Ифа положительный иммуноблот отрицательный: Тест на ВИЧ. Необходимо или желательно?

Какие бывают тесты ВИЧ?

Для скрининга (т.е. быстрого и массового тестирования) применяется метод ИФА или ИХЛА. Для подтверждения диагноза применяется иммуноблот.

Для выявления ВИЧ в некоторых ситуациях применяется качественный (т.е. есть или нет, без ответа на вопрос «сколько?») ПЦР РНК или провирусной ДНК ВИЧ, но данный метод является на сегодня вспомогательным и его не следует использовать для скрининга ВИЧ-инфекции.

У лиц с диагностированной ВИЧ-инфекцией применяется количественный метод ПЦР на РНК ВИЧ, он позволяет ответить на вопрос сколько вируса в крови. Его так же не следует применять для диагностики.

Когда после риска нужно сделать тест на ВИЧ?

Оптимально сделать два теста: через 6 недель и через 12 недель (3 месяца, если округлить до целых месяцев) после риска — достоверность отрицательного результата будет предельно близка к 99,9 %. Тест через любой более длительный срок тоже будет достоверен.

На любых сроках от потенциально опасной ситуации после 6-12 недель ИФА не увеличивает и не теряет своей надежности, оставаясь точным методом диагностики и через год, и через два и далее. В очень редких случаях диагностические проблемы могут возникать у очень тяжелых, фактически терминальных пациентов, с развернутой картиной СПИДа. Подробнее можно почитать об этом здесь, также там даны ответы на вопросы о т.н. поздней сероконверсии.

Где я могу пройти тест на ВИЧ?

Существует много мест, где вы можете пройти тест на ВИЧ: в поликлинике, в кабинете частного врача, больницах, клиниках планирования семьи и в местах, специально отведенных для тестирования на ВИЧ.

Всегда старайтесь пройти тестирование там, где проводится консультирование. В некоторых местах имеются услуги по консультированию и тестированию на дому, которые могут включать консультирование пар и оказание им поддержки для безопасного раскрытия результатов после тестирования.

Какой нужно сделать тест?

ИФА или ИХЛА тест на ВИЧ. Это название технологии теста. Конкретное название оборудование будет написано на упаковке теста, например, Abbot ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo.

Зачем делать тест через 6 недель, если всё равно нужно будет делать через 12? Можно обойтись только одним тестом через 12 недель?

Да, можно. Первый тест даст уже очень высокую предварительную достоверность, что важно для диагностики, и, кроме того, при отрицательном результате позволяет легче переждать срок до финального теста через 3 месяца.

Что такое период (серонегативного) окна?

Это период между заражением ВИЧ и появлением обнаруживаемых антител к вирусу.

В течение «периода окна» в крови ВИЧ-инфицированных людей нет антител, которые можно обнаружить с помощью теста на ВИЧ. Тест на ВИЧ отрицателен. Однако, в жидкостях организма человека, таких как кровь, семенная жидкость, влагалищное отделяемое и грудное молоко, уже может отмечаться высокий уровень ВИЧ.

ВИЧ может передаваться другим людям во время периода окна, даже если тест на ВИЧ не показал, что у вас ВИЧ-инфекция.

Какова достоверность теста через 6 недель после риска?

Для тестов, определяющих и антитела и антигены — практически полная, для тестов только на антитела — примерно на уровне 95%.

Если ИФА положительный, то это означает диагноз ВИЧ-инфекции?

Нет, требуется подтверждение другим методом. Подтверждающим методом для диагностики ВИЧ-инфекции сегодня является непрямая иммунофлюоресценция (РНИФ, иммуноблот, вестерн-блот). Иммуноблот демонстрирует высокую чувствительность (99,3 — 99,7 %) и специфичность (99,7 %), но так как метод определяет иммуноглобулины класса G, то с момента инфицирования результат может быть ложноотрицательным до трех недель.

