровья не только в сезон ОРВИ и гриппа.

Наступающий эпидемический сезон будет необычным из-за коронавируса. Особенно нежелательно «подхватить» одновременно грипп и COVID-19, поэтому я бы советовал сейчас привиться от гриппа, эффективные отечественные вакцины от него доступны бесплатно. Для лечения гриппа применяются специфические противовирусные препараты, действующие исключительно на его вирусы и рекомендованные ВОЗ. Но против других респираторных вирусов, которых насчитывается более 200, и они бесполезны. К тому же даже опытный врач без дополнительных исследований едва ли сможет по клинической картине отличить грипп от аденовирусной инфекции, например. Но в арсенале медицины существует и большой ряд противовирусных лекарств широкого спектра действия, которые применяются при ОРВИ, в том числе такие, например, препараты, как Ингавирин и Эргоферон. Они действуют не на сами вирусы, а повышают концентрацию интерферонов — белков, которые обладают противовирусной активностью — либо привнося их в наш организм, либо стимулируя их выработку им самим. И тогда уровня интерферонов будет достаточно для реального отпора вирусу.

Большинство противовирусных препаратов прошли все фазы необходимых клинических исследований по самым строгим международным правилам

Доказана ли эффективность подобных препаратов?

Владимир Никифоров: Буквально в одном из последних номеров The Journal of Immunology международная группа ученых описала механизм действия компонента препарата Эргоферон и его влияние на систему интерферонов. Большинство противовирусных препаратов прошли все фазы необходимых клинических исследований. Они участвовали в большом количестве двойных слепых рандомизированных плацебо-контролируемых исследованиях, то есть по всем строгим международным правилам. Мы даже провели независимую обобщенную оценку всех этих исследований и опубликовали ее результаты, хотя пока и не все. Я лично активно использую в своей практике подобные препараты. Но надо иметь в виду, что они рассчитаны на профилактику и лечение большинства известных ОРВИ, а также легких и среднетяжелых форм гриппа. При тяжелых осложнениях требуется специальная терапия.

Могут ли противовирусные препараты широкого спектра действия защитить от заражения коронавирусом нового типа?

Владимир Никифоров: На данный момент результатов полноценных исследований их воздействия на COVID-19 нет. Но лекарств со стопроцентно доказанной эффективностью против COVID-19, к сожалению, пока и вообще не существует. Врачи, которые столкнулись на практике с коронавирусом, пробовали применять различные имеющиеся на рынке препараты. Но, повторюсь, безопасного и эффективного средства от нового коронавируса пока нет. Будем надеяться, что они будут созданы так же успешно, как и наша первая в мире вакцина от коронавируса.

Исследование эффективности и безопасности препарата Ингавирин® 90 мг один раз в сутки для лечения гриппа и других острых вирусных инфекций у взрослых — Просмотр полного текста

Противовирусные препараты от гриппа (гриппа) и сопутствующая информация

Примечание. Предоставленная информация может измениться, и ее не следует использовать в качестве замены индивидуальной оценки поставщиком медицинских услуг или в качестве основного средства диагностики гриппа или определения лечения.

Введение

Термин грипп относится к заболеванию, вызываемому вирусом гриппа. Это обычно называется гриппом, но многие различные заболевания вызывают симптомы, похожие на грипп, такие как лихорадка, озноб, боли, кашель и боль в горле. Инфекция, вызванная вирусом гриппа, может вызывать различные формы заболевания, от легких симптомов простуды до типичного гриппа. Некоторые люди могут подвергаться повышенному риску бактериальных осложнений гриппа, таких как пневмония, инфекции ушей или носовых пазух или инфекции кровотока.

Существует ряд препаратов, одобренных FDA для лечения и профилактики гриппа. Ежегодная вакцинация является основным средством профилактики и борьбы с гриппом.

Антибиотики используются для лечения болезней, вызываемых бактериями, такими как ангина, туберкулез и многие виды пневмонии. Антибиотики не лечат вирусные заболевания, такие как грипп, простуда и боль в горле.

Грипп и COVID-19

Мировая пандемия заболевания под названием COVID-19 изменила взгляд людей на «гриппоподобные» симптомы.COVID-19 вызывается другим вирусом, не вирусом гриппа, а коронавирусом, который называется SARS-CoV-2. COVID-19 и грипп могут иметь одни и те же симптомы, но могут вызывать разные риски осложнений в некоторых разных группах риска и могут нуждаться в разных тестах, лечении и профилактических мерах. Эти сходства и различия могут быть важны для медицинских работников и людей, которые считают, что они могли подвергнуться воздействию или могут иметь одно из этих заболеваний. CDC опубликовал несколько сравнений между этими двумя заболеваниями; информация быстро накапливается и меняется.Возможное влияние мер по предотвращению воздействия COVID-19 на циркуляцию гриппа до конца не изучено. Ожидается, что одобренные в настоящее время противовирусные препараты от гриппа не принесут пользы от COVID-19.

Информация FDA о сезонном гриппе

Посетите Сезонный грипп (грипп) и FDA

Использование противовирусных препаратов для лечения гриппа

Вспышки гриппа происходят ежегодно и обычно достигают уровня эпидемии в какое-то время сезона.Обычно неосложненный грипп проходит с антивирусным лечением или без него, но может вызывать значительный дискомфорт и ограничивать активность, пока продолжается.

