Биорегуляторы яичников: Пептиды для яичников | Купить пептидные биорегуляторы VITUAL для здоровой жизни

Женолутен в помощь яичникам или как восстановить женское здоровье

Яичники — орган женской половой и эндокринной систем. В них созревают фолликулы, а также вырабатываются половые гормоны, в том числе, главный женский гормон — эстроген. Он влияет на функцию деторождения, обменные процессы, состояние сердца, сосудов, мышечной и костной ткани. Поэтому здоровые яичники обеспечивают женщине не только нормальную фертильность, но также хорошее самочувствие, упругую кожу, блестящие волосы, стройную фигуру и крепкие кости.

Вернуть здоровье яичникам и предупредить их раннее старение поможет препарат «Женолутен». Это негормональное средство на основе пептидов, выделенных из яичников молодых животных. Как все пептидные препараты, «Женолутен» восстанавливает функцию органа естественным образом, активизируя процесс его клеточного обновления. «Женолутен» вы можете купить тут, а также ознакомиться с подробным описанием этого препарата.

Что такое пептидные биорегуляторы

Пептиды (биорегуляторы) — это короткие цепочки аминокислот числом от двух до 20.

Их основная функция — активация внутриклеточного синтеза белка. Пептид сопоставляется с участком ДНК, запуская процесс производства белка определенного вида. Большая часть пептидов производится организмом, гораздо меньшая — поступает с пищей.

Пептиды — тканеспецифичные молекулы. Это значит, что они запускают производство белка, который относится к определенному виду ткани.

С возрастом, под воздействием неблагоприятных факторов (экологии, стрессов, вредных привычек и так далее) количество пептидов в организме падает, а, значит, цикл обновления ткани нарушается. Это приводит к скорейшему износу органа, снижению его функций и развитию болезней.

Как пептидные препараты помогают оздоровить организм

Регуляторные пептиды, а также их способность активировать синтез белка, были открыты учеными геронтологами В. Х. Хавинсоном и В. Г. Морозовым в 1970–1980 годах. По имени одного из исследователей биорегуляторы также называют пептидами Хавинсона.

На базе Санкт-Петербургского Института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН были разработаны биорегуляторные препараты. Они бывают натуральными, выделенными из органов молодых животных, — их называют цитомаксами, или синтезированными из растений — это цитогены.

Каждый из препаратов имеет свой орган-мишень, на который направлено его воздействие. Биорегуляторы пополняют недостаток собственных пептидов и запускают процесс синтеза белка в этом органе. Таким образом происходит клеточное омоложение, регенерация ткани и восстановление утраченной функции органа или целой системы.

Употребление препаратов на основе пептидов Хавинсона работает подобно обновлению программного обеспечения нашего «клеточного компьютера». Если проводить это «обновление» регулярно, принимая препараты, это может помочь работать организму бесперебойно, сохраняя молодость долгие годы.

Зачем принимать «Женолутен»

Яичники вырабатывают гормоны — эстроген и прогестерон, без которых невозможно зачатие и вынашивание ребенка. Нарушения их работы может привести к бесплодию, воспалительным процессам, доброкачественным и даже злокачественным новообразованиям женских половых органов.

Кроме того, эстроген и прогестерон выполняют много других задач, не относящихся к репродуктивной сфере.

Гормоны яичников участвуют в таких процессах:

• метаболизме белков, жиров и углеводов;
• усвоении и утилизации кальция;
• выработке коллагеновых волокон;
• синтезе эпителиальной ткани.

Снижение функции яичников приводит не только к проблемам деторождения, но также остеопорозу, мышечной слабости, опущению внутренних органов, сердечно-сосудистым заболеваниям, дистрофии и сухости влагалища, ухудшению памяти, увяданию кожи, истончению и выпадению волос, ожирению, сахарному диабету. Поэтому так важно поддерживать здоровье яичников в норме и предотвращать их раннее истощение.

«Женолутен» был разработан для комплексного восстановления половой сферы у женщин репродуктивного возраста. Он может помочь улучшить функции половой системы у пациенток старших возрастных групп.

Препарат содержит биорегуляторные пептиды, выделенные из яичников молодых животных. Он избирательно воздействует на клетки яичников, запуская их регенерацию, нормализуя тканевые обменные процессы, активизируя созревание фолликулов, восстанавливая менструальный цикл.

Кому рекомендован прием «Женолутена»

Его назначают при таких расстройствах:

• снижении функции яичников;
• расстройстве менструального цикла;
• эндометриозе;
• гормонозависимых проблемах зачатия и вынашивания;
• тяжелом протекании климакса;
• снижении полового влечения.

Препарат может помочь не только для коррекции уже имеющихся проблем, но и для профилактики раннего истощения женской половой сферы. Его профилактический прием можно начинать с 35 лет.

Как все биорегуляторные средства, «Женолутен» имеет высокий профиль безопасности и не вызывает аллергии. Побочных эффектов и противопоказаний в период исследований и на протяжении многолетнего использования выявлено не было. Однако перед началом курса «Женолутена» рекомендуется проконсультироваться с врачом.

ОВАРИАМИН — пептидный биорегулятор яичников.

Описание

ОВАРИАМИН® Рекомендуется применять для восстановления функции яичников при различных нарушениях, включая негативные проявления климактерического периода у женщин. Пожилым людям также рекомендуется поддерживать функцию яйцеклеток.

Овариамин — это комплекс нуклеопротеидов, избирательно действующий на клетки яичников, способствуя их ускоренному функциональному восстановлению.

Овариамин — природный пептидный биорегулятор, разработанный для восстановления и поддержания функций женской репродуктивной системы. Помогает устранить нарушения овуляции, нормализовать менструальный цикл и восстановить гормональный фон. Овариамин улучшает обмен веществ в клетках и тканях яичников, тем самым восстанавливая их функции, нормализует репродуктивную функцию при бесплодии, снижает метаболические, психоэмоциональные, вегетативные нарушения при климаксе. Пептиды избирательно действуют на клетки репродуктивной системы и улучшают ее функции, тем самым ускоряя восстановление функций яичников.

Овриамин рекомендуется для лечения женского бесплодия, уменьшения симптомов менопаузы и поддержания функции яичников.

Овариамин — это комплекс белков и нуклеопротеидов, полученных из яичников молодых животных. Комплекс оказывает избирательное действие на клетки репродуктивной системы, ускоряя процессы восстановления и улучшая функции яичников. После попадания в организм пептиды распадаются на аминокислоты и нуклеопротеины, которые используются клетками яичников для синтеза новых незаменимых белков, тем самым производя новые клетки, восстанавливая поврежденные клетки, стимулируя их рост и оптимальное функционирование. Действие Овариамина улучшает синтез гормонов и выработку гамет яичниками, усиливает стероидогенную функцию и снижает гонадотропную функцию аденогипофиза. Природные пептиды не вызывают побочных эффектов и интоксикации, не накапливаются в организме и не имеют синдрома отмены.

Применение:

• уменьшает негативные симптомы менопаузы,
• нормализует работу яичников и помогает улучшить их функцию,
• восстановить репродуктивную функцию при бесплодии у женщин,
• лечить острый и хронический аднексит,
• нормализовать менструальный цикл,
• предотвратить преждевременную недостаточность яичников,
• уменьшить ановуляторный синдром,
• до и после операции на яичниках,
• бороться с гиперандрогенией яичников,
• уменьшить синдром менопаузы.

Ингредиенты:

комплекс полипептидов и нуклеиновых кислот, полученных из яичников молодняка — 10 мг; сахароза, картофельный крахмал, стеарат кальция, метилцеллюлоза, энтеросолюбильное покрытие

Дозировка:

ЦИТАМИН рекомендуется принимать за 10-15 минут до еды по 1-3 капсулы или таблетки 2-3 раза в день в течение 10-15 дней.

Повторный курс рекомендуется через 3-6 месяцев.

Форма выпуска:

155мг/таб, 40 таблеток

Гарантирована аутентичность и качество:

100% Оригинал от ГЕРОФАРМ (Российская Федерация)

Разработка и производство:

ГЕРОФАРМ (Российская Федерация)

Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии

Женолутен | биорегулятор яичников

Регуляция функции женской репродуктивной системы

Женолутен — комплекс пептидов, выделенных из яичников молодых, здоровых животных. Выделенные пептиды яичников обладают направленным и избирательным действием на различные клетки яичников женщины, нормализуют метаболизм в этих клетках, регулируют их функциональную активность, способствуют созреванию яйцеклеток, восстанавливают циклическую деятельность яичников.

Оптимальное функционирование женской половой системы непосредственно связано с состоянием клеток яичников. Для оптимального функционирования клеток необходимо их оптимальное снабжение питательными веществами, такими как витамины и минералы, и пептидами. Пептиды являются составляющими молекул белков и в процессе метаболизма белков (разпад белка на мелкие фракции = пептиды) они высвобождаются. Пептиды — это информационные молекулы, которые влияют на экспрессию генов и запускают процесс синтеза белка. Синтез белков, это жизненно важный процесс. Он необходим, чтобы клетки могли рости и выполнять свои ключевые функции.

В молодом организме, пептиды яичников образуются в достаточном количестве. К сожалению, с увеличением нагрузок на организм, а также с повышением возраста, интенсивность синтеза белка в организме снижается. Это значит что, чем старше мы становимся или чем экстремальней являются те условия, в которых работают женские половые органы, тем меньше пептидов яичников образуется в женском организме, что сказывается на снижении интенсивности синтеза белка. Дефицит пептидов яичников приводит к нарушениям функций клеток яичников, а также может привести к потери некоторых функции выполняемых этими клетками. В таких ситуациях полезно целенаправленно поддерживать клетки яичников.

Одним из наиболее эффективных способов противодействия недостатку пептидов яичников является применение пептидов ткани яичников животного происхождения. Пептиды у всех млекопитающих одинаковы и принимаются человеческим организмом как эндогенные (собственные) вещества. Кроме того, пептиды имеют тканеспецифические свойства. Они работают только в той ткани, из которой они были первоначально выделены.

Биорегулятор Женолутен — это экстракт ткани яичников в состав которого входят основные пептиды яичников. Для экстракции пептидов используются только ткани яичников телят или свиней не старше 11-месячного возраста из хозяйств, в которых не регистрировались заболевания, опасные для человека, в том числе ГЭКРС (англ. BSE).

При приеме биорегулятора Женолутен происходит восполнение пула регуляторных пептидов, вырабатываемых клетками яичников. Таким образом, прием биорегулятора Женолутен способствует нормализации уровня пептидов в клетках тканей яичников. Это, в свою очередь, приводит к нормализации обмена веществ в клетках яичников и регулированию их функции. Таким образом, прием препарата способствует оптимизации функции яичников, препятствует развитию атрофических процессов в яичниках, а также снижает риск развития патологических состояний в яичниках.

Натуральные пептидные биорегуляторы животного происхождения

В результате многолетних исследований Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии ученым удалось разработать абсолютно новую высокоэффективную технологию выделения из органов и тканей животных низкомолекулярных пептидных фракций. Эта технология позволила создать новый класс натуральных геропротекторных препаратов — пептидных биорегуляторов. Использование физиологически активных коротких пептидов, на основе которых зделаны эти пептидные биорегуляты, рекомендуется применять в любом возрасте. Эти биорегуляторы позволяют эффективно проводить профилактику преждевременного старения и поддержывать организм как при старении так и при повышенных на него нагрузках. Пептидные биорегуляторы рекомендуются также для применения в комплексе с другими препаратами для лечения заболеваний ассоциированных с возрастом.

Женолутен — клинические испытания

При клиническом изучении установлена эффективность прнименения биорегулятора Женолутен в комплексном восстановлении функции женской репродуктивной системы при ее нарушениях различного генеза, в том числе при гипофункции яичников, нарушении менструального цикла, климактерических расстройствах, женском бесплодии, обусловленном нарушениями гормонального статуса, а также для женщин старших возрастных групп для оптимизации функций половой системы. В ходе исследования никаких побочных эффектов от применения биорегулятора Женолутен не было выявлено.

Женолутен — рекомендации по применению

Взрослым рекомендуется прием по 2 капсулы в день во время еды в течение 30-60 дней. Целесообразно проводить повторный курс через 1-3 месяца. В дальнейшем рекомендуется проводить повторные курсы через каждые 4-6 месяцев. Рекомендован в качестве дополнительного источника пептидов.

Женолутен — состав продукта

Антислеживающий агент Е460 (микрокристаллическая целлюлоза), желатин (капсула), сахар, лактоза, картофельный крахмал, экстракт яичников 3,6% (комплекс пептидов яичников), эмульгатор Е433 (полисорбат 80), краситель Е171 (диоксид титана).

Форма выпуска: капсулы;
Вес содержимого 1-й капсулы: 0,275 г;
2 капсулы (рекомендуемая суточная доза) содержат 20 мг экстракта яичников (комплекс пептидов яичников).

Противопоказания

Индивидуальная не переносимость отдельных компонентов. Применять во время беременности и в период кормления грудью, а также детям в возрасте до 12 лет не рекомендуется.

Побочные действия

Биорегулятор Женолутен хорошо переносится, побочного действия, осложнений, противопоказаний и препаратной зависимости при применении Женолутена не выявлено.

Хранение

Хранить в сухом, защищенном от света месте в упаковке производителя, при комнатной температуре, в недоступном для детей месте.

Женолутен не является лекарством. Биологически активные добавки к пище не должны использоваться в качестве замены разнообразного и сбалансированного питания. Рекомендуемая суточная доза не должна быть превышена.

Журнал: «Медицина целевые проекты» статья: Альтернативы пептидным биорегуляторам нет