У меня первый (второй третий, сорок шестой) ИФА тест на ВИЧ положительный, а иммуноблот отрицательный. Что это значит?

Это значит, что ВИЧ у Вас нет.

У меня иммуноблот сомнительный (неопределенный). Что это значит?

Вам необходимо повторить иммуноблот через 2-3 месяца после первого. Если он будет отрицательным или останется неопределенным, то ВИЧ можно исключить. Иммуноблот может быть отрицательным или сомнительным сразу после инфицирования в пределах 4-8 недель, именно для этого его нужно повторить.

Проверочный иммуноблот оказался положительным. У меня ВИЧ? Ошибки быть не может?

Да, у вас, к сожалению, ВИЧ. Не может.

У меня отрицательный тест через 3 месяца, но у меня продолжаются непонятные симптомы, у меня ВИЧ?

ВИЧ у Вас нет. Ваши симптомы к ВИЧ отношения не имеют. С любой непонятной симптоматикой нужно обращаться к врачам очно.

Есть ли возможность узнать о наличии или отсутствии ВИЧ раньше?

Да, возможно. Первый ИФА (ИХЛА) Ат+Аг тест можно сделать уже через 3 недели после риска, его достоверность будет высокой. Если есть лишние деньги, то можно сделать тест ПЦР ДНК качественный на ВИЧ через 2 недели после риска, его результат тоже даст высокую предварительную достоверность.

Я сдавал тест через 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 месяцев после риска. Они все отрицательные. Но я плохо себя чувствую, у меня чешется левая пятка и зудит под левой подмышкой. У меня точно ВИЧ, я уверен, просто тесты его не показывают!

ВИЧ у Вас нет. Со СПИДофобией нужно обратится к психиатру очно.

В чем разница между ИФА и ИХЛА? Что информативнее?

Иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА) это два способа забить гвоздь, большим красным, или средним зеленым молотком. Результат один и тот же — взаимодействие антигена с антителом или отсутствие такового. Т.е. информация — забитый гвоздь — в итоге одна и та же.

Обычно указания на ИХЛА в отношении диагностики ВИЧ носит характер артефакта, и на самом деле речь идет об ИФА. Т.е. с одной стороны — разницы нет, с другой — правильнее оперировать не названием метода, а названием тест-системы.

Как узнать поколение теста, определяет ли он антиген?

Антиген определяется, если известно, что это тест 4-го поколения, если в названии теста фигурируют слова или буквы: антиген, antigen, аг, ag.

Какие поколения тестов сейчас используются? Могут ли это быть старые тесты 2-го поколения?

Все современные тесты — это тесты 3-го (без антигена) или 4-го (с антигеном). Более старые тест-системы не производятся и не используются уже как минимум лет пять. Все современные тесты дают полную достоверность через 12 недель после риска, независимо от их обозначений и поколений.

Что такое тесты 4 поколения? Чем отличается разные поколения ИФА?

Тесты 4 поколения детектируют ВИЧ-инфекцию раньше, так как «видят» не только антитела, как тесты 3 и более ранних поколений, но и антиген ВИЧ. Антитела вырабатываются организмом в ответ на ВИЧ-инфекцию, и на выработку нужно некоторое время. Антиген ВИЧ p24, это белок вирусного капсида, а именно непосредственно кусочек вируса. Понятно, что он начинает определяться в крови ранее, чем антитела — белки иммунной системы человека, которые вырабатываются в ответ на ВИЧ-инфекцию. Т.е. «период окна» для теста 4 поколения совсем небольшой. Когда начинают обнаруживаться в большом антитела против ВИЧ, антиген p24 часто уже не выявляется, вероятнее всего в результате образования комплекса между антигеном и антителами в крови. В случаях его обнаружения антиген p24 является высокоспецифическим индикатором инфекции.

Какого поколения был мой тест?

Для Российской Федерации — четвертного, иных у нас не ввозится и не используется. В названии теста обычно присутствует что-либо из: «Combo», «At/Ag», «АТ/АГ» или «p24».