Многие люди с неосложненным гриппом принимают лекарства, отпускаемые без рецепта, отдыхают и принимают много жидкости, чтобы облегчить симптомы. Противовирусные препараты, отпускаемые по рецепту, могут сократить время, необходимое для улучшения симптомов, а некоторые также используются в отдельных ситуациях, чтобы снизить вероятность заболевания у людей, подвергшихся воздействию вируса гриппа.Своевременное медицинское обследование важно для раннего лечения гриппа, поскольку противовирусные препараты могут принести наибольшую пользу пациентам, которые начинают терапию в течение 48 часов после появления симптомов.

Симптомы гриппа могут имитировать другие инфекции, которые требуют другого лечения (например, бактериальная пневмония, которую следует лечить антибиотиками). Если симптомы серьезны или ухудшаются, или если имеется хроническое заболевание, важно пройти обследование у врача.Лабораторные тесты могут помочь обнаружить вирус гриппа. Однако отрицательный тест не всегда исключает возможность заражения вирусом гриппа, а положительный тест не исключает возможности других заболеваний и не заменяет клиническую оценку.

Осложнения гриппа могут включать бактериальные инфекции, вирусную пневмонию, а также аномалии сердечной и других систем органов. Люди с хроническими заболеваниями (включая ожирение), дети младше 5 лет (и особенно дети младше 2 лет), пациенты 65 лет и старше, жители учреждений долгосрочного ухода, коренные американцы и коренные жители Аляски, а также беременные женщины могут подвергаться повышенному риску осложнений.Осложнения гриппа и других заболеваний, напоминающих грипп, могут потребовать другого лечения и, в некоторых случаях, неотложной медицинской помощи. Противовирусные препараты не исключают риска развития осложнений. Некоторые осложнения могут быть опасными для жизни. Были сообщения о людях с другими типами инфекций, состояние которых ухудшалось из-за того, что они лечились только от гриппа, а не от других инфекций.

Вирусы гриппа могут стать устойчивыми к определенным противовирусным препаратам против гриппа, и все эти препараты обладают побочными эффектами.Если вы испытываете новые симптомы во время лечения или ваши симптомы не исчезают или ухудшаются во время лечения, обратитесь к врачу.

Для получения дополнительной информации и рекомендаций общественного здравоохранения о циркулирующем вирусе гриппа, включая образцы устойчивости к конкретным лекарствам, посетите сайт Flu.gov или веб-сайты CDC и ВОЗ.

Лекарства от гриппа, одобренные FDA

Примечание. Противовирусные препараты от гриппа не заменяют вакцину. Они используются в дополнение к вакцинам при планировании борьбы с гриппом в области общественного здравоохранения.Противовирусные препараты были одобрены для лечения острого неосложненного гриппа и для некоторых профилактических целей.

Есть четыре одобренных FDA противовирусных препарата от гриппа, рекомендованных CDC для использования против недавно циркулирующих вирусов гриппа.

Два старых препарата, амантадин (дженерик) и римантадин (флумадин и дженерик) исторически были одобрены для лечения и профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа А. Но многие штаммы вируса гриппа, включая вирус гриппа h2N1 2009 г., теперь устойчивы к этим препаратам.CDC не рекомендовал использовать амантадин и римантадин для недавно циркулирующих вирусов гриппа, хотя рекомендации могут измениться, если в будущем произойдет повторное появление определенных штаммов вирусов с типами чувствительности, благоприятствующими такому использованию.

Использование исследуемых препаратов против гриппа

Клинические испытания оценивают безопасность и эффективность неутвержденных продуктов или новое использование одобренных продуктов. Информацию об открытых клинических исследованиях можно найти на сайте ClinicalTrials.губ.

Ресурсы для информации о лекарствах

Информацию о правилах расширенного доступа, других аспектах разработки и анализа лекарств, а также ресурсы о статусе одобрения лекарств и составов можно найти по адресу:

Отчеты о нехватке лекарств

Контакты для получения информации о препаратах, применяемых для лечения гриппа

• Для получения информации о лекарствах, используемых для лечения гриппа, обращайтесь:
  Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов
  Центр оценки и исследований лекарственных средств
  Управление связи
  Отдел информации о лекарствах
  Телефон: 888-info-FDA | 301-827-4573
  Факс: 301-827-4577
  Электронная почта: druginfo @ fda.hhs.gov

Дополнительные ресурсы

Активность ингавирина (6- [2- (1H-имидазол-4-ил) этиламино] -5-оксогексановая кислота) против респираторных вирусов человека в экспериментах in vivo.

Pharmaceuticals (Базель). 2011 Dec; 4 (12): 1518–1534.

Зарубаев Владимир Васильевич

¹ НИИ гриппа, 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Гаршинина Анжелика Владимировна

¹ НИИ гриппа, д. 15/17 проф.Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Калинина Нелли Анатольевна

¹ НИИ гриппа, д. 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Штро Анна Андреевна

¹ НИИ гриппа, 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Беляевская Светлана Владимировна

¹ НИИ гриппа, д. 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Александр В.Слита

¹ НИИ гриппа, 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

Небольсин Владимир Евгеньевич

² ВалентаФарм, ООО, Россия, 119530, г. Москва, ул. Генерала Дорохова, 18, корп. 2,

Олег Иванович Киселев

¹ НИИ гриппа, 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

¹ НИИ гриппа, д. 15/17 проф. Ул. Попова, Санкт-Петербург 197376, Россия

² ВалентаФарм, ООО119530, Москва, Россия,

, ул. Генерала Дорохова, 18, корпус 2, Поступила 31.08.2011; Пересмотрено 16 ноября 2011 г .; Принято 18 ноября 2011 г.