«Ревитализация» и «антиэйдж-технологии» – термины, которыми в XXI веке мало кого можно удивить. Технологический прорыв в гериатрии и геронтологии уже сегодня позволяет получать препараты, исправляющие возрастные поломки человеческого организма и в значительной степени продлевать активную фазу жизни. Об уникальных разработках отечественных специалистов, что такое пептидные биорегуляторы, как команде российских специалистов удается постоянно быть на шаг впереди всего мира в этой области   Президент петербургской компании НПЦРиЗ, кандидат медицинских наук, врач-онколог Роман Пинаев     – Ваша компания – единственный в России официальный представитель Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии, располагающая всем спектром инновационных пептидных препаратов, не имеющих аналогов в мире. Расскажите подробнее об этом.   – Деятельность Научно-производственного центра ревитализации и здоровья (НПЦРиЗ) посвящена популяризации, разработке и продвижению пептидных инновационных препаратов и средств для поддержания здоровья населения, борьбы с преждевременным старением и продлением активного долголетия. Компания основана в мае 2010 года группой единомышленников, в течение нескольких лет плодотворно разрабатывающих тему ревитализации – возвращения организму естественных функций, утраченных с возрастом или вследствие болезней. Сейчас в нашем ассортименте более 100 наименований продукции, которая изготовлена с соблюдением международных стандартов (ISO, GMP) и не имеет аналогов на отечественном и зарубежном рынках. Именно поэтому она стала интересна партнерам из Европы, стран СНГ, США и Канады. Главным стратегическим партнером нашей компании является Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии под руководством профессора, доктора медицинских наук В.Х. Хавинсона. Именно разработка института – абсолютно новая высокоэффективная технология выделения из органов и тканей животных низкомолекулярных пептидных фракций – позволила создать эксклюзивно для НПЦРИЗ новый класс биорегуляторов – пептидных препаратов.   Пептиды – органические вещества, состоящие из остатков аминокислот, соединенных амидной связью. В живых клетках пептиды синтезируются из аминокислот либо являются продуктами обмена белков. Многие природные пептиды обладают биологической активностью. Пептидные биорегуляторы – это короткие цепочки из аминокислот, выделенные из органов и тканей животных, класс биологически активных веществ парафармацевтики. Они способны восстанавливать функциональные нарушения и препятствовать развитию патологических процессов в тех органах и тканях, из которых они изначально были выделены. Биорегуляторы нормализуют синтез белка, тем самым препятствуют возрастному накоплению изменений, которые способствуют преждевременному старению. Пептидные биорегуляторы применяются для профилактики, вспомогательной терапии и поддержания физиологической функциональной активности органов и систем организма.   – Расскажите, насколько эффективны пептидные биорегуляторы.   – Более чем 30-летний опыт использования пептидных биорегуляторов в клинической практике показал высокую эффективность данного класса веществ при различных заболеваниях и патологических состояниях. За всю историю применения пептидов их получили около 15 млн человек и не было выявлено никаких побочных эффектов и осложнений. Они не имеют противопоказаний, кроме стандартных: индивидуальная непереносимость компонентов, периоды беременности и грудного вскармливания. Их можно принимать вместе с большинством лекарственных препаратов и любой пищей. Это во-первых. Во-вторых, трехмесячный прием пептидных биорегуляторов имеет пролонгированное действие, т.е. работает в организме еще порядка трех месяцев. Полученный эффект удерживается в течение полугода, а каждый следующий курс приема обладает эффектом потенцирования, т.е. усиления уже полученного действия. В-третьих, каждый пептидный биорегулятор имеет направленность действия на определенный орган и никак не влияет на другие органы и ткани, поэтому одновременный прием препаратов разного действия не только не противопоказан, но даже рекомендован в большинстве случаев. При этом пептиды совместимы с любыми лекарственными препаратами, более того, они усиливают действие лекарств и помогают добиться нужного эффекта в гораздо более сжатые сроки. В этой связи дозы приема лекарственных препаратов возможно постепенно снижать под наблюдением лечащего врача, что положительным образом сказывается на организме больного.   В ходе большого количества клинических исследований установлено, что всасывание пептидов происходит в тонком кишечнике за счет наличия макро- и микроворсинок и их сократительной активности, густой сети лимфатических и кровеносных капилляров, расположенных под базальной мембраной энтероцитов и имеющих большое количество широких пор (фенестров), через которые проникают молекулы пептидов. Так называемые короткие пептиды относятся к малогидрализуемым соединениям, которые сохраняют свою структуру при всасывании в желудочно-кишечном тракте и оказывают таким образом свое регулирующее действие.   – Кому можно порекомендовать прием пептидных биорегуляторов? Всем ли они показаны?   – Прежде всего, это люди старшего поколения, уже имеющие определенные заболевания, а также представители профессий с тяжелыми или вредными условиями труда, обремененные негативным действием плохой экологии. Скорее всего, в эту категорию людей попадает большая часть населения, что делает прием наших препаратов чрезвычайно актуальным. Следует отметить, что с возрастом даже у здорового человека начинается инволюция жизненно важных систем организма. Все они постепенно стареют. Первыми, как правило, под прессингующее действие внешних и внутренних факторов попадают иммунная, нейроэндокринная и центральная нервная системы, поэтому как можно раньше следует задуматься о профилактике возрастных изменений в своем организме.Любому человеку после 30 лет достаточно одного-двух курсов применения пептидов в год, чтобы поддержать его жизненно важные функции. Рекомендуется совместный прием пептидных биорегуляторов, так как каждый из них обладает направленным действием на определенный орган и не влияет никак на другие органы и ткани. Применение комплекса пептидных биорегуляторов, обладающих тканеспецифическим действием, является физиологически адекватным и способствует снижению темпа старения при воздействии вредных факторов на организм.   Существует две группы препаратов: первая – цитомаксы, основанные на экстрактах животного происхождения; вторая – короткие пептиды, синтезированные из двух-трех, иногда четырех аминокислот, цитогены. Короткие пептиды более быстро включаются в работу по восстановлению нарушенной функции поврежденного органа, но и действуют коротко. По этой причине рекомендуется проведение комплексного приема: сначала оперативная помощь короткими пептидами, а затем удержание и закрепление полученного положительного результата пептидами на основе животных экстрактов. Они позже начинают действовать, зато отличаются длительным действием. Таким образом достигается выраженный эффект, который необходим при комплексном лечении или комплексной профилактике различных заболеваний.   – Роман Николаевич, вы сказали, что действие цитомаксов тканеспецифично, что они действуют на какой-то определенный орган или ткань. Какие препараты вы можете предложить потребителям сегодня и что планируете на будущее?   – Когда мы только начинали свою деятельность, в нашем арсенале было всего несколько пептидных биорегуляторов Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии. И сразу же стало понятно, что такого количества капсулированных препаратов недостаточно. Постепенно в результате нашей совместной работы линейка пептидов расширилась и приобрела следующий вид.   Цитомаксы (натуральные пептиды): «Владоникс» (содержит пептиды тимуса), «Вентфорт» (содержит пептиды сосудов), «Церлутен» (содержит пептиды мозга), «Тиреоген» (содержит пептиды щитовидной железы), «Светинорм» (содержит пептиды печени), «Супрефорт» (содержит пептиды поджелудочной железы), «Сигумир» (содержит пептиды хрящей), «Пиелотакс» (содержит пептиды почек), «Стамакорт» (содержит пептиды слизистой оболочки желудка), «Визолутен» (содержит пептиды тканей глаза), «Читомур» (содержит пептиды мочевого пузыря), «Челохарт» (содержит пептиды сердечной мышцы), «Женолутен» (содержит пептиды яичников), «Либидон» (содержит пептиды предстательной железы), «Таксорест» (содержит пептиды слизистой оболочки бронхов), «Тестолутен» (содержит пептиды семенников молодых животных), «Готратикс» (содержит пептиды мышц), «Эндолутен» (содержит пептиды эпифиза).   Цитогены (синтезированные пептиды):«Везуген» (для сосудов), «Кристаген» (для иммунной системы), «Карталакс» (для хрящевой ткани), «Оваген» (для печени и ЖКТ), «Хонлутен» (для бронхолегочной ткани и слизистой желудка), «Пинеалон» (для головного мозга).   Также сотрудниками Института и специалистами нашего научного отдела были разработаны 19 пептидных комплексов в растворе на основе натуральных субстанций, которые пользуются огромной популярностью.   При этом, кроме пептидов, мы предлагаем и другие решения: это, например, непептидные биорегуляции, линия питьевых мезотелей, которые улучшают мозговое кровообращение, работу ЦНС и периферической нервной системы. В арсенале появились средства и для наружного применения: пептидная клеточная косметика Reviline, мезотели наружного применения, серия косметики «Комплимент». Пополнился наш каталог и линейкой продуктов функционального питания, в которой представлены низкокалорийные супы, кисели, а в перспективе будут и фитобальзамы. Это питание помогает нормализовать вес без изнурительных диет.   В 2015–2016 годах планируется внедрение высшего класса пептидных биорегуляторов – пептидных препаратов комплексного воздействия на основе трех или даже пяти пептидных субстанций: для онкологических больных, для спортсменов, для нейроэндокринной системы, кроветворной системы, опорно-двигательного аппарата, для мужчин и женщин. Также появятся косметические препараты, в состав которых войдут индукторы теломеразы и узкоспецифичные пептиды, применяющиеся в профессиональной косметологии. Такая косметика дает потрясающие омолаживающие результаты.   – Сегодня одной из ключевых задач государства является стратегия импортозамещения. Можно ли назвать препараты, которые продвигает ваша компания, импортозамещающими и насколько они конкурентоспособны?   – Если понимать под импортозамещающим товар неоригинальный, а только копирующий импортный образец, то наша продукция таковой не является. А вот если принимать импортозамещающим тот продукт, для производства которого внутри страны организованы дополнительные рабочие места, освоена оригинальная технология, обучены сотрудники и развита инфраструктура, то весь ассортимент компании НПЦРиЗ можно назвать импортозамещающим. Наши биологически активные добавки и косметические средства не только конкурентоспособны, а уникальны, равно как и технология их изготовления. Мы не копируем западные образцы, а создаем новый эксклюзивный продукт. Альтернативы пептидным биорегуляторам нет. Кроме того, вся наша продукция изготавливается на производствах европейского уровня, прошедших соответствующую сертификацию по международным стандартам контроля качества. Это значит, что к качеству препаратов и косметики НПЦРиЗ предъявляются такие же требования, как к производству лекарственных препаратов.   Вся наша продукция высшего качества и имеет приемлемую стоимость, что делает ее доступной для самых широких слоев населения. Нашей успешной работе способствуют грамотное маркетинговое и стратегическое планирование. Мы постоянно инвестируем часть прибыли в долгосрочные перспективные проекты, в усовершенствование коммуникативных методик и технологий. Так, в начале пути у нас было всего лишь два официальных представительства – в Москве и Санкт-Петербурге. Сегодня уже динамично работают европейское представительство в Вильнюсе, два украинских представительства, болгарское представительство в Софии, официальные представительство НПЦРиЗ в Казахстане и Молдове.   Значимым этапом в развитии компании стало сотрудничество с Общероссийской общественной организацией «Лига здоровья нации», возглавляемой Лео Антоновичем Бокерия. Под ее эгидой мы открыли пять общественных приемных Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии: три в Москве и по одной в Санкт-Петербурге и Екатеринбурге. В них граждане бесплатно получают консультативную медицинскую помощь по вопросам сохранения здоровья. НПЦРиЗ активно участвует в жизни международного научного сообщества. Так, специалисты научного отдела компании выступали с докладами на конгрессах Международной ассоциации геронтологии и гериатрии в Болонье (Италия, 2011), в Сеуле (Южная Корея, 2013), а также в мероприятиях, организованных Российским обществом антивозрастной медицины.   Таким образом, научный и технологический потенциал нашей компании позволяет разрабатывать и выпускать продукцию на внутренней производственной базе, но не только для внутреннего потребления.

Препараты при климаксе на основе пептидов « БНК

Климакс – это естественное угасание женской репродуктивной системы. Яичники перестают работать, снижается уровень эстрогенов – женских половых гормонов. Как следствие, кожа становится сухой и более дряблой, быстрее набирается лишний вес, кости становятся более хрупкими, возникают перебои в работе сердечно-сосудистой системы. Восстановить деятельность яичников можно пептидными биорегуляторами. В результате их приема гормональный обмен восстановится, и неприятные симптомы уйдут. Вот несколько препаратов на основе пептидов, способных помочь при климаксе.

Женолутен

Полипептидные цепочки имеют большое количество разновидностей, каждый их вид соответствует определенному органу или системе в организме. Чтобы воздействовать на яичники, нужно использовать биорегуляторы, выделенные именно из яичников.

Женолутен – это натуральный препарат из линейки цитомаксов, содержащий пептиды из яичников молодых животных. Они полностью идентичны человеческим. Женолутен поддерживает процесс созревания яйцеклеток, тем самым восстанавливая циклическую деятельность яичников, и стимулирует обменные процессы в их тканях.

Показания к приему препарата:

• состояние пременопаузы и менопаузы;
• нерегулярный менструальный цикл;
• бесплодие неясного генеза;
• эндометриоз;
• вегетососудистые нарушения, вызванные климаксом;
• астеноневротические расстройства;
• снижение либидо.

Женолутен можно использовать в профилактических целях, после 40 лет, когда пременопауза еще не началась, но организм движется к этой черте.

Не рекомендуется принимать препарат при беременности и грудном вскармливании, поскольку в эти периоды функционирование яичников приостанавливается естественным образом.

Женолутен выпускается в капсулах. Их следует принимать до еды. Минимальный курс лечения составляет 1 месяц.

Эндолутен

В состав Эндолутена входят пептидные биорегуляторы, выделенные из эпифиза – шишковидной железы молодых животных. Эпифиз находится в головном мозге и отвечает за выработку гормонов и нейромедиаторов, важных для поддержания биологической молодости организма

Чем полезен Эндолутен при климаксе:

• нормализует циклические процессы в организме;
• помогает отсрочить менопаузу;
• сглаживает симптомы климакса: приливы, расстройства сна, головные боли, раздражительность.

На фоне приема Эндолутена у женщины восстанавливается ночной сон, укрепляется иммунитет, повышается сопротивляемость организма к негативным внешним воздействиям.

Пептидный комплекс REVILAB SL10

REVILAB SL10 содержит пептиды эпифиза, сосудистых стенок и мочевого пузыря. Это тоже важно для женщин в период менопаузы. У них прекращается выработка эстрогенов, в частности, эстрадиола, влияющего на состояние молочных желез, уретры, мочевого пузыря, влагалища.

Урогенитальные расстройства в климактерическом периоде могут иметь следующие проявления:

• гиперактивный мочевой пузырь;
• императивные позывы к мочеиспусканию;
• истинное недержание мочи.

Со стороны сердечно-сосудистой системы возможны аритмия, тахикардия, атеросклероз, артериальная гипертензия.

Как REVILAB SL10 воздействует на организм:

• оказывает регуляторное действие на эпифиз;
• регулирует метаболические процессы в сосудистых стенках;
• повышает эластичность артерий, вен и лимфатических сосудов;
• снижает риск тромбообразования;
• восстанавливает деятельность мочевого пузыря;
• стимулирует мышечный тонус сфинктера мочевого пузыря.

Также REVILAB SL10 рекомендован для профилактики онкозаболеваний и синхронизации биологических часов.

Пептидные биорегуляторы практически не имеют противопоказаний и отлично усваиваются организмом. Они избавляют от неприятных проявлений климактерического синдрома женщин и предотвращают ранний климакс.

Пептидные биорегуляторы при дисфункции яичников

При дисфункции в работе яичников медицина использует препараты с гормонами. Но они имеют много противопоказаний и побочных эффектов, из-за чего гормональная терапия подходит не каждой женщине.

Специалисты из Института биорегуляции и геронтологии г.Санкт-Петербурга разработали пептидный натуральный препарат Женолутен . При незначительных нарушениях он способен мягко восстанавливать нормальную работу яичников без применения гормонов. В других случаях позволяет значительно снизить их дозировку.

Отчего возникает дисфункция яичников и ее симптомы

Центральное место в репродуктивной системе женщины занимают яичники. От их функционирования зависит не только здоровье и самочувствие, но и способность к деторождению. Любой сбой в их работе называется дисфункцией. Это состояние приводит к гормональным нарушениям, вызывает заболевания органов половой системы.

Причины дисфункции яичников:

операции на яичниках;

аборты;

воспалительные процессы в области малого таза;

стрессы;

постоянная усталость, эмоциональное истощение;

заболевания эндокринной системы;

неправильная установка внутриматочной спирали;

переохлаждение;

частая смена климата;

самостоятельный прием гормональных препаратов.

Эта патология не имеет острых проявлений, поэтому женщины долгое время не обращаются к врачу. Насторожить должны следующие симптомы:

частые сбои менструального цикла;

сильные боли внизу живота;

угревые высыпания без причины;

отсутствие менструации;

обострение предменструального синдрома;

плаксивость;

частая смена настроения без видимой причины;

Не нужно относиться к таким проявлениям, как к обыденным привычным вещам.Часто они возникают в результате гормонального сбоя, причиной которого может быть дисфункция яичников. Обязательно обратитесь к гинекологу или терапевту.

Диагностика и лечение

Для определения точного диагноза необходимо сдать анализ крови на женские гормоны. Расшифровкой занимается только врач. При необходимости возможно проведение УЗИ или МРТ органов малого таза.

Традиционная медицина для лечения дисфункции яичников применяет 2 вида гормональной терапии:

1. Оральные контрацептивы (ОК) комбинированного типа – эти препараты предназначены для предотвращения нежелательной беременности, но иногда их целесообразно применять в лечебных целях. В период приема ОК яичники отключаются, им дается временный отдых. Отмена препаратов через 3 месяца приводит к активизации деятельности половых желез. Такая гормональная встряска иногда позволяет восстановить нормальную работу органа.
   
2. Заместительная гормональная терапия (ЗГТ) – ее цель полностью заменить утраченную функцию яичников при помощи синтетического эстрогена и прогестерона. Терапия применяется длительное время.

При отсутствии лечения дисфункция яичников может принять хроническое течение, и привести к таким осложнениям как бесплодие, образование кист и других новообразований в половой системе. В запущенных случаях врачи вынуждены прибегнуть к операции.

Пептидные биорегуляторы при лечении дисфункции яичников

Пептидные биорегуляторы – это особые молекулы, которые состоят из 2— 20 аминокислот. Главная их особенность состоит в том, что они способны запускать синтез белка в клетках. С возрастом синтез белка ухудшается, что приводит к быстрому износу клеток. Это приводит к старению, неправильной работе внутренних органов, болезням. Препарат на основе пептидов позволяет естественно запустить процесс восстановления и омоложения организма.

Для женской репродуктивной системы создан препарат Женолутен. Его состав включает пептидные биорегуляторы, которые выделены из яичников молодых животных. Они полностью идентичны по составу пептидам человека. Показания к приему Женолутена:

эндометриоз;

проблемы с зачатием ребенка;

предменструальный синдром;

снижение или отсутствие либидо;

сбои менструального цикла;

наступление климакса ранее 40 лет;

гипофункция яичников.

Главное преимущество препарата состоит в том, что он имеет негормональный состав. Поэтому его прием возможен в профилактических целях для поддержания женского здоровья, при возрастных изменениях, а также в комплексной терапии заболеваний репродуктивной системы.

Но заниматься самолечением не стоит, так как точный диагноз может поставить только врач после тщательного обследования. Под дисфункцией яичников могут скрываться другие тяжелые заболевания, например, онкопатологии. Поэтому перед приемом Женолутена рекомендуется проконсультироваться с врачом.

Источник: Pharmindex.ru для газеты «Аптека»

Неизвестные пептиды: «теневая» система биорегуляции

Уже давно не вызывает сомнений значимость белков для практически любого аспекта существования жизни. Однако их «младшие братья» — пептиды — привлекают незаслуженно мало внимания, обычно считаясь биологически не такими уж важными. Нет, никто не забывает про исключительную роль пептидов в эндокринной системе и антибактериальной защите. Однако ещё двадцать лет назад нельзя было и заподозрить, что пептидный «фон», присутствующий во всех тканях и традиционно воспринимаемый как «обломки» функциональных белков, также выполняет свою функцию. «Теневые» пептиды формируют глобальную систему биорегуляции и гомеостаза, — возможно, более древнюю, чем эндокринная и нервная системы.

В начале 2010 года постановлением Президиума РАН директор Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова — Вадим Тихонович Иванов — награждён Большой золотой медалью Российской академии наук имени М.В. Ломоносова — «за выдающийся вклад в развитие биоорганической химии». На общем собрании РАН в мае этого года В.Т. Иванов прочитал лекцию о роли пептидов в качестве универсальных биорегуляторов. По мотивам лекции Иванова написана эта статья.