Выявляет ли ИФА тест 4 поколения ВИЧ-2?

Да, все современные специализированные ИФА-системы выявляют ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Какой период «окна» для тестов 4 поколения (Ag/At Combo)?

Тест-системы 4 поколения способны обнаружить не только антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию, но и непосредственно ВИЧ, посредством выявления вирусного белка p24. Белок p24 может быть определен очень рано, но его уровень в крови в период после инфицирования постепенно снижается, но одновременно с этим снижением нарастает уровень антител. Все люди разные, потому назвать точный 100% минимальный срок, когда сомневаться в тесте уже нет поводов — невозможно. Однако, на сегодня есть достаточное количество исследований, которые дают нам весьма определенные ориентиры, приведем лишь несколько из них:

Итак, у нас достаточно данных считать, что лабораторные ИФА-системы 4 поколения с очень высокой вероятностью «не пропустят» ВИЧ-инфекцию уже через месяц поле инфицирования.

Так все же, с какого срока ИФА 4 поколения совершенно надежно исключает ВИЧ?

Тест 4 поколения может в отдельных случаях выявлять ВИЧ-инфекцию уже через неделю после инфицирования, но ориентироваться на это все же нельзя, потому как это скорее исключение. Как Вы видели выше — месяц вполне надежный срок для современных лабораторных тест-систем.

Я тестировался на разных сроках, в том числе и через 6-8 недель, и через 12 недель (3 месяца после возможного контакта) и не могу успокоиться, потому как наблюдаю различные симптомы, в некоторых результатах анализов есть отклонения и т.д. и т.п. Что делать? Что мне еще сдать?

Ничего, в данном случае вы имеете дело с неким иным заболеванием, и скорее всего с тревожным или тревожно-депрессивным расстройством. Получите консультацию квалифицированного инфекциониста, а затем, если инфекционная или иная природа будет исключена, то обратитесь за помощью к психотерапевту или психиатру.

Что такое специфичность и чувствительность?

Специфичность диагностического теста – это доля верно определенных тестом заведомо отрицательных образцов.

Иначе говоря, для определения специфичности теста необходимо взять несколько тысяч заведомо здоровых людей и проверить их при помощи теста. Если на каждые 1000 образцов будет получено 10 ложных положительных результатов – то специфичность теста составит: (1000-10)/1000*100%=99%. Если количество ложных срабатываний больше, то специфичность становится меньше (т.е. хуже). Так, специфичность теста 99% означает примерно 10 ложных позитивных результатов на 1000 проверенных здоровых людей.

Внимательно изучите инструкцию и материалы предлагаемых на рынке тестов, найдите информацию о том, каким образом была проверена специфичность. Как правило, это данные по испытаниям нескольких тысяч образцов, полученных из разных географических регионов.

Чувствительность диагностического теста – это доля верно определенных тестом заведомо положительных образцов.

Иными словами, если мы возьмем 100 достоверно ВИЧ-инфицированных людей, проверим их тестом и получим 100 положительных результатов, то чувствительность теста будет равна 100%. Практически у всех тестов на рынке чувствительность 100%.

Нельзя путать понятия точности выявления положительных и отрицательных образцов. Точность выявления положительных образцов — это чувствительность теста, а точность выявления отрицательных образцов — это специфичность.

Чувствительный тест часто дает положительный результат при наличии заболевания (обнаруживает его). Однако, особенно информативен он, когда дает отрицательный результат, т.к. редко пропускает пациентов с заболеванием. Пример — ИФА.

Специфичный тест редко дает положительный результат при отсутствии заболевания. Особенно информативен при положительном результате, подтверждая (предположенный) диагноз. Пример — иммуноблот.

Логично использовать для скрининга (быстрого и дешевого тестирования большого числа пациентов) максимально чувствительный вид тестов, а вот для установления диагноза — максимально специфичные методы. Именно поэтому ИФА исторически является скрининговым, а иммуноблотом подтверждается ВИЧ-инфекция.