Abstract

Респираторные вирусные инфекции — самая частая причина медицинских консультаций в мире. Они могут быть связаны с широким спектром клинических проявлений, начиная от самоограничивающихся инфекций верхних дыхательных путей до более тяжелых состояний, таких как пневмония.В частности, в серьезных случаях грипп A приводит к пневмонии, которая особенно смертельна для пациентов с сердечно-легочными заболеваниями, ожирением, маленьких детей и пожилых людей. В настоящем исследовании мы демонстрируем защитный эффект низкомолекулярного соединения ингавирина (6- [2- (1 H -имидазол-4-ил) этиламино] -5-оксогексановая кислота) против гриппа A (h2N1). вирус, вирус парагриппа человека и аденовирусные инфекции человека у животных. В экспериментальных группах животных контролировали смертность, потерю веса, инфекционный титр вируса в тканях и морфологию тканей.Защитное действие ингавирина проявлялось в снижении инфекционного титра вируса в ткани легких, продлении жизни инфицированных животных, нормализации динамики веса на протяжении болезни, снижении смертности пролеченных животных по сравнению с животными. плацебо-контроль и нормализация структуры тканей. В случае заражения вирусом гриппа защитная активность ингавирина была аналогична таковой у контрольного соединения Тамифлю. Исходя из полученных результатов, ингавирин следует рассматривать как важную часть противовирусной профилактики и терапии.

Ключевые слова: грипп, вирус парагриппа, аденовирус, пандемия, ингавирин, антивирус, модель на животных

1. Введение

Респираторные вирусные инфекции являются наиболее частой причиной медицинских консультаций в мире. Они могут быть связаны с широким спектром клинических проявлений, начиная от самоограниченных инфекций верхних дыхательных путей и заканчивая более тяжелыми состояниями, такими как пневмония. Таким образом, профилактика этих инфекций и борьба с ними остаются основными клиническими целями.В настоящее время известно около 200 респираторных вирусов, которые можно сгруппировать в одно семейство ДНК-вирусов ( Adenoviridae ) и четыре семейства РНК-вирусов ( Orthomyxoviridae , Paramyxoviridae , Picornaviridae и Coronaviridae).

Вирус гриппа A (IAV) является высокоинфекционным агентом, вызывающим острые легочные заболевания. Вспышки инфекций, вызываемых высокопатогенным вирусом гриппа, и появление в 2009 г. новой пандемической ВГА вызвали новый интерес к исследованиям гриппа.По состоянию на май 2010 г. более 214 стран и заморских территорий или сообществ сообщили о лабораторно подтвержденных случаях ВГА h2N1 2009, включая более 18 097 смертельных случаев [1]. Противовирусные препараты занимают важную нишу в лечении этого заболевания [2,3]. Они нацелены на вирус-специфические компоненты и являются эффективным средством лечения при введении на ранней стадии инфекции или вскоре после контакта с вирусом [3].

В настоящее время для химиотерапии IAV приняты два основных класса противогриппозных препаратов.Производные адамантана (амантадин и римантадин) нацелены на ионный канал M2 IAV и не эффективны против вируса гриппа B [4]. Более того, быстрое появление лекарственной устойчивости среди вирусов гриппа с середины 1990-х годов значительно снизило эффективность этих соединений [5]. Все протестированные пандемические вирусы h2N1 также оказались устойчивыми к лекарствам [6].

Ингибиторы нейраминидазы (NAI, осельтамивир, занамивир и перамивир) обладают более широким спектром активности, включая вирусы гриппа A и B [7].Тем не менее, с 2007 года наблюдается быстрое появление и передача лекарственно-устойчивых вирусов [5,8,9]. Несколько штаммов, устойчивых к NAI, были также изолированы от пандемического вируса h2N1 [10]. Следовательно, существует потребность как в выявлении новых и эффективных противовирусных препаратов, так и в мониторинге чувствительности циркулирующих вирусов к противовирусным соединениям, используемым в клиниках.

Парамиксовирусы включают важные вирусы, связанные с инфекциями верхних и нижних дыхательных путей у людей.Среди них следует отметить респираторно-синцициальный вирус человека (RSV) и вирусы парагриппа человека (HPIV).

RSV является основной причиной заболеваний нижних дыхательных путей у недоношенных детей (≤35 месяцев гестации), младенцев в возрасте до 6 месяцев и пожилых пациентов, помещенных в лечебные учреждения. Результатом RSV-инфекции обычно являются легкие инфекции верхних дыхательных путей; однако более тяжелые состояния, такие как пневмония и бронхиолит, встречаются у 25–40% детей. Примерно 1% младенцев, инфицированных RSV, нуждаются в госпитализации [11,12].

Описаны четыре различных серотипа вирусов парагриппа человека [13]. Эти вирусы могут вызывать заболевания верхних дыхательных путей у людей всех возрастных групп, хотя маленькие дети в возрасте от 6 месяцев до 3 лет представляют более тяжелые заболевания [13].

Аденовирусы (AdV) — это вирусы без оболочки. Несмотря на мультиорганный тропизм, некоторые типы AdV имеют преимущественный тропизм для дыхательных путей и могут вызывать широкий спектр респираторных симптомов, включая насморк, фарингит, тонзиллит, бронхит и пневмонию.В целом, инфекции AdV являются легкими или проходят самостоятельно и проходят в течение двух недель без долгосрочных осложнений. Однако эти вирусы являются важной причиной смертности и заболеваемости у пациентов с ослабленным иммунитетом, включая новорожденных и реципиентов трансплантата костного мозга [11].