Белки, как постулировано ещё классиками диалектического материализма, являются основным «рабочим телом» жизни. Недаром даже в школьном учебнике биологии отдельным списком перечисляются функции белков: каталитическая, структурная, защитная, регуляторная, сигнальная, транспортная, запасающая, рецепторная и двигательная. Первые белки описали ещё в XVIII веке — это были альбумин («яичный» белок), фибрин (один из белков крови) и глютен (запасающий белок пшеницы). Центральная роль белков во всей биологии была осознана к концу первой четверти XX века, и с тех пор ни у кого уже не вызывает сомнения, что абсолютно все жизненные процессы протекают с участием этих универсальных «молекул жизни».

Есть у белков и «младшие братья» — пептиды. Отличие между этими двумя классами молекул довольно условное — идентичные по химической природе, они различаются лишь размером (длиной полипептидной цепи): если молекула состоит более чем из 50 аминокислотных остатков — это белок, а если менее — то пептид. Перечисленные выше «классические» функции относятся главным образом к белкам, на долю пептидов же традиционно отводилась роль в эндокринной регуляции: большинство хорошо известных биологических пептидов (а их не так уж много) являются нейрогормонами и нейрорегуляторами. Основные пептиды с известной функцией в человеческом организме — пептиды тахикининового ряда, вазоактивные интестинальные пептиды, панкреатические пептиды, эндогенные опиоиды, кальцитонин и некоторые другие нейрогормоны.

Кроме этого, важную биологическую роль играют антимикробные пептиды [1], секретируемые как животными, так и растениями (встречаются, например, в семенах или в слизи лягушек), а также антибиотики пептидной природы, о которых ещё будет немного сказано далее.

И вот не так давно (не более тридцати лет назад) обнаружилось, что кроме этих пептидов, обладающих вполне определёнными функциями, ткани живых организмов содержат довольно мощный пептидный «фон», состоящий в основном из фрагментов более крупных функциональных белков. Долгое время считалось, что это не имеет принципиального значения, и что такие пептиды — всего лишь «обломки» рабочих молекул, которые организм ещё не успел «подчистить». Однако в последнее время становится понятно, что этот «фон» играет важную роль в поддержании гомеостаза (тканевого биохимического равновесия) и регуляции множества жизненно важных процессов самого общего характера — таких как рост, дифференциация и восстановление клеток. Не исключено даже, что система биорегуляции на основе пептидов — эволюционный «предшественник» более современных эндокринной и нервной систем.

Однако давайте разбираться по порядку, и, чтобы не утратить исторической перспективы, начнём с короткой экскурсии в историю изучения пептидных веществ в нашей стране.

Историческая справка: пептидная школа в СССР

В 1959 году в Академии наук СССР был создан Институт химии природных соединений, во главе которого встал академик Михаил Михайлович Шемякин (1908–1970). Сотрудники института с самого начала были ориентированы на изучение природных биорегуляторов, таких как витамины и антибиотики. Большую работу по синтезу пептидных антибиотиков вёл молодой инициативный учёный — будущий директор института и вице-президент АН СССР Юрий Анатольевич Овчинников (1934–1988).

«Визитной карточкой» Института на долгие годы стал валиномицин — депсипептидный циклический антибиотик из бактерий Streptomyces fulvissimus, — синтез которого осуществила команда под руководством Овчинникова [2], доказав заодно ошибочность существовавших ранее представлений о структуре этого вещества (рис. 1). Валиномицин оказался ионофором, то есть веществом, селективно увеличивающим проницаемость биологической липидной мембраны для определённого типа ионов. Конформационное исследование валиномицина и его комплексов с ионами калия (а именно их он и переносит через мембрану) позволило сформулировать механизм работы антибиотика [3]. Ион металла, как в браслет, помещается в центр полости, присутствующей в циклической молекуле, и без энергетических затрат переносится через клеточную мембрану, — что и приводит к «обнулению» калиевого трансмембранного потенциала и, в конечном счёте, к гибели микроорганизма.

Рисунок 1. На лабораторном коллоквиуме в Институте химии природных соединений (1965 г.). Структуру циклического антибиотика валиномицина на доске рисует В.Т. Иванов. Депсипептиды, к которым относится и валиномицин, содержат наряду с «классическими» пептидными связями также одну или несколько сложноэфирных групп.

Блестящий пример валиномицина и других ионофоров, плюс шедшие параллельно в США исследования краун-эфиров, также способных к формированию прочных комплексов с ионами металлов, породили по всему миру каскад работ, приведших к становлению контейнерной химии, основанной на концепции «хозяин-гость» [4]. За работы в этой области Дональд Крам, Жан-Мари Лен и Чарльз Педерсен в 1987 году были удостоены Нобелевской премии по химии. Кстати, пространственная структура трансмембранного калиевого канала, полученная уже в XXI веке, показала, что механизм переноса и селективности к иону K⁺ у этого белка принципиально такой же, как и в случае валиномицина, — только в канале координационную сферу иона образуют аминокислотные остатки из субъединиц канала-тетрамера [5], а в антибиотике это остов самой циклической молекулы-депсипептида.

За огромную работу по исследованию валиномицина и других ионофоров, результаты которой суммированы в монографии «Мембрано-активные комплексоны», Ю. А. Овчинников и В. Т. Иванов — нынешний директор Института биоорганической химии РАН (ИБХ — так сегодня называется институт, созданный Шемякиным) — были в 1987 году удостоены Ленинской премии. А в память о том романтическом периоде в биоорганической химии около входа в ИБХ красуется статуя, изображающая комплекс валиномицина с ионом калия.

«Болгарская простокваша», или как пептиды стимулируют врождённый иммунитет

Пептидные антибиотики — вещь, бесспорно, интересная, однако они по большей части вырабатываются микроорганизмами и действуют на микроорганизмы же, а значит, исследования должны были двигаться дальше — в сторону изучения пептидов животных и человека. Чтобы сделать переход к рассказу о человеческих пептидах более плавным, сначала коротко расскажем о мурамилпептидах — компонентах клеточной стенки бактерий, способных стимулировать врождённый иммунитет у человека.

В 1970-е годы в ИБХ обратился болгарский врач Иван Богданов с просьбой помочь проанализировать препарат, полученный им из продуктов ферментации кисломолочной бактерии Lactobacillus bulgaricus. Дело в том, что он хотел найти действующее начало «чудотворных» болгарских кисломолочных продуктов (в первую очередь, простокваши), якобы играющих роль в знаменитом болгарском долголетии. Роль диеты в долголетии целых народов так и остаётся не до конца доказанной, но вот препарат Богданова вызвал живой интерес, поскольку обладал существенной противоопухолевой активностью. По своему составу этот экстракт представлял собой сложную смесь веществ бактериального происхождения.

В результате исследований обнаружилось, что действующим началом препарата Богданова является элементарное звено клеточной стенки бактерий — глюкозаминил-мурамил-дипептид (ГМДП), — оказывающее на организм человека иммуностимулирующее и противоопухолевое действие. Фактически, этот элемент бактерии представляет для иммунной системы как бы «образ врага», мгновенно запускающий каскад поиска и удаления патогена из организма. Кстати, быстрый ответ — неотъемлемое свойство врождённого иммунитета, в отличие от адаптивной реакции, требующей до нескольких недель, чтобы «развернуться» полностью. На основе ГМДП был создан лекарственный препарат ликопид [6], применяющийся сейчас для широкого спектра показаний, связанных в основном с иммунодефицитами и инфекционными заражениями — сепсисом, перитонитом, синуситами, эндометритами, туберкулёзом, а также при различных видах лучевой и химеотерапии.

Новые «-омики»: пептидомика — новое направление постгеномных исследований

На этом изыскания «из жизни пептидов» не закончились — на самом деле, история с «простоквашей» и многие другие работы по веществам пептидной природы сообщили толчок для рождения новой отрасли, занимающейся систематическим изучением пептидов, содержащихся в живых клетках и тканевых жидкостях.

В начале 1980-х годов стало понятно, что роль пептидов в биологии сильно недооценена —  их функции много шире, чем у всем известных нейрогормонов. Прежде всего, обнаружилось, что пептидов в цитоплазме, межклеточной жидкости и тканевых экстрактах много больше, чем считалось до того — как по массе, так и по числу разновидностей. Более того, состав пептидного «пула» (или «фона») в разных тканях и органах существенно отличается, и эти отличия сохраняются у разных особей. Число «свеженайденных» в тканях человека и животных пептидов в десятки раз превышало количество пептидов «классических» с хорошо изученными функциями. В течение какого-то времени «теневые» пептиды считались просто биохимическим «мусором», оставшимся от деградации более крупных функциональных белков и ещё не «прибранным» организмом, и лишь с начала 1990-х завеса тайны начала приподниматься.

Изучением роли пептидных «пулов» стала заниматься новая дисциплина — пептидомика, — становление которой происходило не в последнюю очередь и в ИБХ. Всем известно, что реализация генетической программы, заложенной в ДНК организмов, начинается с генóма — совокупности хромосом и генов [7]. Изучением организации и работы генома занимается специальная область на стыке молекулярной биологии и биотехнологий — генóмика. Ядро клетки, подобно командному центру, отправляет в цитоплазму послания — матричные РНК (мРНК), являющиеся «слепками» генов. Этот процесс называется транскрипцией, а совокупность всех мРНК, присутствующих в данный момент в цитоплазме и отражающих активность генома, по аналогии назвали транскриптóмом, особенности которого изучает транскриптомика. Сумма всех белковых молекул, которые синтезировали рибосомы, «прочитав» кодирующие белки мРНК, называется протеóмом, и изучает эту «белковую сферу» протеомика [8].

Эти три «-омики» являются классическими, но если вспомнить о том, что белки имеют ограниченный «срок годности», после чего расщепляются протеазами на фрагменты — то есть на пептиды! — то появляется ещё одна «-омика»: пептидомика [9]. По аналогии, её роль — изучить состав и функции белковых «пулов», существующих в разных тканях и органах, а также объяснить механизмы их образования и разрушения. Пептидóм находится на самом конце информационной цепочки: Генóм → Транскриптóм → Протеóм → Пептидóм. Пептидомика — самая молодая дисциплина из перечисленных: её возраст не превышает 30 лет, а название было предложено только в районе 2000 года. К настоящему моменту экспериментальная пептидомика позволила сформулировать три самых главных закономерности, описывающие поведение совокупности «теневых пептидов» в живых организмах.

Прежде всего, биологические ткани, жидкости и органы содержат большое число пептидов, образующих «пептидные пулы», и роль их далеко не балластная. Эти пулы образуются как из специализированных белков-предшественников, так из белков с иными, своими собственными функциями (ферментов, структурных и транспортных белков и др.).

Во-вторых, состав пептидных пулов устойчиво воспроизводится при нормальных условиях и не обнаруживает индивидуальных отличий. Это значит, что у разных особей пептидóмы мозга, сердца, лёгких, селезёнки и других органов будет примерно совпадать, но между собой эти пулы будут достоверно различаться. У разных видов (по крайней мере, среди млекопитающих) состав аналогичных пулов также весьма схож.

И, наконец, в-третьих, при развитии паталогических процессов, а также в результате стрессов (в том числе, длительного лишения сна) или применения фармакологических препаратов состав пептидных пулов меняется, и иногда довольно сильно. Это может использоваться для диагностики различных патологических состояний, — в частности, такие данные есть для болезней Ходжкина и Альцгеймера.

Точный состав пептидных пулов определить сложно, — прежде всего, потому, что число «участников» существенным образом будет зависеть от концентрации, которую считать значимой. При работе на уровне единиц и десятых долей наномоля (10⁻⁹ М) это несколько сотен пептидов, однако при увеличении чувствительности методик до пикомолей (10⁻¹² М) число зашкаливает за десятки тысяч. Считать ли такие «минорные» компоненты за самостоятельных «игроков», или же принять, что они не имеют собственной биологической роли и представляют лишь биохимический «шум» — вопрос открытый.

Пептидные пулы — общая черта живых организмов?

Большинство пионерских работ по пептидомике проведены на тканях животных, и во всех случаях были выявлены пептидные пулы определённого и характерного состава — у человека, быка, крысы, мыши, свиньи, суслика, гидры, дрозофилы, саранчи. Но является ли феномен наличия пептидных пулов общим, например, для растений и прокариот? В случае простейших или бактерий выяснить ситуацию ещё предстоит, но вот для растений, видимо, уже можно дать положительный ответ. В частности, для модельного растения — мха Рhyscomitrella patens, геном которого недавно был расшифрован, — было показано, что на каждой стадии развития (у нитчатой формы, протонемы и на стадии зрелой стадии, гаметофоров) в растении присутствует большое число эндогенных пептидов — фрагментов клеточных белков, набор которых индивидуален для каждой формы растения. (Схема экспериментального анализа пептидов из мха показана на рисунке 2.)

Рисунок 2. Схема анализа пептидов мха

Даже если у прокариот не обнаружится ничего похожего, уже можно сделать вывод, что большое число многоклеточных организмов культивирует внутри себя пептидные «пулы». Но для чего они служат и как образуются?

Пептиды: «теневая» система биорегуляции

Механизм образования пептидных пулов проще всего выяснить на культурах клеток, потому что, в отличие от целых тканей и органов, в этом случае появляется уверенность, что пептиды генерируются именно этим типом клеток, а не каким-то другим (или вообще не являются артефактом выделения из тканей). Наиболее подробно в этом смысле изучены эритроциты человека [10] — клетки тем более интересные, что они лишены ядра, а, следовательно, большинство биохимических процессов в них сильно заторможено.

Установлено, что внутри эритроцитов происходит «нарезание» гемоглобиновых α- и β-цепей на серию крупных фрагментов (всего выделено 37 пептидных фрагментов α-глобина и 15 — β-глобина) и, кроме того, эритроциты выделяют в окружающую среду множество более коротких пептидов (рисунок 3). Пептидные пулы образуются и другими культурами клеток (трансформированными миеломоноцитами, клетками эритролейкемии человека и др.), т. е. продукция пептидов культурами клеток — широко распространённый феномен. В большинстве тканей 30–90% всех идентифицированных пептидов являются фрагментами гемоглобина, однако идентифицированы и другие белки, порождающие «каскады» эндогенных пептидов, — альбумин, миелин, иммуноглобулины и др. Для части «теневых» пептидов предшественников пока не найдено.

Даже беглый взгляд на перечень пептидных фрагментов гемоглобина (рис. 3) приводит к выводу, что разнообразие эндогенных пептидов значительно превосходит традиционный набор пептидных гормонов, нейромодуляторов и антибиотиков. Несмотря на множество разрозненных данных об активности отдельных компонентов пептидных пулов, ключевой вопрос о биологической роли пептидных пулов в целом оставался не решённым. Представляет ли основная масса пептидов в пулах просто нейтральные промежуточные продукты разрушения белковых субстратов на пути к аминокислотам, вновь используемым для ресинтеза белков, или эти пептиды играют самостоятельную биологическую роль?

Рисунок 3. Образование пептидов в культуре эритроцитов человека. На чёрном фоне показаны аминокислотные последовательности α- и β-глобина, а на сером — последовательности пептидов, идентифицированных как фрагменты этих белков.

Для ответа на этот вопрос было изучено действие более 300 пептидов — компонентов пептидных пулов тканей млекопитающих — на набор культур опухолевых и нормальных клеток. В результате оказалось, что более 75% этих пептидов оказывают выраженное пролиферативное или антипролиферативное действие хотя бы на одну культуру (то есть, ускоряют или замедляют деление клеток) [11]. Были обнаружены и другие виды биологической активности, более или менее пересекающиеся с активностями гормонов, парагормонов и нейротрансмиттеров. В результате ряда таких работ было сделано несколько выводов:

• компоненты пептидóма участвуют в регуляции нервной, иммунной, эндокринной и других систем организма, причём их действие можно рассматривать как комплексное, — то есть, осуществляемое сразу всем ансамблем пептидов;
• пептидный пул в целом регулирует долговременные процессы («долго» для биохимии — это часы, дни и недели), отвечает за поддержание гомеостаза и регулирует пролиферацию, гибель и дифференцировку составляющих ткань клеток.

По-видимому, один из главных механизмов действия коротких биологических пептидов — работа через рецепторы хорошо известных пептидных нейрогормонов. Сродство «теневых» пептидов к рецепторам очень низкое — в десятки или даже тысячи раз ниже, чем у их «основных» лигандов, но нужно принимать во внимание и тот факт, что концентрация «теневых» пептидов примерно в такое же число раз выше. В результате оказываемый ими эффект может иметь ту же величину, а, учитывая широкий «биологический спектр» пептидного пула, можно сделать вывод об их важности в регуляторных процессах.

В качестве примера действия через «не свои» рецепторы можно привести геморфины — фрагменты гемоглобина, которые действуют на опиоидные рецепторы, аналогично «эндогенным опиатам» — энкефалину и эндорфину. Доказывается это стандартным для биохимии способом: добавление налоксона — антагониста опиоидных рецепторов, используемого в качестве антидота при передозировке морфина, героина или других наркотических анальгетиков, — блокирует действие геморфинов, что и подтверждает их взаимодействие с опиоидными рецепторами.