Важно понимать, что ложные положительные результаты существуют у всех тестов, никакой тест не может давать 100% специфичности! Результаты экспресс-тестов подлежат особой проверке и перепроверке в лабораторных условиях при помощи других методов. Результаты лабораторных ИФА тестов подлежат перепроверке методом иммуноблотинга.

Может ли тест быть ложноположительным?

Да, может. В этом случае в обязательном порядке необходимо сделать проверочный тест иммуноблот, который точно покажет есть у человека ВИЧ или нет.

По каким причинам тест на ВИЧ может быть ложноположительным?

Причин много и все они не известны. Самая частая причина — беременность, также такую вероятность несколько увеличивает недавние вакцинирование некоторыми иммунопрепаратами.

Может ли тест быть ложноотрицательным?

Может, если он сделан в период окна, который длится до 3-х месяцев после риска инфицирования.

Каковы причины ложноотрицательного результата в тесте на ВИЧ?

Ложноотрицательный результат, а точнее существенное удлинение «периода окна», может вызвать начатая очень рано после инфицирования антиретровирусная терапия или постконтактная профилактика, прием средств, подавляющих иммунитет (иммунодепрессантов, например, после пересадки органов и др.), а также некоторые тяжелые заболевания иммунной системы.

Но, нужно понимать, что тесты 4-го поколения определяют не только антитела, но и антиген p24, который является белком вирусной оболочки, т.е. эти тесты определят ВИЧ-инфекцию, даже если антитела по каким-то причинам задерживаются.

Алкоголь, иные психоактивные вещества, любая пища, БАДы, иммуностимуляторы, иммуномодуляторы, антибиотики и любые иные препараты, стресс, полнолуние, созерцание белого коня, усталость, общая болезненность и ослабленный иммунитет, грипп, ангина и прочие заболевания — все это не оказывает значимого влияния на риски ложноотрицательного результата теста на ВИЧ.

Чувствительность тестов на ВИЧ исследована и подтверждена в реальных условиях и на больших выборках, где люди принимают алкоголь, нервничают, принимают самые разные препараты, болеют различными заболеваниями, имеют самые разные отклонения лабораторных параметров.

Я сдавал общий анализ крови (биохимию печени, иммунограмму, липидный профиль), анализы в норме. Означает ли это, что у меня нет ВИЧ-инфекции?

Нет, не означает. Ни по каким анализам, кроме теста на ВИЧ, невозможно ни исключить ни подтвердить ВИЧ-инфекцию.

Я принимаю антибиотики (антидепрессанты, транквилизаторы, настой на мышиных хвостах), будет ли тест достоверен?

Будет. Никакие препараты, кроме препаратов АРТ в качестве постконтактной профилактики не влияют на достоверность теста на ВИЧ.

Я перед сдачей теста выпила стакан пива (бутылку водки, съела два торта, выкурила 5 пачек сигарет, косячок марихуаны), не повлияет ли это на результат теста?

Не повлияет.

Может быть так, что антиген уже связан антителами, а антител еще мало для теста?

Этот феномен описан, но это весьма короткоживущий феномен, по сути это точка пересечения двух условных кривых, никто вам не скажет, это часы или десятки минут, но точно не многие дни, скорее следует предполагать как максимум (предположение, для утверждения не достаточно данных) 1-2 суток. И в любом случае этот феномен, если и возникает, то находится там, где мы вообще из осторожности не говорим о полной достоверности тестирования, т.е. внутри первых 4-6 недель, и с очень высокой долей вероятности этот период внутри еще более короткого промежутка — в пределах первых двух недель, т.е. мы как бы укладываем оба окна одно в другое. Плюс, по всей видимости, есть некоторые условия, которые хоть сколько то значимыми делают вероятность «подловить» это самое второе окно — исходные иммунодефицитные состояния, например, связанные с возрастом.