Некоторые соединения можно использовать для лечения инфекций RSV, AdV и HPIV. Рибавирин подавляет репликацию вируса с помощью нескольких механизмов, включая ингибирование вирусной полимеразы, ингибирование образования 5′-кэпа мРНК и ингибирование дегидрогеназы IMP, что приводит к снижению внутриклеточных концентраций GTP [14].Нет одобренных терапевтических средств против инфекций AdV. Однако некоторые противовирусные препараты широкого спектра действия, такие как рибавирин и нуклеозидный аналог цидофоир, использовались для лечения тяжелых инфекций Ad у хозяев с ослабленным иммунитетом [11]. Кроме того, для этой цели использовались ингибиторы слияния, антисмысловые олигонуклеоиды и стероиды, ни один из них не был одобрен для клинического применения.

Ранее было показано, что низкомолекулярное соединение Ингавирин [6- [2- (1 H -имидазол-4-ил) этиламино] -5-оксогексановая кислота, также известное ранее как Ингамин] обладает противогриппозным действием. активность против вирусов гриппа A (h4N2), A (H5N1) и B в модели на животных [15,16] и против пандемических штаммов вируса гриппа A / California / 04/2009 и A / California / 07/2009 [17 –19].В экспериментах с ИАВ h2N1 ингавирин снижал индуцированный вирусом цитопатогенный эффект в культуре клеток от 50 до 79% по сравнению с контрольными клетками. Мыши, инфицированные ИА h4N2 или h2N1 (2009) и получавшие ингавирин, продемонстрировали более низкую смертность (примерно 40%) и увеличенную среднюю продолжительность жизни (примерно 4 дня) по сравнению с животными, получавшими плацебо. Взятые вместе, эти данные позволяют предположить, что ингавирин является перспективным инструментом для лечения инфекций IAV, в частности, вызванных пандемическими вирусами.Более того, ингавирин продемонстрировал активность в экспериментах in vitro, и in vivo, , против аденовируса человека и вируса парагриппа [20,21]. Тем не менее точный механизм его клинической эффективности далек от полного понимания.

Здесь мы суммируем результаты исследований защитной активности ингавирина с использованием моделей летальной гриппозной пневмонии, вызванной пандемическим вирусом гриппа A (h2N1) 2009, легкой пневмонии, вызванной HPIV, и диссеминированной инфекции, вызванной аденовирусом, и представляем новые данные. о его противовирусной активности в отношении респираторных вирусов человека.На основании этих результатов можно сделать выводы о диапазоне его действия и дальнейшем применении против конкретных заболеваний.

2. Материалы и методы

2.1. Соединения

Ингавирин (6- [2- (1 H -имидазол-4-ил) этиламино] -5-оксогексановая кислота,) был предоставлен в чистом виде производителем (Valenta Pharmaceuticals, Москва, Россия). В качестве препаратов сравнения в экспериментах использовали тамифлю (осельтамивир фосфат, LaRoche, Швейцария), 6-азацитидин (Институт молекулярной биологии и генетики, Киев, Украина) и рибавирин (ICN Biochemicals, США).

2.2. Вирусы

Вирус гриппа A / California / 07/09 (h2N1) был получен из коллекции вирусов Исследовательского института гриппа. Перед экспериментами вирус был адаптирован к мышам посредством трех последовательных пассажей в ткани легких мышей с последующим пассажем через аллантоисную полость 10–12-дневных куриных эмбрионов и последним пассажем через мышей [22]. Гомогенат легких в девяти объемах стерильного физиологического раствора с фосфатным буфером использовался в качестве заражающего материала в дальнейших экспериментах.

Вирус парагриппа человека (hPIV) типа 3 (штамм HA1) и аденовирус человека (AdV) типа 5 были получены из коллекции вирусов Научно-исследовательского института гриппа и размножены в MA-104 (ATCC CRL-2378) или HEp-2. (ATCC CCL-23) соответственно при 36 ° C в 5% CO ₂ .

2.3. Животные

В экспериментах с вирусом гриппа использовали самок мышей Balb / c весом 16–20 г из лабораторной животноводческой фермы Рапполово. Сирийских хомяков, выведенных в НИИ гриппа, использовали для экспериментов с hPIV и AdV.Эксперименты на животных были запланированы в соответствии с принципами ухода за лабораторными животными ( Руководство по уходу и использованию лабораторных животных , National Academy Press: Вашингтон, округ Колумбия, США, 1996) и одобрены институциональным этическим комитетом.

2.4. Титрование вируса

Перед исследованием защитной активности ингавирина на животных адаптированный к мышам вирус гриппа был титрован на предмет его летального действия. Для этой цели мышей (по 10 в каждой экспериментальной группе) инокулировали интраназально под анестезией 50 мкл последовательных десятичных разведений (от 10 ^-1 до 10 ^-5 ) гомогената легких инфицированных вирусом мышей.Разведение, которое вызвало гибель 50% животных через 14 дней после заражения (LD ₅₀ ), рассчитывали, как описано ранее [23], и использовали в последующих экспериментах.

2,5. Защитная активность ИНГАВИРИНА

Для оценки противогриппозной активности ингавирина in vivo мышей инфицировали пятью LD ₅₀ (20 мышей) или одним LD ₅₀ (30 мышей) ранее титрованного вируса ( см. раздел «Титрование вирусов»). Ингавирин разводили в физиологическом растворе до доз 15, 20 или 30 мг / кг массы тела / день и применяли перорально через желудочный зонд один раз в день на первый, второй, третий, четвертый и пятый день после инфицирования (стр.я.). Чтобы изучить влияние схемы лечения на защитную активность, отдельные группы животных обрабатывали дважды (дни 1 и 2) ингавирином в дозе 30 мг / кг, а затем тремя дозами по 15 мг / кг (дни 3, 4 и 5). . Общее количество ингавирина, полученного животными в этой группе, было равно таковому в группе 20 мг / кг. Контрольный препарат Тамифлю (конечная доза 20 мг / кг массы тела) растворяли в физиологическом растворе и вводили 20 мышам (пять LD ₅₀ ) или 30 мышам (одна LD ₅₀ ) перорально в объеме 200 мкл.Контрольным животным вводили стерильный физиологический раствор.