В то же время, мишени действия большинства «теневых» пептидов неизвестны. По предварительным данным, некоторые из них могут влиять на работу рецепторных каскадов и даже участвовать в «управляемой гибели» клетки — апоптозе.

Кстати, фрагменты более крупных белков, обладающие своей собственной функцией, никак не связанной с функцией «родителя», получили название криптеинов («спрятанные» белки). Криптеины сейчас довольно активно изучаются и выявляются в последовательностях «не секретных» белков в надежде обнаружить у них особые биологические (например, лекарственные) свойства.

Полифункциональный и полиспецифичный «биохимический буфер», который образует пептидный пул, «смягчая» метаболические колебания, позволяет говорить о новой, ранее неизвестной системе регуляции на основе пептидов (см. таблицу 1). Этот механизм дополняет всем известные нервную и эндокринную системы, поддерживая в организме своеобразный гомеостаз и устанавливая равновесие между ростом, дифференцировкой, восстановлением и гибелью клеток. Изменение пептидного «фона» почти наверняка обратит внимание на протекающий патологический процесс, а восстанавливающее и стимулирующее действие многих пептидных веществ, видимо, можно объяснить как раз восстановлением нарушенного равновесия.

Учитывая сказанное, можно даже высказать предположение, что пептидная биорегуляторная система является эволюционным предшественником более совершенных и современных нервной и эндокринной систем. Эффекты, оказываемые пептидным «фоном», могут проявляться уже на уровне отдельной клетки, в то время как невозможно себе представить работу нервной или эндокринной системы в одноклеточном организме.

Таблица 1. Сравнение различных регуляторных систем [9]

Свойство	Регуляторная система
	Нервная	Эндокринная / паракринная	Тканеспецифичные пептидные пулы
«Рабочее тело»	Нейротрансмиттеры	Гормоны	Пептиды — фрагменты функциональных белков
Предшественник	Специфический белковый предшественник	Специфический белковый предшественник	Функциональные белки
«Порождающий» процесс	Сайт-специфическое расщепление	Сайт-специфическое расщепление	Действие набора клеточных протеаз
Концентрация (нМ/г ткани)	0,001–1.0	0,001–1.0	0,1–100
Тип регуляции	Синаптическая секреция	Внеклеточная секреция	Изменение концентрации в ткани
Механизм действия	Связывание с рецепторами синаптической мембраны	Связывание с рецепторами клеточной мембраны	Связывание с рецепторами «родственных» гормонов
Константа связывания с рецептором (Kd, нМ)	1–1000	0,1–10	100–10000
Период активности	Секунды–минуты	Минуты–часы	Часы–дни
Биологическая роль	Передача нервного импульса	Регуляция физиологических процессов в ткани или всём организме	Поддержание тканевого гомеостаза

Будущие приложения пептидомики

Лекарственные препараты, по существу являющиеся вариациями на тему пептидных пулов различных тканей животных, уже достаточно широко представлены на рынке (таблица 2), хотя они и не входят в число «блокбастеров», приносящих концернам максимальные барыши. Основная область их применения — состояния, связанные с дегенерацией или трансформацией клеток и тканей, а также необходимостью регенерации (заживления ран). Однако такие препараты не являются чистыми химическими веществами, а, следовательно, не удовлетворяют требованиям современной доказательной молекулярной медицины. (Дело в том, что современные фармакологические стандарты — такие как Good Clinical Practice — подразумевают проведение клинических испытаний, в которых совершенно чётко было бы доказано действие того или иного лекарственного компонента.)

Таблица 2. Лекарственные препараты, созданные на основе пептидных пулов

Препарат	Источник	Показание
Солкосерил (Швейцария)	Депротеинизированный гемодериват из телячьей крови	Заживление ран, трансплантация, ишемия
Актовегин (Дания)	Пептиды плазмы крови	Заживление ран, трансплантация, ишемия
Вирулизин (Канада)	Экстракт желчного пузыря крупного рогатого скота	Иммунодефициты, онкология
Тимулин (Россия)	Экстракт тимуса крупного рогатого скота	Иммунодефициты
Церебролизин (Австрия), Кортексин (Россия)	Экстракт головного мозга крупного рогатого скота/свиньи	Инсульт, болезнь Альцгеймера
Раверон (Швейцария) Простатилен (Россия)	Экстракт предстательной железы крупного рогатого скота	Простатит, аденома предстательной железы

Одно из перспективных направлений здесь — использование упоминавшейся уже антипролиферативной активности пептидов. Так, в опытах на карциноме молочной железы мышей один из фрагментов гемоглобина (так называемый VV-геморфин-5) удваивал выживаемость животных при совместном применении со стандартным цитостатиком эпирубицином по сравнению с применением одного только эпирубицина [12] (рис. 4). Этот эксперимент даёт основания полагать, что на основе природных пептидных пулов возможно создание вспомогательных и поддерживающих препаратов для онкологической терапии.

Рисунок 4. Средняя продолжительность жизни мышей с карциномой молочной железы при интраперитонеальном введении эпирубицина и комбинированной терапии эпирубицином с VV-геморфином-5. Выживаемость во втором случае была выше в два раза.

Однако разработка и тестирование новых лекарств — чрезвычайно долгий и затратный процесс, осложняемый конкурентной борьбой фармацевтических гигантов [13]. Более близкая перспектива использования пептидных пулов — это диагностика заболеваний и прочих патологических состояний. Выше уже не раз было сказано, что пептидный состав образца сильно зависит от состояния, в котором находился организм — донор ткани. Уже есть примеры использования пептидомного подхода для выявления маркеров тех или иных заболеваний, в том числе — онкологических.

В Институте биоорганической химии разработана методика масс-спектрометрического анализа пептидного профиля образцов крови и выявлены статистически достоверные различия, по которым можно диагностировать рак яичников, колоректальный рак или сифилис (рис. 5). Масс-спектр, отражающий состав пептидного пула образца тканей, в случае больного человека будет иметь характерные отличия, по которым исследователи — а в перспективе и врачи — смогут ставить точный диагноз.

Рисунок 5. Медицинская диагностика на основе пептидного профилирования образцов крови. Сочетание масс-спектрометрических и биоинформатических методов позволяет выявить различия между пептидным составом крови больных и здоровых пациентов.

Эти примеры не оставляют сомнения, что «теневые» пептиды из тканевых пулов хранят массу практически полезной информации — от диагностики до лечения социально-значимых заболеваний.

Статья написана с использованием материалов и иллюстраций, любезно предоставленных В.Т. Ивановым. Упрощённая версия этой статьи была первоначально опубликована в журнале «Наука и жизнь» [14]; в 2011 году она заняла первое место в конкурсе научно-популярных статей «Наука — это понятно!», проводимом Советом молодых ученых РАН.

1. Антимикробные пептиды — возможная альтернатива традиционным антибиотикам;
2. M.M. Shemyakin, N.A. Aldanova, E.I. Vinogradova, M.Yu. Feigina. (1963). The structure and total synthesis of valinomycin. Tetrahedron Letters. 4, 1921-1925;
3. V.T. Ivanov, I.A. Laine, N.D. Abdulaev, L.B. Senyavina, E.M. Popov, et. al.. (1969). The physicochemical basis of the functioning of biological membranes: The conformation of valinomycin and its K+ complex in solution. Biochemical and Biophysical Research Communications. 34, 803-811;
4. Чирков Ю. (2010). Молекулярные контейнеры. «Наука и жизнь». 7;
5. Sameer Varma, Dubravko Sabo, Susan B. Rempe. (2008). K+/Na+ Selectivity in K Channels and Valinomycin: Over-coordination Versus Cavity-size constraints. Journal of Molecular Biology. 376, 13-22;
6. Иванов В.Т., Андронова Т.М., Несмеянов В.А., Пинегин Б.В., Леджер Р., Бомфорд Р., Хаитов Р.М. (1997). Механизм действия и клиническая эффективность иммуномодулятора глюкозаминилмурамилдипептида (Ликопида). «Клиническая медицина». 3, 11–15;
7. Геном человека: как это было и как это будет;
8. Миллиард на протеомику;
9. Andrei A Karelin, Elena Yu Blishchenko, Vadim T Ivanov. (1998). A novel system of peptidergic regulation. FEBS Letters. 428, 7-12;
10. Vadim T. Ivanov, Andrei A. Karelin, Oleg N. Yatskin. (2005). Generation of peptides by human erythrocytes: Facts and artifacts. Biopolymers. 80, 332-346;
11. Vadim T Ivanov, Oleg N Yatskin. (2005). Peptidomics: a logical sequel to proteomics. Expert Review of Proteomics. 2, 463-473;
12. Elena Yu. Blishchenko, Olga V. Sazonova, Olga A. Kalinina, Ekaterina V. Moiseeva, Arpad A. Vass, et. al.. (2005). Antitumor effect of valorphin in vitro and in vivo: Combined action with cytostatic drugs. Cancer Biology & Therapy. 4, 125-131;
13. Драг-дизайн: как в современном мире создаются новые лекарства;
14. Чугунов А.О. (2010). Неизвестные пептиды. «Наука и жизнь». 10, 26–31.

Женолутен — 60 капсул пептид яичников (во время менопаузы)

Описание

Помогает регулировать ЯИЧНИКИ и выработку ими гормонов эстрогена и прогестерона, которые во время перименопаузы и менопаузы могут значительно варьироваться. Это чаще всего наблюдается при приливах, но также может вызывать нарушения менструального цикла, плохой сон, сухость влагалища и низкое либидо. Гормональный дисбаланс также может привести к женскому бесплодию.

Описание
Яичники не только производят яйца, но и секретируют гормоны, в основном эстроген и прогестерон.Во время менопаузы уровни этих гормонов изменяются непредсказуемо, вызывая множество сложных физических изменений, включая приливы, нарушения сна, ночную потливость, сухость или атрофию влагалища, недержание мочи, остеопороз и сердечные заболевания. Существуют также различные заболевания яичников, которым подвержены женщины любого возраста. Женолутен рекомендуется каждой женщине старше 40 лет, особенно женщинам с климактерическим синдромом, нарушением менструального цикла, дисфункцией яичников, женским бесплодием, эндометриозом и низким либидо. Женолутен можно сочетать с другими биологически активными добавками и лекарствами, и его следует использовать в дополнение к обычным методам лечения.ЖЕНОЛУТЕН — это пищевая добавка с натуральными пептидами яичников. Он нормализует функцию яичников, уменьшая их пептидный дефицит и поддерживая синтез белка в их клетках. Действующее вещество: комплекс пептидов А-15 (пептиды яичников) Вспомогательные вещества: целлюлоза микрокристаллическая (Е460), сахар свекольный, лактоза

Указания по применению: 1-2 капсулы два-три раза в день за 15-20 минут до еды. Продолжительность: 10 дней. Повторяйте каждые 3–6 месяцев.

ШВЕДСКИЙ

Äggstockarna producterar inte bara ägg utan också utsöndrar гормональный препарат, из эстрогена и прогестерона.Под klimakteriet förändras dessa Germonnivåer oförutsägbart, vilket orsakar många besvärliga fysiska förändringar, inklusive heta blinkningar, sömnsvårigheter, nattsvett, vaginal torrhet ellerontroschi. Det finns också olika äggstock störningar som kan påverka kvinnor i alla åldrar. Zhenoluten är ett kosttillskott med naturliga äggstockspeptider.

Антал: 60-й капслар. Ингредиенты на капсель (0,275 г): микрокристаллинт целлюлоза 0,100 г, мьёльксокер (лактос) 0,088 г, желатин 0,075 г (капсельскал), пептидкомплекс A-15 0,010 г

натуральный пептидный биорегулятор для яичников.

Описание

ОВАРИАМИН® рекомендуется назначать для облегчения восстановления функции яичников при различных нарушениях, включая негативные проявления климактерического периода у женщин. Также рекомендуется пожилым людям для поддержания функции яичников.

Овариамин представляет собой комплекс нуклеопротеинов, избирательно действующий на клетки яичников, способствуя их ускоренному функциональному восстановлению.

Овариамин — природный пептидный биорегулятор, разработанный для восстановления и поддержания функций женской репродуктивной системы.Помогает устранить нарушения овуляции, нормализовать менструальный цикл и восстановить гормональный фон. Овариамин улучшает обмен веществ в клетках и тканях яичников, тем самым восстанавливая их функции, нормализует репродуктивную функцию при бесплодии, снижает метаболические, психоэмоциональные, вегетативные нарушения при климаксе. Пептиды избирательно действуют на клетки репродуктивной системы и улучшают ее функции, тем самым ускоряя восстановление функций яичников. Овриамин рекомендуется для лечения женского бесплодия, уменьшения симптомов менопаузы и поддержания функции яичников.

Овариамин — комплекс белков и нуклеопротеидов, полученных из яичников молодых животных. Комплекс оказывает избирательное действие на клетки репродуктивной системы, ускоряя процессы восстановления и улучшая функции яичников. После попадания в организм пептиды распадаются на аминокислоты и нуклеопротеины, которые используются клетками яичников для синтеза новых незаменимых белков, тем самым производя новые клетки, восстанавливая поврежденные клетки, стимулируя их рост и оптимальное функционирование.Действие Овариамина улучшает синтез гормонов и выработку гамет яичниками, усиливает стероидогенную функцию и снижает гонадотропную функцию аденогипофиза. Природные пептиды не вызывают побочных эффектов и интоксикации, не накапливаются в организме и не имеют абстинентного синдрома.

Использование:

• уменьшает негативные симптомы менопаузы,
• нормализует работу яичников и помогает улучшить их функцию,
• восстанавливают репродуктивную функцию при бесплодии у женщин,
• лечить острый и хронический аднексит,
• нормализовать менструальный цикл,
• предотвратить преждевременную недостаточность яичников,
• уменьшить ановуляторный синдром,
• до и после операции на яичниках,
• борьба с гиперандрогенией яичников,
• уменьшить синдром менопаузы.

Состав:

комплекс полипептидов и нуклеиновых кислот, полученных из яичников молодых животных — 10 мг; сахароза, картофельный крахмал, стеарат кальция, метилцеллюлоза, энтеросолюбильное покрытие

Дозировка:

Овариамин рекомендуется принимать за 10-15 минут до еды по 1-3 капсулы или таблетки 2-3 раза в день в течение 10-15 дней.

Повторный курс рекомендуется через 3-6 месяцев.

Форма выпуска:

155 мг / таблетка, 40 таблеток

Гарантия подлинности и качества:

100% оригинал от ГЕРОФАРМ (Российская Федерация)

Разработка и производство:

ГЕРОФАРМ (Российская Федерация)

г.Петербургский институт биорегуляции и геронтологии

Женолутен | биорегулятор яичников

Поддержка регуляции функции женской репродуктивной системы

Женолутен — пептидный комплекс, выделенный из яичников молодых здоровых животных. Выделенные пептиды яичников избирательно действуют на различные клетки яичников женщины, участвуют в их клеточном метаболизме, поддерживают регуляцию их функциональной активности и, таким образом, способствуют регулированию циклической активности яичников и процессу созревания яйцеклетки.

Оптимальная функция женской репродуктивной системы напрямую связана с состоянием клеток яичников. Для оптимального функционирования клеток необходимо оптимальное снабжение их питательными веществами, такими как витамины, минералы и пептиды. Пептиды являются компонентами белковых молекул и высвобождаются во время метаболизма белка (распад белка на более мелкие фракции = пептиды). Пептиды — это информационные молекулы, которые влияют на экспрессию генов и запускают процесс синтеза белка.Образование белков — жизненно важный процесс. Это необходимо для роста клеток и выполнения своих основных функций.

В молодом организме пептиды яичников образуются в достаточном количестве. В случае повышенной нагрузки на организм и с возрастом, к сожалению, в организме падает интенсивность синтеза белка. Это означает, что чем старше мы становимся или чем в более экстремальных условиях работают женские репродуктивные органы, тем меньше пептидов яичников образуется в организме женского мужчины, что влияет на снижение интенсивности синтеза белка.Дефицит пептидов яичников приводит к сбоям в работе клеток ткани яичников, также может привести к потере некоторых функций этих клеток. В таких ситуациях полезна направленная поддержка клеток яичников.

Одним из наиболее эффективных способов противодействия недостатку пептидов яичников является использование пептидов ткани яичников животного происхождения. Пептиды идентичны у всех млекопитающих и принимаются человеческим организмом как эндогенные вещества (вещества организма). Кроме того, пептиды обладают тканеспецифическими свойствами.Они работают только в той ткани, из которой были изначально изолированы.

Биорегулятор Женолутен — это экстракт яичников, содержащий все важнейшие пептиды яичников. Для экстракции пептидов используют только ткани яичников телят и свиней моложе 11 месяцев. Весь молодняк поступает с хозяйств, в которых не зарегистрированы опасные для человека заболевания, в том числе коровьего бешенства.

За счет использования биорегулятора Женолутен в организме происходит обогащение пула регуляторных пептидов ткани яичников. Таким образом, применение биорегулятора Женолутен способствует нормализации уровня пептидов в клетках яичников. Это, в свою очередь, приводит к нормализации обмена веществ в клетках яичников и регулированию их функций. Таким образом, применение препарата способствовало нормализации функций яичников, тормозит развитие атрофических процессов в яичниках и снижает риск патологического развития в яичниках.