Если бы доминирующие ИФА системы отдельно показывали срабатывание At или Ag линии, то мы бы знали (т.е. мы и так это знаем, но вот имели бы статистику по этому поводу), что за редким исключением выявление ВИЧ происходит по At линии, а если бы мы неким волшебным образом знали дату инфицирования, то мы бы знали, что за редким исключением мы выявляем довольно поздно, спустя многие месяцы и годы. В отдельных группах риска под влияем активных действий ситуация может чуть смещаться в сторону более раннего выявления, но это все не меняет погоды по большому счету. Т.е. реальных практических рисков феномен второго окна не несет — любой врач будет рекомендовать и принимать во внимание тестирование на тех сроках, когда с очень высокой вероятностью будет антитела в достаточных для детекции количествах.

А какие подтипы выявляет ИФА? Что если я заразился редким подтипом и тест его не видит?

Нет, такого не бывает. Современные скрининговые ИФА-системы выявят любой подтип из группы M и O. Представителей групп N и P зарегистрировано единичное число, их очень непросто найти даже в Камеруне, где их число чуть больше ноля, и измеряется единицами. Как только, с точки зрения эпидпроцесса, распространенность группы превысит хотя бы сотые доли процента, и будут обнаружены в за пределами африканской глуши хотя бы единичные пациенты, то и тест-системы официально подтянутся, вслед за нуждами — будут проведены широкие исследования и появятся группы и подтипы в технических характеристиках систем, то, что их нет там сегодня означает лишь то, что их нет официально. На данный момент рассматривать подобные сценарии нет смысла.

В 2006 году их было известно десять камерунцев с группой N, но спустя 5 лет, после тщательных просеиваний тысяч камерунцев нашли еще… четыре.

По разным оценкам от 400 до 800 тысяч камерунцев живут с ВИЧ, и мы знаем, что возможно до 0,1% являются носителями группы N. Т.е. от 400 до 800 человек на планете.

Важно: все редкие группы и подтипы ВИЧ были выявлены исходно обычным методом ИФА. То, что в технических характеристиках систем не указаны эти подтипы, говорит лишь об одно — число пациентов слишком мало, чтобы можно было бы провести стандартные исследования, для которых требуется не несколько случаев, а сотни, и официально утвердить у регулятора новые строчки в инструкции.

Я слышала, что методом ИФА ВИЧ-2 выявляется позднее, это так?

В данном случае это не имеет значения, антитела выходит на уровень достаточный для детекции примерно в одни и те же временные рамках, общие перестраховочные сроки 6-8 недель от опасного контакта «накрывают» и ситуации с ВИЧ-1 и с ВИЧ-2.

Аптечные ИФА экспресс-тесты достаточно надежны?

Экспресс-тесты на антитела к ВИЧ в США одобрены с 2002 года, в том числе ультрабыстрые тесты, чувствительность таких тестов от 93% и специфичность — от 99%. Одобренный и доступный в РФ экспресс-тест Alere Determine HIV ½ Ag/Ab Combo, значительно уступает по способности к обнаружению антигена р24 ВИЧ по сравнению с коммерческими лабораторными системами 4 поколения.

Следует учитывать, что экспресс-тесты значительно чаще лабораторных дают ложный положительный результат. Положительный прогностический результат для РФ у экспресс-тестов будет примерно 50 на 50, т.е. если экспресс-тест дает положительный результат, то в среднем, т.е. для групп низкого риска, вероятность в данном случае наличия ВИЧ-инфекции лишь 50%, и любой положительный результат обязательно требует перепроверки методом ИФА в условиях лаборатории.

Можно ли применять ПЦР РНК или ДНК ВИЧ для скрининга на ВИЧ?

Да, можно. но не не рекомендуется. Хотя за последнее десятилетие метод стал значительно дешевле и точнее, но все же он до сих пор и дорог, более длительный, и технически сложен, что предполагает большие риски ошибок. В России, так же впрочем, как и США, количественный метод ПЦР не рекомендован для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции в обычных случаях.