Животных всех опытных групп взвешивали ежедневно. Подсчитывали смертность в каждой группе животных. Каждую группу ежедневно проверяли на наличие мертвых животных в течение двух недель после инокуляции. На основании полученных данных были рассчитаны процент смертности, индекс защиты (соотношение смертности в контрольной группе к смертности в экспериментальной группе) и средний день смерти (MDD).

На третий день p.i. десять мышей из каждой группы, инфицированной одним вирусом LD ₅₀ , были умерщвлены, их грудная клетка открыта и легкие изолированы.Пять легких использовали для титрования вируса и пять других для гистологического исследования (см. Раздел «Гистологическое исследование»).

Для определения инфекционного титра вируса в легочной ткани легкие гомогенизировали в десяти объемах стерильного физиологического раствора с фосфатным буфером. Серийные разведения (10 ^-1 -10 ^-7 ) готовили из каждого гомогената. Клетки MDCK, выращенные в 96-луночных планшетах, инокулировали 0,2 мл каждого разведения и инкубировали при 36 ° C в течение 48 часов в 5% CO ₂ .После инкубации собирали супернатант и тестировали на наличие вируса гриппа путем смешивания жидкости в круглодонных лунках с равными объемами 1% суспензии куриных эритроцитов в физиологическом растворе. Титр вируса в легких считался конечным разведением, когда он вызывал положительную реакцию гемагглютинации в лунке, и титр вируса выражался в log ₁₀ EID ₅₀ /20 мг ткани. Активность соединений оценивали по их способности снижать инфекционный титр вируса в легочной ткани.

Для изучения анти-hPIV активности ингавирина сирийских хомяков в возрасте от четырех до пяти недель инфицировали 0,05 мл (10 ⁴ TCID ₅₀ ) вируса парагриппа человека (hPIV) интраназально, как описано в [24]. Ингавирин применяли, как описано выше. В 3-й и 7-й день р.и. животных умерщвляли и их легкие использовали для титрования вируса в клетках MA-104 и гистологического анализа (см. ниже), соответственно. Титр вируса определяли методом ELISA с использованием моноклональных антител против hPIV (PPDP Ltd., Санкт-Петербург, Россия).

Анти-AdV активность соединения тестировали, как описано ранее [25].

2.6. Гистологическое исследование

Легкие животных фиксировали в 4% -ном фосфатно-солевом буфере формальдегида, обезвоживали в стандартном этаноле и заливали парафином. Вырезали срезы размером четыре микрометра и окрашивали гемотоксилин-эозином.

В случае гриппозной инфекции клетки бронхиального эпителия были разделены на четыре морфологически различных категории: (i) интактные клетки без признаков репликации вируса; (ii) клетки с начальными стадиями образования вирусспецифических включений; (iii) клетки с развитыми вирусными включениями; и (iv) мертвые клетки, которые выглядели как промежутки между другими клетками с денудацией базальной мембраны.Рассчитывались доли каждой категории клеток среди клеток эпителиального слоя бронхов. Морфометрические значения оценивали два независимых наблюдателя.

3. Результаты

3.1. Инфекция гриппа

Инокуляция животных адаптированным вирусом гриппа привела к развитию гриппозной пневмонии. Клинические признаки заболевания были типичны для тяжелой формы гриппа и включали атаксию, тремор, одышку, а также снижение потребления воды и пищи, что привело к похуданию.В 15 день р.и. в зависимости от заражающей дозы вируса наблюдалась гибель 55–90% инфицированных животных.

Защитную активность ингавирина оценивали при применении один раз в день в течение пяти дней после инокуляции вируса. Не наблюдалось неспецифической смертности в контрольных группах неинфицированных животных, получавших физиологический раствор, и неинфицированных мышей, получавших ингавирин. Применение ингавирина привело к снижению смертности (до 18–67%), а также увеличению среднего дня смерти (1,2–4.1 день) по сравнению с контрольными животными (в зависимости от дозы вируса и соединения). Мыши, получавшие эталонное соединение Тамифлю, также продемонстрировали значительно более низкую смертность (индекс защиты 80%) и увеличение средней продолжительности жизни (до 5,4 дней) по сравнению с контрольными значениями (). Кроме того, лечение животных ингавирином, аналогично контрольному соединению Тамифлю, привело к нормализации динамики веса животных (), что привело к аналогичным профилям веса по сравнению с неинфицированными животными.

Динамика массы тела мышей при пневмонии, вызванной вирусом гриппа A / California / 7/09 (h2N1) v.

Таблица 1

Защитная активность ингавирина против гриппа A (h2N1) 2009. Значения p <0,05 выделены жирным шрифтом.

Как показано титрованием вируса в легких мышей на третий день pi вирус реплицировался в легочной ткани до 10 ^5,1 EID ₅₀ /20 мг ткани. Применение контрольного соединения Тамифлю снизило вирусный титр примерно в 320 раз (10 ^2.6 EID ₅₀ /20 мг ткани). Обработка животных ингавирином также приводила к снижению титров вируса (примерно 10 ^3,5 EID ₅₀ /20 мг), что статистически идентично активности осельтамивира ().