Природные пептидные биорегуляторы животного происхождения

В результате многолетних исследований исследовательского коллектива Санкт-Петербургского государственного университета им.Ученые Петербургского института биорегуляции и геронтологии смогли разработать совершенно новую высокоэффективную технологию выделения из органов и тканей животных низкомолекулярных пептидных фракций. Данная технология позволила создать новый класс геропротекторных (антивозрастных) препаратов — пептидные биорегуляторы. Использование физиологически активных коротких пептидов, составляющих основу для приготовления этих пептидных биорегуляторов, рекомендуется для всех возрастов. Пептидные биорегуляторы позволяют эффективно предотвращать преждевременное старение и поддерживать организм, а также во время старения, а также повышенных физических и умственных нагрузок.Пептидные биорегуляторы также рекомендованы к применению в комплексе с другими препаратами для лечения возрастных заболеваний.

Женолутен — клинические исследования

Клинические исследования выявили эффективность биорегулятора Женолутен в комплексном восстановлении функции женской репродуктивной системы при патологических процессах различного генеза, включая гипофункцию яичников, нарушение менструального цикла, постменопаузальный синдром, женское бесплодие в результате гормонального нарушения, а также в старении для поддержки функции женской репродуктивной системы.Никаких побочных эффектов.

Женолутен — рекомендуемые приложения

Взрослым рекомендуют принимать по 2 капсулы в день во время еды в течение 30-60 дней. Желательно повторить курс в течение 1-3 месяцев. В дальнейшем рекомендуется проводить курсы повышения квалификации каждые 4-6 месяцев. Рекомендуется как дополнительный источник пептидов.

Женолутен — ингредиенты

Разделительный агент E460 (микрокристаллическая целлюлоза), желатин (капсула), сахар, лактоза , картофельный крахмал, экстракт яичников 3.6% (комплекс пептидов яичников), эмульгатор Е433 (полисорбат 80), краситель Е171 (диоксид титана).

Форма выпуска: капсулы;
Количество нетто 1 капсулы: 0,275 г;
2 капсулы (рекомендуемая суточная доза) содержат 20 мг экстракта яичников (комплекс пептидов яичников).

Противопоказания

Индивидуальная непереносимость отдельных компонентов. Не рекомендуется применять при беременности и кормлении грудью, а также детям в возрасте до 12 лет.

Побочные эффекты

Биорегулятор Женолутен переносится хорошо, побочных эффектов, осложнений, противопоказаний и препаративных зависимостей при применении Женолутена не выявлено.

Условия хранения

Хранить в сухом, защищенном от света месте, в оригинальной упаковке, при комнатной температуре, в недоступном для маленьких детей месте.

Женолутен не является лекарством. Пищевые добавки не заменяют сбалансированное и разнообразное питание. Рекомендуемая суточная доза не должна быть превышена.

Исследование физико-химических и биологических свойств белково-пептидного комплекса, выделенного из ткани яичников крупного рогатого скота

1

Ямскова, В.П., Краснов М.С., Ямсков И.А., Наноразмерные биорегуляторы ткани глаза микопитающих как основа для фармакологических препаратов нового поколения, , Наноразмерные биорегуляторы нового поколения.

2

Ямскова В.П., Краснов М.С., Ямсков И.А., Новые экспериментальные и теоретические аспекты в биорегуляции. Механизм действия мембранотропных гомеостатических биорегуляторов (Новые экспериментальные и теоретические аспекты биорегуляции: механизм действия мембранотропных гомеостатических биорегуляторов), Саарбукен: Lambert Academic Publishing, 2012.

3

Краснов М.С., Ямскова В.П., Березин Б.Б., Ямскова Н.В., Ямсков И.А., Клет. Технол. Биол. Med. , 2014, № 1. С. 63–67.

4

Ильина А.П., Молявка А.А., Ямскова В.П., Буряк А.К., Ямсков И.А., Прил. Biochem. Microbiol. , 2014, т. 50, нет. 4. С. 398–403.

Артикул CAS Google Scholar

5

Blandau, R.J., Anat.Rec ., 1945, т. 92, нет. 1. С. 449–457.

Артикул Google Scholar

6

Доусон Р., Эллиотт Д., Эллиотт В. и Джонс К., Данные биохимических исследований , 3-е изд., Оксфорд: Кларендон, 1986.

Google Scholar

7

Ямскова В.П., Модянова Е.А., Резникова М.М., Маленков А.Г., Мол. Биол. , 1977, т. 11, вып. 5, стр.1147–1154.

CAS Google Scholar

8

Edman, P., Arch. Биохимия ., 1949, т. 22, нет. 3. С. 475–476.

CAS PubMed Google Scholar

9

Лаеммли, Великобритания, Nature , 1970, т. 227, нет. 259. С. 680–685.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

10

Уилсон, К.М., Методы Энзимол ., 1983, т. 91. С. 236–247.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

11

Ямскова В.П., Рыбакова Е.Ю., Виноградов А.А., Вечеркин В.В., Ямсков И.А., Прил. Biochem. Microbiol ., 2004, т. 40, нет. 4. С. 345–350.

Артикул CAS Google Scholar

12

Ямскова В.П., Скрипникова В.С., Молявка, А.А., Ильина, А.П., Краснов, М.С., Маргасюк, Д.В., Борисенко, А.В., Березин, Б.Б., Кузнецова, Е.С., Буряк, А.К., Ямск, И.А., Биохимия, (Москва), 2009 , т. 74, нет. 9. С. 971–978.

CAS PubMed Google Scholar

13

Сидорский Е.В., Ильина А.П., Краснов М.С., Ямскова В.П., Буряк А.К., Ямсков И.А., Прил. Biochem. Microbiol ., 2018, т. 54, нет. 1. С. 83–88.

Артикул CAS Google Scholar

14

Ямскова В.П. и Резникова М.М., Ж. Общ. Биол ., 1991, т. 52, нет. 2. С. 181–191.

CAS Google Scholar

15

Буковский, А., Репрод. Биол. Эндокринол ., 2004, т. 2, вып. 1. С. 27–29.

Артикул PubMed Central Google Scholar

16

Буковский, А., Curr. Корень. Cell Res. Ther ., 2006, т. 1, вып. 3. С. 289–303.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

17

Oktem, O. and Oktay, K., Ann. N.Y. Acad. Sci. , 2008, т. 1127, нет. 1. С. 20–26.

Артикул PubMed Google Scholar

18

Изадяр, Ф., По, Ф., Мар, Дж., Слепко, Н., Ван, Т., Гонсалес, Р., Рамос, Т., Howerton, K., Sayre, C., and Silva, F., Reproduction , 2008, vol. 6, вып. 1. С. 771–784.

Артикул CAS Google Scholar

19

Пакьяротти, Дж., Маки, К., Рамос, Т., Мар, Дж., Ховертон, К., Вонг, Дж., Фам, Дж., Анорв, С., Чоу, Ю.С., и Изадяр Ф., Дифференциация , 2010, т. 79, нет. 1. С. 159–170.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

20

Буковский, А., Анат. Rec ., 2011, т. 294, нет. 8. С. 1284–1306.

Артикул CAS Google Scholar

21

Цзоу, К., Юань, З., Ян, З., Ло, Х., Сунь, К., Чжоу, Л., Сян, Дж., Ши, Л., Ю, К., Чжан Ю., Хоу Р. и Ву Дж., Nature Cell Biol ., 2009, т. 11, вып. 5. С. 631–636.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

22

Александрова, О.П., Лыжин А.А., Викторов И.В., Бюл. Эксп. Биол. Med. , 2001, № 9. С. 333–337.

23

Краснов М.С., Григорян Е.Н., Ямскова В.П., Биол. Бык. (Москва) , 2003, т. 30, нет. 1. С. 17–29.

Артикул CAS Google Scholar

24

Викторов И.В., Александрова О.П., Алексеева Н.Ю., Лыжин А.А., Морфология , 2004, т. 125, нет. 1. С. 124–125.

Google Scholar

25

Маргасюк Д.В., Краснов М.С., Ямсков И.А., Ямскова В.П., Биол. Журн. Бык. (Москва) , 2008, т. 35, нет. 6. С. 635–642.

Артикул CAS Google Scholar

Высвобождающие оксид азота наночастицы диоксида кремния Ингибирование роста клеток рака яичников

Mol Pharm. Авторская рукопись; доступно в PMC 2013 12 февраля.

Опубликован в окончательной редакции как:

PMCID: PMC3569608

NIHMSID: NIHMS186595

, ^† , ^§ , ^§ , ^† и ^{* §}

Эллен В.Стивенс

^† Отделение фармакологии, Комплексный онкологический центр Линебергера, Чапел-Хилл, Северная Каролина

Алексис Уэллс

^§ Отделение химии, Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл, Чапел-Хилл, Северная Каролина

Джэ Хо Шин Ченнинг Дж.Der

^† Отделение фармакологии, Комплексный онкологический центр Линебергера, Чапел-Хилл, Северная Каролина

Марк Х. Шенфиш

^§ Отделение химии Университета Северной Каролины в Чапел-Хилл, Чапел-Хилл, Северная Каролина

^† Отделение фармакологии, Комплексный онкологический центр Линебергера, Чапел-Хилл, Северная Каролина

^§ Химический факультет, Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл, Чапел-Хилл, Северная Каролина

^║ Отделение патологии, доктор медицины Андерсон Онкологический центр, Техасский университет, Хьюстон, Техас

^* Адресная переписка с Ченнингом Дж.Дер, Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл, Комплексный онкологический центр Линебергера, 450 Вест-Драйв, CB 7295, Чапел-Хилл, Северная Каролина, 27599, ude.cnu.dem@redjc; Марк Х. Шенфиш, Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл, Департамент химии, CB # 3290, Чапел-Хилл, Северная Каролина 27599, ude.cnu@hcsifneohcs Окончательная отредактированная версия этой статьи доступна в Mol Pharm. См. Другие статьи в PMC, которые цитируют опубликованная статья.

Abstract

Хотя мощная противоопухолевая активность оксида азота (NO) подтверждает его потенциал в качестве противоопухолевого агента, эффективная и избирательная доставка и действие на опухолевые, а не на нормальные клетки остается ограничивающим фактором.Доставка NO на основе наночастиц рассматривается как один из подходов к преодолению этих ограничений. Таким образом, мы определили полезность доставки NO с использованием наночастиц диоксида кремния и оценили их противоопухолевую эффективность против опухолей яичников человека и неопухолевых клеток. Наночастицы, высвобождающие NO, демонстрируют усиленное ингибирование роста опухолевых клеток яичников по сравнению как с контрольными наночастицами, так и с ранее описанным низкомолекулярным донором NO, PYRRO / NO. Кроме того, высвобождающие NO наночастицы показали большее ингибирование независимого от закрепления роста опухолевых и трансформированных Ras клеток яичников.Анализ с помощью конфокальной микроскопии показал, что флуоресцентно меченные NO-высвобождающие наночастицы проникают в цитозоль клетки и локализуются в поздних эндосомах и лизосомах. Кроме того, мы наблюдали зависимость размера наночастиц от эффективности против нормальных и трансформированных клеток яичников. Наше исследование представляет собой первое применение NO, полученного из наночастиц, в качестве противоопухолевой терапии и подтверждает ценность будущих исследований по изучению состава наночастиц для приложений in vivo.

Ключевые слова: Наночастицы, диоксид кремния, оксид азота, рак яичников, Ras

Введение

Нанотехнологии принесли пользу в ряде биомедицинских областей, включая доставку лекарств и контрастные вещества для магнитно-резонансной томографии. ^1-5 Использование наноструктурированных материалов (например, наночастиц) в качестве систем доставки лекарств начало оказывать влияние на медицину из-за полезных физических и химических свойств, зависящих от размера. ⁶ Из-за их нетоксичной природы и способности образовывать структуры с регулируемой пористостью, размером и функциональностью поверхности, органически модифицированные наночастицы кремнезема были исследованы в качестве системы-носителя для контролируемой доставки лекарств, биоцидов, генов и белков. . ^7-10 Ограничением химиотерапии рака является узкий терапевтический индекс большинства противоопухолевых агентов, при котором главными проблемами являются эффективная доставка к опухолевым клеткам, устойчивость к опухолевым клеткам и токсичность для нормальных клеток.Возможности нацеливания, доступные с помощью доставки лекарств на основе наночастиц, обеспечивают привлекательный подход для преодоления этих ограничений с улучшенной сайт-специфичной доставкой к опухоли. ^11,12

Оксид азота (NO), биорегулятор свободных радикалов, эндогенно синтезируемый в организме, влияет на несколько стадий развития опухоли, охватывая цитостатические процессы, клеточную трансформацию и образование опухолевых поражений. ^13-15 Недавние сообщения подчеркнули последствия продукции NO для биологии опухоли, включая ингибирование нескольких классов ферментов и белков метаболизма железа, апоптоз клеток и чередование метастазов. ^16,17 Исследования показали, что химически активные частицы оксида азота (например, NO ₂ , NO ₂ ^—, ONOO ^— и N ₂ O ₃ ), полученные из NO, влияют на выражение и активность белков, критических для клеточного цикла и апоптоза. ^16,18

Для дальнейшего понимания противораковой эффективности NO были разработаны и оценены с уважением несколько классов низкомолекулярных доноров NO (например, комплексы NO-металл, нитрозотиолы, органические нитриты / нитраты и диазениядиолаты). к НЕ хранению / высвобождению и эффективности против опухолевых клеток. ^19-235 Например, низкомолекулярные доноры диазениумдиолата NO были использованы для демонстрации эффективности NO в качестве мощного противоопухолевого агента против клеток рака яичников, основной причины смерти от гинекологических злокачественных новообразований. ²⁴ Действительно, O ² — {2,4-динитро-5- (4 — ( N -метиламино) бензоилокси] фенил})] — 1- ( N , N — диметиламино) диазен-1-иум-1,2-диолат (PABA / NO) задерживал рост ксенотрансплантата опухоли рака яичников человека с эффективностью, аналогичной силе цисплатина, основного средства лечения рака яичников. ²⁴ Другое исследование продемонстрировало эффективность NCX-4016, производного нитроаспирина, против устойчивых к цисплатину клеток рака яичников человека и опухолей ксенотрансплантатов. ²⁵ Хотя низкомолекулярные доноры NO продемонстрировали эффективность против опухолей, их полезность в качестве противоопухолевых агентов клинически затруднена из-за возможной нормальной клеточной токсичности побочного продукта лекарственного средства донора NO и неспособности целенаправленной доставки лекарства избирательно к раковым клеткам.

В этом исследовании мы разработали высвобождающие NO наночастицы диоксида кремния в качестве терапевтического инструмента, чтобы определить, улучшит ли это доставку NO к клеткам рака яичников человека и снизит ли цитотоксичность по отношению к нормальным клеткам.Недавно мы сообщили о синтезе наночастиц диоксида кремния, модифицированных донорами NO, которые обладают удивительно настраиваемым размером наночастиц и свойствами хранения / высвобождения NO. ^26,27 Эта система доставки позволяет нам контролировать терапевтическую нагрузку и визуализировать наночастицы с помощью флуоресцентных меток. Мы сравнили цитотоксичность NO, полученного из наночастиц, с NO, высвобожденным из низкомолекулярного донора NO (PYRRO / NO), и обнаружили повышенную противоопухолевую активность NO, полученного из наночастиц, против опухоли яичников или трансформированных клеточных линий.Исследования зависимости от размера показывают, что избирательная цитотоксичность в отношении опухолевых клеток усиливается за счет модуляции размера наночастиц. Наши наблюдения подтверждают эффективность NO-высвобождающих наночастиц против клеток рака яичников и заслуживают будущих исследований для дальнейшей разработки этих материалов для оценки противоопухолевой активности на мышиных моделях рака яичников.

Материалы и методы

Клеточные линии, лекарственные препараты и антитела

Клетки рака яичников OVCAR-3, OVCAR-4, OVCAR-5, OVCAR-8 и SKOV-3 были предоставлены Dr.Р. Камальер из отдела лечения рака и диагностики опухолей NCI (Фредерик, доктор медицины). Линия клеток рака яичников A2780 была предоставлена ​​доктором Т. Фоджо из отделения терапии рака в NCI (Bethesda, MD). Линия клеток рака яичников HeyA8 была предоставлена ​​доктором Дж. Миллсом из онкологического центра MD Anderson (Хьюстон, Техас). Иммортализованные, нетрансформированные линии поверхностных эпителиальных клеток яичников человека (T29 и T80) и соответствующие трансформированные H-Ras (12V) аналоги (T29 H-Ras и T80 H-Ras) были описаны ранее. ²⁸ Все клеточные линии поддерживали либо в среде RPMI, либо в среде DMEM с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. Z-VAD-FMK и стауроспорин были получены от Calbiochem (Гиббстаун, Нью-Джерси). Антитела к каспазе-3 и PARP были получены от Cell Signaling (Бостон, Массачусетс), антитела ERK1 / 2 были получены от Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния), Mito- и Lyso-Tracker от Molecular Probes (Юджин, штат Орегон), Alexa -594 вторичный от Invitrogen (Юджин, Орегон), EEA1 от BD Transduction (Миссиссауга, Онтарио, Канада), калнексин от Affinity BioReagents (Голден, Колорадо) и LAMP1 от банка гибридом исследований развития (Университет Айовы, Айова-Сити, Айова) .