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например для оценки эффективности терапии. ДНК — в мононуклеарных клетках, например для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА. И тот и другой тест могут быть и количественными и качественными. И тот и другой можно в узких случаях применить как диагностический, с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы.

Я сдавал в коммерческой лаборатории анализ ПЦР РНК (или ДНК) ВИЧ, могу ли я исключить инфицирование?

Да, скорее всего можете, но вы делали это зря. Выше мы писали, что метод ПЦР не применяется для скрининга, а значит нужно делать ИФА.

Отвечал на частые вопросы равный консультант Erik Kivexa. 

Мы ответим на те вопросы, которые у вас могли остаться.

Прежде, чем задать вопрос, посмотрите, нет ли ответа на него в тексте выше и соответствует ли он теме тестирования на ВИЧ. Если есть или не соответствует, то не стоит задавать вопрос снова — он не пройдет  премодерацию.

Последнее редактирование материала от 26.07.2019г.

Тест на ВИЧ. Необходимо или желательно?

Тест на ВИЧ. Необходимо или желательно?

38,0 млн. человек в мире живут с ВИЧ. Из них — 36,2 млн -взрослые, 1,8 млн — дети в возрасте 0-14 лет. 

В Российской Федерации число зарегистрированных случаев ВИЧ-инфекции -1 465 102. 

ВИЧ опасен! 

Вирус иммунодефицита поражает иммунную систему. Без лечения ВИЧ-инфекция приводит к развитию синдрома приобретённого иммунодефицита (СПИД). 

Многие не знают, что инфицированы ВИЧ. 

Узнать свой на ВИЧ-статус можно только сделав анализ крови. 

Как проводится тест? 

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции заключается в обнаружении антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с последующим подтверждением их специфичности в реакции иммунного блоттинга (иммуноблот). 

Результат тестирования на ВИЧ считают положительным при получении положительного анализа в иммунном блоттинге. Подтверждённый положительный результат означает, что человек инфицирован ВИЧ. 

Если был незащищённый контакт или, например, случайный порез во время маникюра, медицинской процедуры, контакт с чужой кровью, и, после сдачи теста результат отрицательный, рекомендовано повторить исследование спустя 3 месяца. 

При положительном результате ИФА, но отрицательном результате иммунолога необходимо повторить исследование через 1-3 месяца. 

В случае, если риск инфицирования низкий, а результат исследования отрицательный — повторять в ближайшее время тест нет необходимости. 

Для чего нужна эта информация? 

Быть в курсе своего ВИЧ-статуса важно. Это даёт возможность своевременно обратиться за медицинской помощью, защитить себя, исключить передачу вируса при донорстве крови, защитить партнёра от передачи инфекции, запланировать беременность, иметь возможность родить здорового ребёнка. Чем раньше начато лечение — тем лучше прогноз. От раннего выявления инфекции зависит успех лечения. 

Но! 

Отрицательный тест не всегда говорит об отсутствии вируса в организме. Так может быть, например, в случае если исследование было проведено слишком рано, в период «серонегативного окна» , так называют время между инфицированием и обнаружением вируса. Организму может потребоваться от 3 до 12 недель, для выработки достаточного количества антител чтобы выявить ВИЧ- инфекцию. 

Тест на ВИЧ обязателен? 

Обязательно пройти обследование на ВИЧ надо только в некоторых случаях: донорам крови, плазмы, органов, других биологических жидкостей, врачам и другому медицинскому персоналу, работающим с ВИЧ-инфекцией. 

Также врач может назначить исследование на ВИЧ, если выявлена или предполагается инфекция, передающаяся половым путём, пациент страдает наркотической зависимостью, с гепатитами В и С, беременным, а также тем, у кого был контакт с ВИЧ-инфицированным или незащищенный контакт с человеком, чей ВИЧ-статус неизвестен. 