Чтобы оценить влияние ингавирина на структуру легочной ткани, морфологический анализ выполняли на третий день p.i. Легкие инфицированных вирусом мышей были уплотненными и отечными. У всех инфицированных мышей было экссудативное диффузное альвеолярное повреждение с интерстициальным отеком, фибринозным экссудатом в альвеолах, воспалительной инфильтрацией, некрозом бронхиолярного эпителия и шелушением.Клетки бронхиального и бронхиолярного эпителия содержали вирусные включения или отсутствовали при денудации базальной мембраны [].

Патологии мышей, интраназально инокулированных адаптированным к мышам вирусом гриппа A / California / 7/09 (h2N1) v на 3-й день p.i. ( a ) Легкие мыши, получавшей плацебо. Большая зона пневмонии с интенсивным экссудатом в просвете бронхов, тяжелый нейтрофильный гистиоцитарный альвеолит; ( b ) Лимфоцитарный перибронхит легкой степени с альвеолитом легкой степени у мышей, получавших ингавирин в дозе 30 мг / кг массы тела.Клетки бронхиального эпителия интактны, экссудат умеренный в просвете бронхов; ( c ) Лимфоцитарный перибронхит легкой степени с альвеолитом у мышей, получавших осельтамивир в дозе 20 мг / кг; ( d ) Легкие интактных мышей. Никаких признаков воспаления или разрушения клеток. Гематоксилин-эозин, × 200.

Применение ингавирина, аналогичного контрольному соединению Тамифлю, привело к нормализации структуры легочной ткани, в частности, к ограничению отека и повреждения альвеол, уменьшению количества мусора в просвете бронхов и защите бронхиального эпителия от смерти [, ].

Чтобы изучить механизм защитной активности ингавирина, мы более внимательно изучили клетки бронхиального эпителия, которые считаются основными мишенями для вируса гриппа. Морфометрический анализ клеток показал, что почти 100% эпителиальных клеток интактных мышей представлены интактными клетками.

Инокуляция вирусом гриппа привела к увеличению количества клеток трех других групп (, т.е. , клетки с начальными включениями, расширенными включениями и мертвыми клетками), что свидетельствует о сильном цитотоксическом действии вируса.Применение как ингавирина, так и эталонного соединения осельтамивира сильно уменьшало количество мертвых клеток и увеличивало количество интактных клеток бронхиального эпителия. На основании этих результатов мы предполагаем, что это соединение способно защищать клетки от повреждений, вызванных вирусом ().

Цитопротекторная активность ингавирина в клетках бронхиального эпителия после заражения адаптированным к мышам вирусом гриппа A / California / 7/09 (h2N1) v (3 день p.i.).

3.2. Инфекция вирусом парагриппа

Заражение сирийских хомяков вирусом парагриппа человека (hPIV) приводит к легкому бронхиту, бронхиолиту и пневмонии без летального исхода.Вирус может быть извлечен из легких на 3-й день после инъекции, а специфическое повреждение тканей можно наблюдать на 7-й день.

Как показывает титрование вируса, применение ингавирина и эталонного соединения рибавирина привело к снижению инфекционного титра hPIV в легких. ткань. Рибавирин продемонстрировал самую высокую активность в снижении титра, хотя обе дозы ингавирина также привели к статистически значимому снижению ().

Таблица 2

Инфекционная активность hPIV в легочной ткани сирийских хомяков после применения ингавирина.

У хомяков, инфицированных hPIV, не было обнаружено видимых признаков болезни до умерщвления, но гистологически наблюдалась стойкая пневмония. Поражения легких состояли из рассеянных эндобронхиальных экссудатов, состоящих из мононуклеарных и полиморфно-ядерных клеток, перибронхиальных и периваскулярных инфильтратов круглых клеток и обширных областей интерстициальной пневмонии. Бронхиальный эпителий имел специфический вид, содержащий группы высоких гигантских клеток, выступающих в просвет бронхов [].Животные, получавшие ингавирин и рибавирин, продемонстрировали почти нормальную структуру легочной ткани с небольшим количеством инфильтрирующих клеток [].

Структура легочной ткани сирийских хомяков на 7-е сутки после инокуляции hPIV-3 с ( c , d ) или без ( a , b ) обработки ингавирином. a , c — альвеолы, b , d — бронхиальный эпителий. Гематоксилин-эозин, × 100 ( a ), × 400 ( b , c , d ).

3.3. Инфекция аденовирусом человека

Поскольку аденовирусы человека не вызывают респираторных инфекций, передаваемых по воздуху у животных, мы изучили противовирусную активность ингавирина, используя ранее разработанную модель диссеминированной аденовирусной инфекции новорожденных сирийских хомяков, вызываемой аденовирусом человека 5 типа [25]. Подобно инфекции hPIV, защитную активность оценивали титрованием вируса в органах-мишенях и гистологическим анализом архитектуры ткани.

Подкожное заражение новорожденных сирийских хомяков привело к репликации вируса в легких и печени животных.Результаты титрования вируса в клетках HEp-2 на 3-е сутки p.i. резюмируются в.

Таблица 3

Инфекционная активность AdV в печени и легких сирийских хомяков после применения ингавирина.

Как видно, лечение AdV-инфекции контрольным соединением 6-AC приводило к ограничению репликации вируса как в печени, так и в легких животных, которые согласуется с нашими предыдущими результатами [25].Применение ингавирина приводило к умеренному (примерно один десятичный порядок), но статистически значимому снижению титра вируса как в печени, так и в легких животных.