Chemicals

Тетраэтоксисилан (TEOS), 3-метиламинопропилтриметоксисилан (MAP3), пирролидин (PYRRO) и метоксид натрия были приобретены у Fluka (Buchs, Швейцария). N — (6-Аминогексил) аминопропилтриметоксисилан (AHAP3) и 3-аминопропилтриметоксисилан (APTMS) были от Гелест (Таллитаун, Пенсильвания). Флуоресцеина изотиоцианат (FITC) и 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид (MTT) были от Sigma (Сент-Луис, Миссури). 4,5-диаминофлуоресцеина диацетат (DAF-2 DA) был приобретен у Calbiochem (Гиббстаун, Нью-Джерси).Метанол (MeOH), этанол (EtOH), 2-пропанол (PrOH), толуол и раствор аммиака (28 мас.% В воде) были от Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ). Оксид азота (NO), диоксид углерода (CO ₂ ) (5%), аргон (Ar) и азот (N ₂ ) были получены от AGA Gas (Моми, Огайо) или National Welders Supply (Роли, Северная Каролина). ). Остальные растворители и химические вещества были чистыми для аналитических реагентов и использовались в том виде, в котором они были получены. Систему Millipore Milli-Q UV Gradient A10 (Бедфорд, Массачусетс) использовали для очистки дистиллированной воды до конечного сопротивления 18.2 МОм · см и общее содержание органических веществ ≤ 6 частей на миллиард (частей на миллиард).

Синтез пирролидина, являющегося донором оксида азота, и наночастиц диоксида кремния, модифицированного органическими соединениями

1- (пирролидин-1-ил) диазен-1-иум-1,2-диолат натрия (PYRRO / NO) синтезировали, как сообщалось ранее. ²⁹ Наночастицы диоксида кремния получали соконденсацией тетраэтиоксисилана (TEOS) с различными соотношениями аминосилана, модифицированного диазениумдиолатом N, (то есть AHAP3 или MAP3), как подробно описано ранее. ³⁴ Для образования донорной части NO N -диазениумдиолата раствор аминоалкоксисилана готовили растворением соответствующего количества аминоалкоксисилана (т.е. AHAP3 или MAP3) в смеси этанола, метанола и основания метоксида натрия (NaOMe) и затем реагировал с NO (5 атм) в течение 3 дней. Затем тетраалкоксисилан (т.е. TEOS) смешивали с различными соотношениями модифицированного диазениумдиолатом N аминоалкоксисилана (10–75 мол.%, Остальное TEOS). Наконец, смесь силанов добавляли к различным системам растворителей (например,g., 100% EtOH или 50/50% (об. / об.) EtOH / PrOH) в присутствии аммиачного катализатора (NH ₄ OH) с образованием наночастиц оксида кремния, модифицированных донорами NO, с помощью золь-гелевого процесса. Наночастицы, нагруженные оксидом азота, хранили в герметичных контейнерах при -20 ° C для защиты диазенийдиолатной части от термического и инициируемого протонами разложения. ³⁰ Совсем недавно мы провели эксперименты, которые показали, что хранение в закрытом контейнере в вакуумированном и запечатанном пакете приводит к незначительным потерям NO в течение нескольких недель хранения при комнатной температуре (данные не показаны).Контрольные наночастицы получали, подвергая наночастицы, модифицированные диазениумдиолатом N, , в водной среде до полного истощения NO.

Характеристика наночастиц диоксида кремния, модифицированных диазениумдиолатом

N,

Профили высвобождения NO наночастиц диоксида кремния, модифицированных диазениумдиолатом N , измеряли в дезоксигенированном фосфатно-солевом буфере (PBS; 0,01 M, pH 7,4) при 37 ° C с использованием хемилюминесцентный анализатор оксида азота Sievers NOA 280i (Боулдер, Колорадо). ³² Размер наночастиц определяли с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ), как описано ранее. ²⁶

Анализы роста

Анализ МТТ выполняли, как описано ранее. ³¹ Клетки высевали в шести повторностях по 1000-5000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты, инкубировали в течение ночи и подвергали серийным разведениям пирролидина, PYRRO / NO, AHAP3 / NO, AHAP3, MAP3 / NO или MAP3 в PBS непрерывно в течение 72 часов. Затем среду, содержащую лекарственное средство, удаляли и заменяли раствором МТТ (Sigma, St.Louis, MO), после чего клетки инкубировали в течение 4 ч при 37 ° C. После удаления МТТ добавляли ДМСО и измеряли оптическую плотность при 560 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов. Результаты были выражены относительно оптической плотности клеток, выращенных в отсутствие лекарственного средства. Значения IC ₅₀ были рассчитаны на основе трех независимых экспериментов. Анализы образования колоний на мягком агаре, не зависящие от закрепления, проводили путем посева суспензий отдельных клеток в питательную среду из расчета 10000 клеток / лунку с добавлением 0.4% бакто-агар. Колонии образовывались в течение трех недель и окрашивались МТТ, затем сканировались на плоском сканере Canon 9900F (Canon, Lake Success, NY) и подсчитывались с использованием программного обеспечения Image J (NIH, Bethesda, MD).

Синтез флуоресцентно меченных NO-высвобождающих наночастиц кремнезема

NO-высвобождающие наночастицы кремнезема были флуоресцентно помечены посредством совместной конденсации трех предшественников силана, включая FITC-модифицированный APTMS, N -диолированный диазолом MAP3 и TEOS.Синтез конъюгатов FITC-APTMS был адаптирован из предыдущего отчета. ²⁶ Вкратце, флуоресцентно-модифицированный APTMS получали взаимодействием 321 мкмоль APTMS с 7,704 мкмоль FITC в течение 24 часов в темноте. Затем аликвоту полученного продукта объемом 50 мкл совместно конденсировали с 3,24 ммоль MAP3, модифицированным диазениумдиолатом N , и 1,39 ммоль TEOS.

Конфокальная флуоресцентная микроскопия

Клетки помещали на стеклянные покровные стекла, покрытые 0,01% желатином. Клетки фиксировали в 4% параформальдегиде, проницаемом в 0.2% Triton X-100, блокированный 0,5% бычьим сывороточным альбумином и инкубированный в первичном [GM130 (разведение 1:50), калнексин (1: 500), EEA1 (1: 250) или LAMP1 (1: 500)] с последующими вторичными антителами к Alexa-594. Для окрашивания митохондрий и лизосом клетки инкубировали в ростовой среде, содержащей либо 100 нМ Mito-Tracker, либо 75 нМ Lyso-Tracker, в течение 30 мин. Для флуоресцентного мониторинга внутриклеточного NO клетки инкубировали в ростовой среде, содержащей 100 мкг / мл только наночастиц, высвобождающих NO L -MAP3 (контроль NO-MAP3) или 10 мкМ DAF-2 DA, в течение 30 мин.Затем клетки, обработанные 10 мкМ DAF-2 DA, промывали PBS и инкубировали только со средой (контроль DAF-2), 100 мкг / мл L -MAP3 NO-высвобождающих наночастиц, 100 мкг / мл PYRRO / NO или 1000 мкг / мл PYRRO / NO в течение 1 ч. Апоптотические и некротические клетки метили с использованием набора для окрашивания аннексином V Fluos (Roche, Penzberg, Германия). Клетки помещали на покровные стекла с помощью FluorSave (Calbiochem; Гиббстаун, Нью-Джерси) и отображали с помощью лазерного сканирующего микроскопа Zeiss (LSM 510, Германия).

Статистический анализ

Данные были оценены с помощью SigmaPlot (Systat Software; Сан-Хосе, Калифорния) и представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение. P ≤ 0,001 считались значимыми для всех анализов.

Результаты

Синтез и характеристика NO-высвобождающих наночастиц диоксида кремния

Было обнаружено, что структура и концентрация предшественников силана, модифицированных диазениумдиолатом N , а также растворитель, используемый во время золь-гель-полимеризации, влияют на размер наночастиц и НЕТ свойств высвобождения (). Регулировка типа и концентрации модифицированных донорами NO производных силана (т.е.например, N -диазениевый диолированный AHAP3 или MAP3) приводят к наночастицам диаметром от 90 до 161 нм. Как мы наблюдали ранее, диаметр наночастицы уменьшался с увеличением концентрации диазолдиолированного силана N . ³² Другие связанные исследования показали, что длина цепи спиртового растворителя влияет на кинетику и степень гидролиза и конденсации, что в конечном итоге приводит к образованию наночастиц разного диаметра. ³³ В ходе нашего анализа мы определили, что диаметр наночастиц диоксида кремния MAP3 (балансный TEOS), 75 мол.% N , увеличился с 90 ± 10 нм для кремнезема, приготовленного в 100% EtOH, до 350 ± 50 при получении в 50 : 50% EtOH: PrOH.

Таблица 1

Свойства наночастиц диоксида кремния высвобождать NO.

/ мг) / мг)35

Аминоалкоксисилан		Диаметр	т [НЕТ] a
(тип)	(моль%)	(нм)	(мкмоль
(мкмоль
10	161 ± 23	0,56
	25	142 ± 15	1,59
	35	128 ± 11	.58
	45	136 ± 15	3,77
MAP3	45	155 ± 25	1,59
			9038		65	120 ± 15	4,30
	70	97 ± 15	6,21
	75	90 ± 10	90 ± 10
	75 b	350 ± 50	12,52

Свойства наночастиц оксида кремния N, модифицированных диазениумдиолатом N, -диазениумдиолатом, модифицированных при pH 7,4 (в PBS и 37 ° C) приведены в. Профили высвобождения NO и общее высвобождение NO из нанокомпозитов диоксида кремния, модифицированных диазениумдиолатом N, с различными концентрациями предшественников MAP3 (т. Е. От 45 до 75 мол.%, Остальное TEOS) показаны на рис.Как и ожидалось, начальное высвобождение NO характеризовалось болюсом NO в диапазоне от 3,3 × 10 ⁴ до 10,3 × 10 ⁴ частей на миллиард / мг в зависимости от концентрации MAP3. Кроме того, увеличение мол.% MAP3 с 45 до 75 мол.% Привело к соответствующему увеличению общего высвобождения NO (t [NO]) в диапазоне от 1,59 до 7,35 мкмоль / мг. Увеличение диаметра наночастиц с 90 нм до 350 нм привело к увеличению t [NO] с 7,35 до 12,52 мкмоль / мг. Максимальная концентрация высвобождения NO ([NO] _m ) для 45 мол.% MAP3 была больше, чем для AHAP3. того же мол.% (3.30 × 10 ⁴ и 2,17 × 10 ⁴ ppg / мг соответственно), в то время как общее высвобождение NO было ниже (1,59 мкмоль / мг и 3,77 мкмоль / мг).

Профили высвобождения NO в реальном времени (A) и общие количества высвобождения NO (B) для модифицированных диазениумдиолатом наночастиц диоксида кремния MAP3 при указанной концентрации (45, 55, 65 и 75 мол.%; Баланс TEOS). Вложенный график (A ‘) представляет расширение графика A от 0 до 1,0 часа.

Цитотоксичность наночастиц диоксида кремния NO-донора против клеток карциномы яичников

Для изучения опухолевого потенциала диоксида кремния-донора NO мы сначала оценили цитотоксичность контрольных наночастиц диоксида кремния, модифицированных диазениумдиолатом N , на линии клеток карциномы яичников человека Acin2780.Анализ жизнеспособности МТТ использовали для определения относительной чувствительности клеток A2780 к ингибированию роста каждой обработкой наночастицами. Чувствительность (выраженная как минус логарифм с основанием 10 50% концентрации ингибирования роста (IC ₅₀ )) низкомолекулярного донора NO (PYRRO / NO) составляла 2 мМ (). Мы обнаружили, что высвобождающий NO диоксид кремния (AHAP3 / NO и MAP3 / NO) проявляет большую цитотоксичность в отношении клеток A2780, чем при обработке аналогичными дозами NO из PYRRO / NO (). Клетки A2780 обрабатывали различными дозами контрольного и высвобождающего NO диоксида кремния AHAP3 (13 — 1000 мкг / мл), и жизнеспособность почти полностью подавлялась при дозе 500 мкг / мл.Даже самая низкая концентрация NO-высвобождающих наночастиц диоксида кремния доказала цитотоксичность в отношении раковых клеток, что может быть результатом небольшой популяции гетерогенных раковых клеток с более высокой чувствительностью к наночастицам. Концентрации высвобожденного NO, указанные в, являются теоретическими концентрациями, рассчитанными из значений, перечисленных в, на основе дозы PYRRO / NO, частицы AHAP3 / NO или частицы MAP3 / NO. Ожидается, что фактическая концентрация NO, доступная во время анализа МТТ, который проводился в условиях открытого воздуха, будет немного ниже теоретической концентрации, определенной в результате анализа в герметичном сосуде.

Анализ МТТ проводили для определения цитотоксичности как функции концентраций: (A) PYRRO / NO; (B) 45 мол.% AHAP3 / NO и (C) 75 мол.% MAP3 / NO наночастиц диоксида кремния на клеточной линии карциномы яичника A2780: ●, контроли (например, пирролидин, наночастицы диоксида кремния AHAP3 и MAP3 без диазения) и ○, NO освобождение. Результаты наносили на график как жизнеспособность клеток, которую измеряли по поглощению на длине волны 560 нм (ось y) в зависимости от концентрации лекарственного средства (ось x). Количество высвобожденного NO рассчитывалось на основе значений, перечисленных в.

Мы также наблюдали, что контрольные наночастицы диоксида кремния AHAP3 (т.е. не модифицированные диазениумдиолатом) проявляли цитотоксические эффекты против опухолевых клеток (IC ₅₀ = 120 мкг / мл), хотя и меньше, чем у их NO-высвобождающих аналогов. Мы объяснили эту цитотоксичность контролей AHAP3 первичными аминами, доступными на поверхности кремнеземных структур. Чтобы снизить цитотоксичность контрольных и высвобождающих NO наночастиц AHAP3, MAP3 (содержащий только вторичные амины) использовался в качестве аминосилана для создания более биосовместимых носителей.Как и ожидалось, цитотоксичность контрольных MAP3 в отношении клеток A2780 была значительно ниже, тогда как высвобождение NO из оксида кремния MAP3, модифицированного донорами NO, оставалось цитотоксичным в отношении клеток A2780, при этом пролиферация полностью подавлялась при 200 мкг / мл ().

Для предварительного исследования влияния размера наночастиц на клеточную цитотоксичность нашего NO-выделяющего диоксида кремния, мы синтезировали наночастицы MAP3 двух размеров с 75 мол.%, Варьируя систему растворителей, используемых во время их приготовления: наночастицы 90 и 350 нм, обозначенные как S — и L -MAP3, маленькие и большие наночастицы MAP3 соответственно.Затем мы обработали нетрансформированные иммортализованные поверхностные клетки яичников человека (HOSE), Ras-трансформированные HOSE и панель клеточных линий карциномы яичников контрольными и высвобождающими NO наночастицами S -MAP3 или L -MAP3 (400 мкг / мл). и определяли потерю жизнеспособности клеток, зависящую от закрепления. Значения IC ₅₀ для этих анализов обобщены, а репрезентативные данные показаны в. NO-высвобождающие наночастицы S -MAP3 продемонстрировали сравнимую сильную цитотоксичность в отношении всей панели линий опухолевых клеток яичников, а также парных иммортализованных и трансформированных Ras клеток HOSE (IC ₅₀ ∼60-100 мкг / мл).Напротив, высвобождающие NO наночастицы L -MAP3, будучи значительно цитотоксичными по отношению к клеточным линиям карциномы яичников и Ras-трансформированным клеткам T29H и T80H, показали заметно сниженную цитотоксичность по отношению к нетрансформированным клеткам T29 и T80 (от 2,3 до 3,4). -складной; p -значение ≤ 0,001), чем частицы меньшего диаметра. Эта цитотоксичность опухолевых клеток, зависящая от размера, может позволить разработать опухолевые химиотерапевтические препараты на основе NO с меньшей токсичностью для нормальных клеток.

Наночастицы оксида кремния, донора NO MAP3, цитотоксичны для клеток яичников. (A) Анализ МТТ был использован для проверки цитотоксичности только контрольных наночастиц диоксида кремния MAP3, наночастиц диоксида кремния S -MAP3-донора NO (d = 90 ± 10 нм) или наночастиц диоксида кремния L, модифицированного донором NO -MAP3. (d = 350 ± 50 нм) на панели клеток яичника. Тестируемые клеточные линии включают клеточные линии пациентов с раком яичников: HeyA8, OVCAR-3, OVCAR-4, OVCAR-5, OVCAR-8, A2780 и SKOV-3; генно-инженерные изогенные клеточные линии: иммортализованные нормальные клетки яичников T29 и T80 и их трансформированные H-Ras (G12V) аналоги T29H и T80H.Значения IC _{, 50,} и стандартные отклонения были рассчитаны из трех независимых экспериментов, а значения p были рассчитаны для сравнения малых Т29 и Т80 с большими значениями IC ₅₀ наночастиц донора NO MAP3.