Почему беременной важно знать результат теста на ВИЧ? 

При положительном результате теста на ВИЧ, начало приёма антиретровирусных препаратов на ранних сроках беременности сокращает риск передачи инфекции плоду (до 1%). Кроме того, эта информация позволит врачам принять решение по поводу тактики родоразрешения. 

Ещё об исследовании 

В любом случае тестирование проводится добровольно с согласия пациента. Исследование конфиденциально. 

Также существует вариант анонимного тестирования, где пациент не предоставляет свои паспортные данные во время сдачи крови. В таком случае ему присваивается номер, по которому он получает результат. 

В глобальном смысле исследование на ВИЧ необходимо для предотвращения распространения вируса, для локализации эпидемии. 

Позаботьтесь о своём здоровье и здоровье своих близких. Пройдите тестирование на ВИЧ. 

Вопрос-ответ — СПИД центр

Задать вопрос

Алексей

17 марта 2021 01:39

Здравствуйте,принимаю АРВТ,можно ли делать прививку от ковид-19.

Здравствуйте, Алексей! По вопросу вакцинации против новой коронавирусной инфекции COVID-19 необходимо проконсультироваться с лечащим врачом поликлиники по месту прикрепления полиса ОМС, а также с лечащим врачом-инфекционистом СПИД-Центра.

вопрос

Татьяна

16 марта 2021 15:58

Здравствуйте,смесь которую выдают на 4 месяца бесплатно-это симилак 1 классик?которая в картонной коробке?

Здравствуйте, Татьяна! Молочная смесь выдается однократно, в данный момент молочная смесь Симилак Классик 1-600 гр в картонной упаковке.

вопрос

Ник

16 марта 2021 15:45

Здраствуйте Был не защищеный контакт в конце сентября Сдавал анализ первый раз в ноябре результат отрицательный . Второй раз сдавал в феврале 2021 года тоже отрицательный резултать . Третий раз в марте тоже отрицательный результат . Можно считать что я не заражен?

Добрый день, Ник! У 95-99% заразившихся антитела к ВИЧ обнаруживаются через 3 месяца после заражения в стандартных исследованиях методом ИФА или ИХЛА. В крайне редких случаях инкубационный период ВИЧ-инфекции может увеличиваться до 12 месяцев. Поэтому последний контрольный анализ нужно сдавать через 12 месяцев после ситуации, связанной с риском заражения.

вопрос

Надежда

16 марта 2021 12:12

Зачем сдавать кровь ребенку в 3 года, если уже сняли с учёта?

Здравствуйте, Надежда! Согласно санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» дети, родившиеся от ВИЧ-инфицированных матерей и снятые с учета в связи с неподтвердившимся диагнозом ВИЧ-инфекции, подлежат дополнительному однократному обследованию на антитела к ВИЧ в возрасте 3 лет.

вопрос

Алена

15 марта 2021 19:55

Здравствуйте, третий ребенок родился у меня , принимала терапию, роды хорошо прошли,тесты отрицотрицательны ПЦР,на антитела к 1,3 года отрицательно, второй раз сдали на антитела в 1,4 года и пришел положительный результат ,не могу спать спокойно,переживаю ,что все-таки заразился могу сынок, врач утверждает , что такое бывает, так как ребенок ещё маленький, и скорее всего следующие анализируя покажут отрицательно, что думать ,было ли такое ,у старших детей все хорошо было, в 2 года уже сняты были с учёта ,и таких скачков что положительно или отрицательно ,не было

Здравствуйте, Алена! При отрицательных результатах ПЦР-диагностики можно быть уверенным в отсутствии ВИЧ-инфекции. Причины положительного ИФА могут быть разными, не только ВИЧ-инфекция. Рекомендуем повторить обследование, так как для снятия ребенка с учета необходимы 2 отрицательных теста ИФА ВИЧ.