При гистологическом исследовании печени инфицированных животных выявлено очага, очага некроза. Морфологически это были участки деструкции паренхимы, вызванные специфическим поражением гепатоцитов, и неспецифическим разрушением ткани из-за местной воспалительной реакции. Специфические поражения клеток печени проявлялись в увеличении ядер клеток, их деформации и появлении эозинофильных и базофильных вирусоспецифичных ядерных телец включения.Реактивные изменения ткани были вызваны воспалительным разрушением гепатоцитов и инфильтрацией тканей лейкоцитами. Инфицированные животные, получавшие ингавирин, имели более мелкие очага воспаления и интактных гепатоцитов, в отличие от гепатоцитов с высокой вакуолизацией у контрольных животных ().

Патология AdV-индуцированного гепатита в печени новорожденных сирийских хомяков на 3-е сутки p.i. Большой очаг воспаления с многочисленными AdV-инфицированными клетками (стрелки), вакуолизация гепатоцитов ( a , b ) у контрольных животных, небольшой очаг воспаления и интактная паренхима ( c ) у животных, получавших ингавирин.Гематоксилин-эозин, × 400.

Чтобы количественно оценить защитный эффект ингавирина, мы измерили размер очагов некроза в печени и подсчитали количество AdV-инфицированных клеток в каждом очаге ().

Таблица 4

Влияние ингавирина на течение адВ-индуцированного гепатита у новорожденных сирийских хомяков.

По данным морфометрического анализа, применение среднего размера из очагов вирус-индуцированного воспаления и сильно уменьшило количество инфицированных клеток.Интересно, что эффект более высокой дозы препарата (45 мг / кг / день) был меньше, чем эффект более низкой дозы (30 мг / кг / день), что свидетельствует об особом режиме активности этого соединения.

4. Обсуждение

В настоящем исследовании мы показали защитный эффект низкомолекулярного соединения Ингавирин против летальной инфекции вируса гриппа, вызываемой вирусом пандемического гриппа A (h2N1), у мышей и нефатальных патологий сирийских хомяков. вызвано вирусом парагриппа человека и аденовирусом человека.Было исследовано влияние дозы на защитную активность соединения и репликацию вируса в ткани. Защитное действие ингавирина проявлялось в снижении инфекционного титра вируса в легочной ткани, продлении жизни инфицированных животных, нормализации динамики веса в ходе заболевания, снижении смертности животных, получавших лечение, по сравнению с контрольной группой плацебо и нормализация структуры тканей легких и печени. В случае заражения гриппом защитная активность ингавирина оказалась сходной с таковой у контрольного соединения Тамифлю.

В наших экспериментах ингавирин продемонстрировал защитную активность против летальной гриппозной пневмонии у мышей. В некоторых дозах защитный эффект был равен активности осельтамивира, который является признанным на международном уровне препаратом, который доказал свою эффективность против этого IAV. В целом наши результаты хорошо согласуются с ранее полученными данными [15–19], где было показано, что ингавирин обладает защитным действием против вирусов гриппа A и B.

Krug и Aramini [26] предположили, что два возможных домена Нуклеопротеины вируса гриппа (NP), один из которых расположен в хвостовой петле, а другой — в РНК-связывающей бороздке, обнаруженной между доменами головы и тела на внешней поверхности тримера NP, представляют собой потенциальные противовирусные мишени.Расположенный в хвостовой петле домен имеет решающее значение для олигомеризации NP, что, в свою очередь, необходимо для эффективной транскрипции и репликации вирусного генома. Следовательно, инактивация этого домена может быть эффективной для подавления репликации вируса. Действительно, некоторые эксперименты предполагают, что ингавирин нацелен на нуклеопротеин гриппа (NP). В недавнем исследовании [27] было показано, что ингавирин взаимодействует с NP вируса гриппа, предотвращая, таким образом, олигомеризацию NP, необходимую для репликации вируса. В третьем исследовании несколько аналогов микаламида А были идентифицированы как NP-направленные ингибиторы репликации вируса гриппа [28].Было показано, что эти соединения связываются с N-концевым 13-аминокислотным хвостом, который опосредует ядерный транспорт NP и его связывание с вирусной РНК. Более того, Kao et al. [29] сообщил об идентификации низкомолекулярного соединения, нуклеозина, которое запускает агрегацию NP и ингибирует его ядерное накопление. Нуклеозин препятствовал репликации вируса гриппа A in vitro с наномолярной концентрацией и защищал мышей, зараженных летальными дозами птичьего гриппа A H5N1.Эти данные предполагают, что связывание соединения с этой мишенью может ингибировать репликацию вируса путем ингибирования функций NP. Ни аналоги микаламида А, ни нуклеозин не демонстрируют структурного сходства с ингавирином, что позволяет нам предположить, что во взаимодействии с ингавирином может быть задействован другой домен (ы) вирусного NP.

С другой стороны, было показано, что применение ингавирина приводит к изменению морфологии вирионов, обнаруживаемых в бронхоальвеолярном лаваже инфицированных мышей [30].Контрольные животные продуцировали вирионы в основном сферической формы, тогда как у животных, получавших ингавирин, вероятно, образовывались нитчатые частицы с пониженной инфекционностью. Эти результаты предполагают, что ингавирин может вмешиваться в процесс сборки и / или отпочкования вируса, что приводит к снижению вирусной нагрузки.

В нашем исследовании активность осельтамивира оказалась ниже, чем в аналогичных экспериментах Smee et al. [31]. Это может быть связано с более высокой дозой вируса, другим вирусом, используемым в наших экспериментах, и другим графиком применения препарата (один раз в день вместо двух в [31]).В то же время прямое противовирусное действие ингавирина, определяемое по снижению инфекционного титра вируса в легочной ткани, оказалось в десять раз меньше, чем у Тамифлю, несмотря на аналогичный уровень защиты от летальности (). Это противоречие может указывать на то, что другие механизмы, помимо прямой противовирусной активности, могут способствовать результирующей защите животных от летальности, вызванной IAV.