Таблица 2

Влияние размера NO-высвобождающих наночастиц диоксида кремния на IC ₅₀ для ингибирования жизнеспособности клеток. ^a

9038 903 90-654 75-64 5 ± 3,2 SKOV-3 8,9

Клеточная линия b	IC 50 , мкг / мл
	S -MAP3 c	3 L-MAP3
HeyA8	100 ± 5.8	85 ± 5,5
OVCAR-3	75 ± 4,3	60 ± 5,3
OVCAR-4	87 ± 6,7	92 ± 8,8
65 ± 5,4
OVCAR-8	90 ± 4,2	90 ± 5,8
A2780	63 ± 5,2	30 ± 3,7
63 ± 7,1
T29 e	62 ± 8.2	150 ± 17
T80 e	90 ± 8,6	220 ± 24
T29H f	90 ± 7,7	62 ± 7,3
64 ± 5,1	61 ± 6,2

NO-высвобождающие наночастицы кремнезема индуцируют апоптоз

Чтобы определить, вызывают ли NO-высвобождающие наночастицы MAP3 ингибирование роста, вызывая апоптоз в клетках яичников, мы исследовали уровни расщепления клеток яичников. каспаза-3 и расщепленный PARP (биохимические маркеры апоптоза).Вестерн-блоттинг продемонстрировал индукцию апоптоза за счет увеличения уровней расщепленной каспазы-3 и расщепленного PARP в клетках T80 и T80 H-Ras после обработки 400 мкг / мл NO-высвобождающих наночастиц L -MAP3 в течение 6 часов (). Клетки обрабатывали 10 мкМ стауроспорином в течение 1 ч в качестве положительного контроля для индукции апоптоза. Уровни расщепленной каспазы-3 и белка PARP увеличились в большей степени в клетках T80 H-Ras по сравнению с клетками T80. Предварительная обработка клеток T80 H-Ras ингибитором каспаз широкого спектра действия, z-VAD-FM, с последующей обработкой NO-высвобождающими наночастицами L -MAP3 предотвращала расщепление каспазы-3 и PARP.Кроме того, клетки T80 H-Ras, обработанные стауроспорином или 400 мкг / мл наночастиц NO-донора L -MAP3 в течение 6 часов, окрашивались положительно на маркер апоптоза, аннексин V Fluor 647 и маркер некроза, PI () . Эти данные предполагают, что высвобождающие NO наночастицы L -MAP3 индуцировали апоптоз в большей степени в трансформированных клетках яичников по сравнению с иммортализованными нормальными клетками яичников посредством механизма, зависимого от каспазы.

MAP3 NO-донорные наночастицы кремнезема вызывают апоптоз в клетках яичников.Клетки T80 и T80H не обрабатывали, обрабатывали 10 мкМ стауроспорина в течение 1 часа или обрабатывали 400 мкг / мл NO-высвобождающих наночастиц L -MAP3 отдельно или в комбинации со 100 мкМ z-VAD-FMK в течение 6 часов. Лизаты клеток подвергали вестерн-блоттингу для определения маркеров апоптоза, расщепленной каспазы 3 и расщепленного PARP или контроля нагрузки, общего ERK1 / 2 (A). Клетки T80H не обрабатывали или обрабатывали либо 10 мкМ стауроспорином в течение 1 часа, либо 400 мкг / мл NO-высвобождающих наночастиц L -MAP3 в течение 6 часов.Затем клетки окрашивали аннексином V Alexa Fluor 647 для метки апоптоза и PI для метки некротических клеток, а затем визуализировали под лазерным сканирующим конфокальным микроскопом Zeiss (B).

Независимый от закрепления рост ингибируется в трансформированных клетках яичников обработкой NO-высвобождающими наночастицами MAP3

Далее мы исследовали способность высвобождающих NO наночастиц ингибировать независимый от закрепления рост путем анализа образования колоний в мягком агаре с клетками, обработанными маленькие и большие наночастицы.Суспензии единичных клеток в агаре поддерживали в среде для выращивания с добавлением носителя (т.е. среды), контрольных наночастиц MAP3, высвобождающих NO S MAP3 или высвобождающих NO наночастиц L -MAP3 (200 мкг / мл) и за появлением пролиферирующих колоний клеток наблюдали в течение двух недель (). И S, — и L, -MAP3 значительно снижали образование колоний по сравнению с контрольной обработкой наночастицами MAP3. Эти результаты дополнительно указывают на терапевтический потенциал наночастиц, высвобождающих NO.

Субклеточная локализация наночастиц донора NO в раковых клетках яичников

Предыдущие исследования продемонстрировали захват наночастиц, таких как кремнезем и липосомы, через эндоцитарный путь. ³⁴ Чтобы определить клеточную локализацию NO-высвобождающих наночастиц диоксида кремния, мы модифицировали наночастицы для флуоресценции путем совместной конденсации FITC-модифицированного APTMS, N, -диазениддиолированного MAP3 и TEOS. Включение APTMS, модифицированного FITC, не оказало значительного влияния на размер наночастиц или высвобождение NO (данные не показаны).Клетки рака яичников A2780 обрабатывали меченным FITC NO-высвобождающим L -MAP3 (100 мкг / мл) в течение 1 или 24 часов. После обработки внутриклеточное расположение митохондрий и лизосом определяли путем окрашивания либо Mito-Traker, либо Lyso-Tracker, соответственно. Затем клетки фиксировали и окрашивали на ранние и поздние эндосомы, ER или Гольджи и визуализировали с помощью конфокальной микроскопии. FITC-меченный NO-высвобождающий L -MAP3 продемонстрировал совместную локализацию с поздними эндосомами и лизосомами после одно- и 24-часовой обработки ().Кроме того, клетки рака яичников, обработанные в течение 1 часа NO-высвобождающим L -MAP3 (100 мкг / мл), также обрабатывали DAF-2 DA, флуоресцентным маркером присутствия внутриклеточного NO. Как показано на фигуре, флуоресценции не наблюдали при обработке L -MAP3 (100 мкг / мл), только DAF-2 DA или PYRRO / NO (100 мкг / мл). Флуоресценция действительно имела место в клетках, обработанных как L -MAP3 (100 мкг / мл), так и DAF-2 DA, что указывает на присутствие NO в клетке. Для наблюдения аналогичных уровней флуоресценции (концентрации NO) в клетках требовалась гораздо большая концентрация PYRRO / NO (1000 мкг / мл).

Клетки рака яичников A2780 обрабатывали 100 мкг / мл наночастиц, высвобождающих NO L -MAP3, в течение 1 или 24 часов. Митохондрии или лизосомы метили путем инкубации клеток со средой, содержащей либо Mito-Tracker, либо Lyso-Tracker. Клетки фиксировали и окрашивали на оставшиеся клеточные компартменты первичными антителами GM130 (Гольджи), калнексином (ER), EEA1 (ранние эндосомы) или LAMP1 (поздние эндосомы). Затем клетки окрашивали вторичным антителом Alexa-594 и отображали под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом Zeiss (A).Увеличенный вид одной клетки клеток A2780, обработанных MAP3 NO-высвобождающими наночастицами в течение 1 часа, окрашенных на поздние эндосомы и лизосомы, указывает на совместную локализацию (B). Клетки A2780 обрабатывали только 100 мкг / мл NO-высвобождающих наночастиц L -MAP3 (контроль NO-MAP3) или 10 мкМ DAF-2 DA в течение 30 мин. Затем клетки, обработанные 10 мкМ DAF-2 DA, промывали PBS и инкубировали только со средой (контроль DAF-2), 100 мкг / мл L -MAP3 NO-высвобождающих наночастиц, 100 мкг / мл PYRRO / NO или 1000 мкг / мл PYRRO / NO в течение 1 ч.Клетки получали изображение с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа Zeiss (C).

Обсуждение

Хотя сообщалось, что различные низкомолекулярные доноры NO эффективны против различных типов опухолей, включая рак поджелудочной железы, толстой кишки и яичников, ^24,25,35,36 они также страдали от высокотоксичных побочных эффектов побочный продукт лекарственного средства и плохая клеточная проницаемость и задержка. Разработка новых систем доставки для доноров NO, которые могут преодолеть эти ограничения, имеет решающее значение для повышения осуществимости методов лечения на основе NO.В этом исследовании мы использовали высвобождающие NO каркасы из диоксида кремния для оценки эффективности доставки NO на основе наночастиц против рака яичников. По сравнению с контрольными наночастицами, модифицированные донором NO наночастицы продемонстрировали усиленное ингибирование роста опухолевых клеток яичников, а предварительная зависимость от размера поддерживает противоопухолевую эффективность NO, доставляемого из наночастиц диоксида кремния против клеток рака яичников, а также возможность использования материалов на их основе. наблюдения как новый подход к лечению рака.

По сравнению с низкомолекулярным донором NO PYRRO / NO, мы обнаружили более высокую противоопухолевую активность у наночастиц диоксида кремния, высвобождающих NO N, модифицированных диазениевым диазолом . В то время как существуют другие низкомолекулярные доноры NO, PYRRO / NO был выбран для исследования из-за его механизма высвобождения NO, позволяющего провести прямое сравнение между высвобождающими NO наночастицами кремнезема и ранее сообщенным низкомолекулярным донором NO. Не изменяя структуру донорной функциональности NO, мы смогли продлить NO с помощью наночастиц диоксида кремния.Хотя высвобождение NO может быть дополнительно увеличено с использованием более поздних химических составов диазенийдиолатов (например, O ² -арилированный диазенийдиолат), нашей целью было сохранить этот химический состав постоянным. ( N -диазенийдиолаты характеризуются одностадийным механизмом диссоциации, инициируемой протонами, в то время как O ² -арилированные диазенийдиолаты следуют двухстадийному механизму диссоциации (т. Е. S -глутатионилирование и протонирование). ²⁴ доза NO, необходимая для подавления роста опухолевых клеток, была значительно снижена для наночастиц по сравнению с NO, полученным из небольшой молекулы.Из-за чрезвычайно короткого периода полураспада (~ 3 с) эффективная концентрация PYRRO / NO по своей природе больше, потому что большая часть NO высвобождается до того, как небольшая молекула будет поглощена клеткой-мишенью. ²⁹ Поскольку высвобождение NO из нанокомпозитных каркасов продлевается (t _1/2 = 7 мин), больше NO доступно для терапевтического использования при взаимодействии между наночастицей и опухолевой клеткой. Наличие внутриклеточного NO было подтверждено с помощью DAF-2 DA, широко используемого NO-чувствительного флуоресцентного зонда. ^37,38 После обработки NO-высвобождающими частицами кремнезема и DAF-2 DA мы наблюдали внутриклеточную флуоресценцию DAF-2, подтверждая, что наши частицы кремнезема способны доставлять значительные уровни NO внутри клетки. Из-за кинетики высвобождения NO вполне вероятно, что некоторая часть полезной нагрузки высвобождается до клеточного поглощения частиц. Однако наличие флуоресценции DAF-2 доказывает, что наночастицы успешно доставляют NO в клетку.

Основываясь на наших результатах, высвобождающие NO наночастицы диоксида кремния, содержащие MAP3, предпочтительнее, чем наночастицы, состоящие из AHAP3.Контрольные наночастицы MAP3 (т. Е. Не диазениумдиолированные) продемонстрировали незначительную цитотоксичность или отсутствие цитотоксичности в нашей панели линии клеток яичников, в то время как контрольные наночастицы AHAP3 были слегка цитотоксичными. Повышенная цитотоксичность AHAP3 по сравнению с наночастицами MAP3 объясняется присутствием первичного амина. ^39,40 Кроме того, для систем частиц MAP3 были достигнуты более высокие концентрации аминосилана, что позволило увеличить полезную нагрузку NO. Первичный амин AHAP3 прерывает образование частиц при более высоких концентрациях из-за взаимодействий водородных связей.Эти результаты подтверждают, что высвобождающие NO MAP3 наночастицы диоксида кремния являются нетоксичной системой-носителем для больших полезных нагрузок NO.

Размер наночастиц является важным фактором в определении эффективности конкретного противоракового терапевтического подхода. В случае носителей лекарственного средства размер может влиять на объем доставки, характеристики высвобождения и место накопления в организме, таком как опухоль, печень или костный мозг. Предыдущие исследования показали зависящую от размера специфичную для опухоли доставку наночастиц в микроциркуляторное русло опухоли за счет усиленного эффекта проницаемости и удерживания (EPR). ^41,42 Мы обнаружили, что увеличение размера наночастицы с d = 90 ± 10 нм до d = 350 ± 50 нм привело к усилению цитотоксичности опухоли по сравнению с неопухолевыми клетками яичника. Хотя наши первоначальные исследования были выполнены in vitro с оценкой только двух нормальных иммортализованных клеточных линий и их трансформированных изогенных аналогов, мы считаем эти наблюдения весьма значимыми. Дальнейшая работа будет включать синтез ряда размеров и исследование не только эффективности доставки NO, но и того, как размер частиц влияет на поглощение и распределение в клетках.

Многие группы определили, что механизм интернализации и локализации наночастиц сильно зависит от размера, свойств поверхности и различий в зависимости от клеточных линий. ^34,43-45 Наночастицы кремнезема, как известно, захватываются посредством эндоцитоза и локализуются в эндосомах и лизосомах. Таким образом, как и ожидалось, наш анализ показал, что высвобождающие NO наночастицы кремнезема попадают в цитозоль обработанных клеток и локализуются в поздних эндосомах и лизосомах. Наши результаты ясно показывают, что более крупные наночастицы, высвобождающие NO, продемонстрировали повышенную дестабилизацию митохондриальной функции и индуцированный каспазой апоптоз в опухолевых клетках по сравнению с неопухолевыми клетками.Установлена ​​роль NO в митохондриальном опосредовании апоптоза. ⁴⁶ Нитро-аспирин NCX-4016 индуцировал апоптоз за счет активации каспазы-3 и расщепления субстрата PARP в клетках рака яичников. ⁴⁷ Точно так же крупные наночастицы, высвобождающие NO, вызывали гибель клеток T80 и, в большей степени, клеток H-Ras T80, как показано расщеплением каспазой-3 и PARP и положительным окрашиванием на аннексин V / PI. Частицы меньшего диаметра проявляли большую цитотоксичность в отношении клеток Т80, чем частицы большего размера.Действительно, было показано, что токсичность аморфного кремнезема обратно пропорциональна размеру частиц с диаметром менее 100 нм, что свидетельствует об увеличении цитотоксичности. ^48,49 Это явление объясняется тем, что отношение площади поверхности к объему экспоненциально увеличивается с уменьшением размера частиц. Больше атомов или молекул выражается на поверхности частиц меньшего диаметра на объем по сравнению с более крупными частицами, что увеличивает биологическую активность меньшей наночастицы.Повышенная цитотоксичность и индуцированный каспазой апоптоз, наблюдаемый в клетках T80 H-Ras после обработки крупными NO-высвобождающими наночастицами, может быть отнесен на счет большей концентрации NO, высвобождаемого этими каркасами, и / или NO, нацеленного на Ras-управляемые пути апоптоза.

Хотя мы показали, что высвобождающие NO наночастицы диоксида кремния эффективны против опухолевых клеток яичников, необходимо внести изменения для повышения терапевтического потенциала из-за короткого периода полураспада высвобождения NO. Добавление внешней оболочки (т.е. TEOS) может временно защищать функциональные возможности диазениядиолата и задерживать высвобождение NO. Альтернативно, инкапсуляция высвобождающих NO частиц диоксида кремния в липосомах приостанавливает высвобождение NO до полного уничтожения липосомы. В будущих исследованиях потребуется определить, сохраняется ли избирательность по размеру в гораздо более сложной среде in vivo , где фармакодинамические и фармакокинетические параметры также будут влиять на противоопухолевую активность и селективность доставляемого наночастицами NO.Кроме того, перед тестированием in vivo поверхность частиц будет модифицирована полиэтиленгликолем (PEG) для увеличения биосовместимости и времени циркуляции крови. ^50,51

Заключение

Таким образом, наши исследования подтверждают потенциальную ценность наночастиц на основе диоксида кремния для доставки NO для лечения рака. В дополнение к будущим исследованиям, обсуждавшимся ранее, еще одним важным направлением этой работы будет использование NO-высвобождающих наночастиц для комбинированного лечения как с традиционными цитотоксическими препаратами, так и с молекулярно-направленной терапией.Недавнее исследование показало, что in vitro, и in vivo, , чувствительность клеток карциномы толстой кишки SW620 к цисплатин-индуцированному апоптозу повышалась при совместном лечении с донором NO DETANONOate. ²³ Для лечения рака яичников важно определить, будет ли доставка NO на основе наночастиц синергетически усиливать ответ на химиотерапевтические агенты, используемые в лечении рака яичников первой линии (например, цисплатин и паклитаксел).