Инфекция вирусом гриппа варьируется по степени тяжести от бессимптомной инфекции до серьезного заболевания с системными особенностями.Тяжелая форма гриппа проявляется вирусоспецифическими реакциями с дальнейшим развитием реактивных процессов. Эти процессы индуцируются реплицирующимся вирусом в клетках-мишенях и реализуются через механизмы хозяина, включая иммунные реакции, окислительный стресс и другие свободнорадикальные процессы, усиление протеолитической активности, резкое повышение уровня провоспалительных цитокинов и многое другое [32].

В клиниках одной из основных причин тяжелой и сложной гриппозной пневмонии, в том числе со смертельным исходом, является несвоевременное и / или неадекватное лечение [33,34].В этих случаях течение заболевания определяется механизмами, которые изначально индуцируются вирусом, но в конечном итоге реализуются хозяином, включая, в частности, тяжелое воспаление («цитокиновый шторм») [35–37]. Эксперименты с использованием нокаутных мышей, инфицированных вирусом гриппа, с инактивированными генами воспалительных путей, такими как интерлейкин 1α / β, хемокиновые рецепторы макрофагов CCR5 и CCR2, циклооксигеназа 1 и 2 [38-40] ясно продемонстрировали, что помимо уровня вируса ‘репликация в легких, интенсивность реакций хозяина в значительной степени влияет на течение и исход болезни.Поэтому в тяжелых случаях гриппа в комплексную терапию следует включать как прямые противовирусные, так и патогенетические препараты, в частности те соединения, которые ограничивают цитокиновый шторм, отеки легких, воспаление и повреждение тканей [41]. Например, недавно была продемонстрирована высокая защитная активность 7-гидроксикумарина (7-HC) [42]. Было продемонстрировано, что 7-HC обладает противовирусными свойствами благодаря своей способности снижать уровень провоспалительных цитокинов у инфицированных животных, тем самым облегчая тяжелую инфекцию гриппа.В то же время 7-HC не снижал уровень репликации вируса в анализах уменьшения бляшек, что позволяет предположить, что его защитная активность, включая снижение репликации вируса в легких мышей, имеет сложную природу и может опосредоваться сигнальными и реактивными путями клеток. Можно предположить, что, помимо способности напрямую снижать уровень репликации вируса в легких (), ингавирин может обладать схожими свойствами, основываясь на результатах исследования морфологии легких мышей, показывающих, что лечение ингавирином значительно снижает степень повреждения тканей. , воспаление и отек (,).Дальнейшие исследования влияния ингавирина на различные патогенетические пути были бы полезны для понимания механизма его действия. Ингавирин следует рассматривать как важную часть противогриппозной профилактики и терапии, особенно в тяжелых случаях заболевания.

В наших экспериментах ингавирин также продемонстрировал противовирусную активность против двух других используемых вирусов, hPIV и AdV [19,20]. Поскольку эти вирусы филогенетически отличаются друг от друга и отсутствуют вирусные компоненты, общие для всех трех вирусов, использованных в исследовании, можно сделать вывод, что это лекарство нацелено на компоненты и пути, ответственные за развитие клеточной и тканевой патологии во время вирусной инфекции.Действительно, во всех трех случаях он продемонстрировал высокую степень цитопротекции и способность нормализовать архитектуру ткани. Его применение предотвращало гибель инфицированных вирусом гриппа клеток бронхиального эпителия, hPIV-индуцированную цитопатологию в легких и вирус-индуцированную вакуолизацию гепатоцитов во время AdV-инфекции у хомяков. Более того, в наших предыдущих экспериментах [21] мы продемонстрировали способность ингавирина предотвращать вызванное AdV повреждение клеток в культуре. Несмотря на образование типичных внутриядерных вирус-специфических включений, клетки, обработанные ингавирином, не образовывали вакуолей в цитоплазме и других морфологических признаков цитопатогенности.Следовательно, в дополнение к другим механизмам противовирусного действия, ингавирин обладает цитопротекторной активностью, которая предотвращает разрушение инфицированных клеток и поддерживает функцию органа-мишени, тем самым сводя к минимуму вызванное вирусом повреждение тканей и симптомы токсичности в ходе болезнь.

Следует отметить, что токсичность Ингавирина не наблюдалась при дозах до 3000 мг / кг. Также никаких признаков эмбриотоксичности не наблюдалось в предыдущих исследованиях [43]. Для сравнения, LD ₅₀ для Тамифлю оценивается в 100–250 мг / кг в зависимости от пути и схемы инокуляции и вида животных [44].Более того, в клинических исследованиях Ингавирин не выявил побочных эффектов при применении у больных гриппом [45]. Таким образом, ингавирин можно рассматривать как нетоксичное соединение с низким риском передозировки.

5. Выводы

Взятые вместе, наши данные позволяют предположить, что Ингавирин является нетоксичным противовирусным средством широкого спектра действия со сложным механизмом действия. Дальнейшее изучение тонкого механизма его защитной активности позволит оптимизировать структуру препарата и, возможно, разработать новый класс соединений для профилактики и лечения вирусных инфекций.

Благодарности

Мы благодарим Татьяну Д. Смирнову из НИИ гриппа за поставку клеточных линий. Мы также благодарим Лидию Носач из Института микробиологии и вирусологии, Киев, Украина, и Инну Алексееву из Института молекулярной биологии и генетики, Киев, Украина, за любезно предоставленные 6-азацитидин для экспериментов.

Конфликт интересов

Конфликт интересов в связи с данной публикацией обнаружен не был.

Ссылки и примечания