S — (d = 90 ± 10 нм) и L — (d = 350 ± 50 нм) модифицированные донором NO наночастицы MAP3 ингибировали независимый от закрепления рост клеток яичников по сравнению с контрольным диоксидом кремния MAP3.Анализ мягкого агара проводили для оценки способности наночастиц, модифицированных донорами NO, ингибировать независимый от закрепления рост клеток рака яичников (A2780 и HeyA8) и трансформированных клеток яичников [T29 H-Ras (G12V) и T80 H-Ras ( G12V)]. Клетки суспендировали в мягком агаре с добавлением ростовой среды, которая содержала либо носитель, контрольный MAP3 (без высвобождения NO), S, -MAP3 или L, -MAP3, высвобождающие наночастицы NO. Колонии образовались в течение трех недель: снимки были сделаны под световым микроскопом (50 ×) (A), колонии были окрашены МТТ и количественно определены с помощью программного обеспечения Image J (B).

Ссылки

1. Reddy LH. Доставка лекарств к опухолям: последние стратегии. J Pharm Pharmacol. 2005; 57: 1231–1242. [PubMed] [Google Scholar] 2. Bruchez M, Moronne M, Gin P, Weiss S, Alivisatos AP. Полупроводниковые нанокристаллы как флуоресцентные биологические метки. Наука. 1998; 281: 2013–2016. [PubMed] [Google Scholar] 3. Нам Дж. М., Такстон CC, Миркин CA. Биоштрих-коды на основе наночастиц для сверхчувствительного обнаружения белков. Наука. 2003; 301: 1884–1886. [PubMed] [Google Scholar] 4. Махтаб Р., Роджерс Дж. П., Мерфи С.Дж.Люминесценция квантовых точек размером с белок позволяет различать «прямые», «изогнутые» и «изогнутые» олигонуклеотиды. J Am Chem Soc. 1995; 117: 9099–9100. [Google Scholar] 5. Weissleder R, Elizondo G, Wittenburg J, Rabito CA, Bengele HH, Josephson L. Ультрамалый суперпарамагнитный оксид железа: характеристика нового класса контрастных веществ для МРТ. Радиология. 1990; 175: 489–493. [PubMed] [Google Scholar] 6. Zhang L, Gu FX, Chan JM, Wang AZ, Langer RS, Farokhzad OC. Наночастицы в медицине: терапевтические применения и разработки.Clin Pharmacol Ther. 2008; 83: 761–769. [PubMed] [Google Scholar] 7. Барбе С., Бартлетт Дж., Лингген К., Финни К., Цян Л.Х., Ларкин М., Каллеха С., Буш А., Каллея Г. Частицы кремнезема: новая система доставки лекарств. Adv Mater. 2004; 16: 1959–1966. [Google Scholar] 8. Штейн А., Мельде Б.Дж., Шроден Р.С. Гибридные неорганические-органические мезопористые силикаты-нанореакторы достигают совершеннолетия. Adv Mater. 2000; 12: 1403–1419. [Google Scholar] 9. Бруннер Т.Дж., Вик П., Мансер П., Спон П., Грасс Р.Н., Лимбах Л.К., Брюнинк А., Старк В.Дж. Цитотоксичность оксидных наночастиц in vitro: сравнение с асбестом, кремнеземом и влияние растворимости частиц.Environ Sci Technol. 2006. 40: 4374–4381. [PubMed] [Google Scholar] 10. Sayari A, Hamoudi S. Периодические мезопористые органо-неорганические нанокомпозитные материалы на основе диоксида кремния. Chem Mater. 2001; 13: 3151–3168. [Google Scholar] 11. Чо К, Ван Х, Не С, Чен З. Г., Шин ДМ. Терапевтические наночастицы для доставки лекарств при раке. Clin Cancer Res. 2008. 14: 1310–1316. [PubMed] [Google Scholar] 12. Бирн Дж. Д., Бетанкур Т., Брэннон-Пеппас Л. Схемы активного нацеливания для систем наночастиц в терапии рака. Adv Drug Deliv Rev.2008. 60: 1615–1626. [PubMed] [Google Scholar] 13. Бонавида Б., Хинеч С., Уэрта-Йепез С., Гарбан Х. Терапевтический потенциал оксида азота при раке. Обновление лекарственного сопротивления. 2006; 9: 157–173. [PubMed] [Google Scholar] 15. Huerta S, Chilka S, Bonavida B. Доноры оксида азота: новые методы лечения рака (обзор) Int J Oncol. 2008; 33: 909–927. [PubMed] [Google Scholar] 16. Альбина JE, Reichner JS. Роль оксида азота в опосредовании цитотоксичности макрофагов и апоптоза. Cancer Metas Rev.1998; 17: 19–53. [PubMed] [Google Scholar] 17.Фукумура Д., Кашиваги С., Джайн Р.К. Роль оксида азота в прогрессировании опухоли. Нат Рев Рак. 2006; 6: 521–534. [PubMed] [Google Scholar] 18. Lo HW, Hung MC. Ядерная сигнальная сеть EGFR при раке: связь пути EGFR с прогрессированием клеточного цикла, путем оксида азота и выживаемостью пациентов. Брит Дж. Рак. 2006. 94: 184–188. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Mimeault M, Jouy N, Depreux P, Henichart JP. Синергетический антипролиферативный и апоптотический эффекты, индуцированные смешанным ингибитором рецептора эпидермального фактора роста ZD1839 и донором оксида азота в клеточных линиях рака предстательной железы человека.Простата. 2005. 62: 187–199. [PubMed] [Google Scholar] 20. Первин С., Сингх Р., Чаудхури Г. Цитостаз, вызванный оксидом азота, и остановка клеточного цикла линии клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231): потенциальная роль циклина D1. Proc Natl Acad Sci. 2001; 98: 3583–3588. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Jia L, Schweizer J, Wang Y, Cerna C, Wong H, Revilla M. Влияние оксида азота на цитотоксичность таксола: усиление трансцеллюлярной проницаемости таксола. Biochem Pharmacol. 2003. 66: 2193–2199. [PubMed] [Google Scholar] 22.Адами А., Кривелленте Ф., Де Прати А.С., Кавальери Э., Куцзолин Л., Томмази М., Сузуки Х., Бенони Г. Биотрансформация и цитотоксические свойства доноров NO на клеточных линиях MCF7 и U251. Life Sci. 1998; 63: 2097–2105. [PubMed] [Google Scholar] 23. Huerta S, Baay-Guzman G, Gonzalez-Bonilla CR, Livingston EH, Huerta-Yepez S, Bonavida B. In vitro и in vivo сенсибилизация метастатических раковых клеток толстой кишки SW620 к CDDP-индуцированному апоптозу донором оксида азота. AIF. Оксид азота. 2009. 20: 182–194.[PubMed] [Google Scholar] 24. Saavedra JE, Srinivasan A, Buzard GS, Davies KM, Waterhouse DJ, Inami K, Wilde TC, Citro ML, Cuellar M, Deschamps JR, Parrish D, Shami PJ, Findlay VJ, Townsend DM, Tew KD, Singh S, Jia L , Джи Х, Кифер Л.К. PABA / NO в качестве противоопухолевого препарата: синтез аналогов, пересмотр структуры, химический состав раствора, реактивность по отношению к глутатиону и активность in vitro. J Med Chem. 2006. 49: 1157–1164. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. Браташ А., Вейр Н.М., Паринанди Н.Л., Цвейер Дж.Л., Шридхар Р., Игнарро Л.Дж., Куппусами П.Обращение к чувствительности к цисплатину в рецидивирующих клетках рака яичников человека с помощью NCX-4016, нитропроизводного аспирина. Proc Natl Acad Sci USA. 2006; 103: 3914–3919. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 26. Шин JH, Metzger SK, Schoenfisch MH. Синтез наночастиц диоксида кремния, выделяющих оксид азота. J Am Chem Soc. 2007. 129: 4612–4619. [PubMed] [Google Scholar] 27. Шин JH, Schoenfisch MH. Неорганические / органические гибридные наночастицы диоксида кремния в качестве основы для доставки оксида азота. Chem Mater. 2008. 20: 239–249.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Лю Дж., Ян Дж., Томпсон-Ланца Дж. А., Глассман А., Хейс К., Паттерсон А., Маркес Р. Т., Ауэрсперг Н., Ю. Ю., Хан В. К., Миллс Г. Б., Баст Р. С., младший. Генетически определенная модель рака яичников человека. Cancer Res. 2004. 64: 1655–1663. [PubMed] [Google Scholar] 29. Сааведра Дж.Э., Биллиар Т.Р., Уильямс Д.Л., Ким Ю.М., Уоткинс С.К., Кифер Л.К. Ориентация на доставку оксида азота (NO) in vivo. Разработка пролекарства-донора NO, избирательного для печени, которое блокирует апоптоз и токсичность в печени, вызванные фактором некроза опухоли альфа.J Med Chem. 1997; 40: 1947–1954. [PubMed] [Google Scholar] 30. Кифер Л.К., Нимс Р.В., Дэвис К.М., Винк Д.А. «NONOates» (1-замещенные диазен-1-иум-1,2-диоляты) в качестве доноров оксида азота: удобные лекарственные формы оксида азота. Методы Энзимол. 1996; 268: 281–293. [PubMed] [Google Scholar] 31. Стивенс Е.В., Нишизука С., Энтони С., Реймерс М., Варма С., Янг Л., Мансон П.Дж., Вайнштейн Дж. Н., Кон ЕС, Поммьер Ю. Прогнозирование лекарственной чувствительности к цисплатину и трабектину при раке яичников и толстой кишки. Mol Cancer Ther. 2008; 7: 10–18.[PubMed] [Google Scholar] 32. Полицци М.А., Стасько Н.А., Шенфиш М. Водорастворимые наночастицы золота, высвобождающие оксид азота. Ленгмюра. 2007; 23: 4938–4943. [PubMed] [Google Scholar] 33. Hong S, Bielinska AU, Mecke A, Keszler B, Beals JL, Shi X, Balogh L, Orr BG, Baker JR, Jr, Banaszak Holl MM. Взаимодействие дендримеров поли (амидоамина) с поддерживаемыми липидными бислоями и клетками: образование дырок и отношение к транспорту. Bioconjug Chem. 2004. 15: 774–782. [PubMed] [Google Scholar] 34. Сунь В., Фанг Н., Тревин Б.Г., Цунода М., Замедление II, Лин В.С., Йунг Е.С.Эндоцитоз одиночной мезопористой наночастицы кремнезема в клетку рака легкого человека наблюдается с помощью дифференциальной интерференционной контрастной микроскопии. Anal Bioanal Chem. 2008; 391: 2119–2125. [PubMed] [Google Scholar] 35. Rosetti M, Tesei A, Ulivi P, Fabbri F, Vannini I, Brigliadori G, Amadori D, Bolla M, Zoli W. Молекулярная характеристика цитотоксических механизмов и механизмов устойчивости, индуцированных NCX 4040, новым NO-NSAID, в клеточных линиях рака поджелудочной железы . Апоптоз. 2006; 11: 1321–1330. [PubMed] [Google Scholar] 36.Оуян Н., Уильямс Дж. Л., Ригас Б. NO-донорный аспирин ингибирует ангиогенез путем подавления экспрессии VEGF в ксенотрансплантатах мыши с раком толстой кишки человека HT-29. Канцерогенез. 2008; 29: 1794–1798. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37. Кодзима Х., Накацубо Н., Кикучи К., Кавахара С., Кирино Й., Нагоши Х., Хирата Ю., Нагано Т. Обнаружение и визуализация оксида азота с новыми флуоресцентными индикаторами: диаминофлуоресцеинами. Anal Chem. 1998. 70: 2446–2453. [PubMed] [Google Scholar] 38. Шао С., Стюарт В., Фолкард М., Майкл Б.Д., Приз К.М.Передача сигналов, опосредованная оксидом азота, в ответной реакции индивидуально нацеленных клеток глиомы. Cancer Res. 2003; 63: 8437–8442. [PubMed] [Google Scholar] 39. Ло И, Прествич Г.Д. Полимерные препараты, направленные против рака. Curr Cancer Drug Targets. 2002; 2: 209–226. [PubMed] [Google Scholar] 40. Стасько Н.А., Johnson CB, Schoenfisch MH, Johnson TA, Holmuhamedov EL. Цитотоксичность конъюгатов дендримеров полипропиленимина на культивируемые эндотелиальные клетки. Биомакромолекулы. 2007. 8: 3853–3859. [PubMed] [Google Scholar] 41.Маэда Х., Ву Дж., Сава Т., Мацумура Ю., Хори К. Проницаемость сосудов опухоли и эффект ЭПР в макромолекулярной терапии: обзор. J Control Release. 2000. 65: 271–284. [PubMed] [Google Scholar] 42. Leuschner C, Kumar C. Наночастицы для доставки лекарств от рака. В: Кумар ЧССР, Хормес Дж., Лойшнер С., редакторы. Нанофабрикации для биомедицинских приложений: методы, инструменты, приложения и влияние. 1-й. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co .; Weinheim, German: 2005. pp. 289–315. [Google Scholar] 43. Замедление I, Тревин Б.Г., Лин В.С.Влияние функционализации поверхности мезопористых наночастиц диоксида кремния типа MCM-41 на эндоцитоз раковых клеток человека. J Am Chem Soc. 2006; 128: 14792–14793. [PubMed] [Google Scholar] 44. Лу Дж., Лионг М., Зинк Дж. И., Таманои Ф. Мезопористые наночастицы диоксида кремния как система доставки гидрофобных противораковых препаратов. Небольшой. 2007; 3: 1341–1346. [PubMed] [Google Scholar] 45. Rejman J, Oberle V, Zuhorn IS, Hoekstra D. Зависимая от размера интернализация частиц через пути клатрин- и кавеол-опосредованного эндоцитоза.Биохим Дж. 2004; 377: 159–169. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 46. Boyd CS, Cadenas E. Оксид азота и клеточные сигнальные пути при митохондриально-зависимом апоптозе. Biol Chem. 2002; 383: 411–423. [PubMed] [Google Scholar] 47. Selvendiran K, Bratasz A, Tong L, Ignarro LJ, Kuppusamy P. NCX-4016, нитропроизводное аспирина, ингибирует передачу сигналов EGFR и STAT3 и модулирует белки Bcl-2 в устойчивых к цисплатину клетках рака яичников человека и ксенотрансплантатах. Клеточный цикл. 2008; 7: 81–88. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 48.Обердорстер Г., Обердорстер Э., Обердорстер Дж. Нанотоксикология: новая дисциплина, развивающаяся на основе исследований сверхмелкозернистых частиц. Перспектива здоровья окружающей среды. 2005. 113: 823–839. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 49. Yu K, Grabinski C, Schrand A, Murdock R, Wang W, Gu B, Schlager J, Hussain S. Токсичность аморфных наночастиц кремнезема в кератиноцитах мышей. J Nanopart Res. 2009; 11: 15–24. [Google Scholar] 50. He X, Nie H, Wang K, Tan W, Wu X, Zhang P. Изучение биораспределения и экскреции с мочой наночастиц кремнезема с модифицированной поверхностью.Anal Chem. 2008; 80: 9597–9603. [PubMed] [Google Scholar] 51. Райан С.М., Мантовани Дж., Ван Икс, Хэддлтон Д.М., Брейден диджей. Достижения в ПЭГилировании важных биотехнологических молекул: аспекты доставки. Мнение эксперта Drug Deliv. 2008. 5: 371–383. [PubMed] [Google Scholar]

ИНДУКЦИЯ ПАРФЕНОКАРПИЧЕСКОГО ФРУКТА АРГУЛЯТОРА С РАСТИТЕЛЬНЫМИ БИОРЕГУЛЯТОРАМИ

ИНДУКЦИЯ ПАРФЕНОКАРПИЧЕСКОГО ФРУКТА АРГУЛЯТОРА С РАСТИТЕЛЬНЫМИ БИОРЕГУЛЯТОРАМИ

Авторы: Ю.Хаята, Ю. Ниими, Н. Ивасаки Ключевые слова: CPPU ([1- (2-хлор-4-пиридил) -3-фенилмочевина), арбуз, партенокарпия, набор фруктов DOI: 10.17660 / ActaHortic.1995.394.25 Резюме: Мы исследовали влияние синтетических цитокининов (БА, кинетин, CPPU) на завязываемость плодов и партенокарпию четырех сортов арбуза ( Citrullus lanatus Matsum).Применение CPPU к завязи у муравьев резко увеличивало завязку и индуцировало партенокарпию исследованных сортов. Применение БА значительно способствовало завязыванию плодов опыленных цветков, но не вызывало партенокарпии. Кинетин мало влиял на завязывание плодов и партенокарпию. Содержание сахара (Brix) в партенокарпических плодах, полученных обработкой CPPU, было примерно таким же, как в контрольных (опыленных) плодах. Что касается конкретных сахаров, то во время сбора урожая содержание фруктозы было выше, чем глюкозы и сахарозы.Как и в случае с Brix, здесь не было приложения CPPU для отношений. Обработка CPPU может быть практическим способом стимулирования завязывания плодов и плодов без косточек, не влияя на размер плодов и внутреннее качество арбуза. Загрузить Adobe Acrobat Reader (бесплатное программное обеспечение для чтения файлов PDF)

URL www.actahort.org Хостинг KU Leuven © ISHS

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

No related posts.