вопрос

Анна

15 марта 2021 18:48

Здравствуйте. Подскажите , пожалуйста, сдавала тест ифа 4 через 4.5 недели. После риска. Далее 5 недель- пцр ( чувствительность 80 МЕ/мл) , и на 6 неделе опять ифа Все отрицательно. Нужно ли сдавать ещё ?

Здравствуйте, Анна! Согласно СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» лицам, имевшим контакт, в результате которого могло произойти заражение ВИЧ, рекомендовано обследоваться на антитела к ВИЧ через 3, 6, 12 месяцев после последнего незащищенного контакта, в последующем при сохранении риска заражения – 1 раз в год. Сроки появления антител к ВИЧ в среднем составляют 3 месяца после заражения, в очень редких случаях – до 1 года.

вопрос

Николай

15 марта 2021 18:37

здравствуйте . днем сел в маршрутку и когда сел почувствовал как будто укол. и провел как бы телом вбок что бы проверить . вроде не почувствовал ничего особенного. Пришел домой вечером на трусах следы по 1мм крови ,точек 7 ,и царапина малюсенькая и точка красная то ли прыщ ,то ли от укола непонятно. Насколько вероятно заражение если кто то спрятал иглу в седло под обшивку и каждый кто заходит в маршрутку садится на него?

Здравствуйте, Николай! В данной ситуации риск заражения ВИЧ отсутствует.

вопрос

Люда

15 марта 2021 16:54

Зависит ли вирусная нагрузка от того как часто человек занимался сексом не предохраняясь и сколько копий випуса может размножаться в день?

Уважаемая Люда! Вирусная нагрузка не зависит от того, как часто человек занимался сексом. Если вы имеете в виду, повышается ли вероятность заразиться ВИЧ от количества незащищенных контактов, то да – чем больше незащищенных контактов, тем выше риск заражения. Скорость размножения ВИЧ в организме человека зависит от стадии болезни (в период инкубации и на продвинутых стадиях происходит максимальное размножение ВИЧ, при отсутствии антиретровирусной терапии). В случае, если ВИЧ-положительный принимает АРВТ, то вирусная нагрузка (количество ВИЧ в мл крови) снижается до неопределяемого тест-системами уровня.

вопрос

Игорь

15 марта 2021 15:09

Здравствуйте ув. врачи. Пишу уже который раз, но не могу найти конкретного ответа на свой вопрос. Может ли мутация вируса вич стать причиной ложноотрицательных результатов?

Здравствуйте, Игорь! Не может. Все группы и мутации ВИЧ определяются стандартными диагностическими тест-системами (ИФА, ПЦР).

вопрос

Андрей

15 марта 2021 14:36

Здравствуйте, у меня с1999 года +ВИЧ статус, есть сопутствующие заболевания Гепатит В, С так же с э1999 года, недавно поставили диагноз Еоксаартроз 3 степени(правого тазобедренного сустава), вопрос: могу я получить инвалидность? Спасибо.

Здравствуйте, Андрей! Для оформления инвалидности обратитесь в поликлинику по месту жительства, там Вам оформят посыльной лист. У врача-инфекциониста в Центре СПИД заключение ВК , которое вместе с посыльным листом предоставите на Медико-социальную экспертизу.

вопрос

Задать вопрос

Нажимая кнопку «ОТПРАВИТЬ», я подтверждаю свое согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанным здесь текстом. 

Все поля обязательны для заполнения.

Уважаемые посетители сайта!

Для получения обратной связи обязательно оставляйте корректный контактный адрес электронной почты, телефон.
Администрация сайта оставляет за собой право не публиковать анонимные вопросы.
В соответствии со ст. 12 Федерального закона Российской Федерации от 02.05.2006 г. №59-ФЗ «О порядке рассмотрения обращений граждан Российской Федерации» предусмотрен срок размещения ответов на вопросы на сайте — в течение 30 дней.

Как жить с ВИЧ-инфекцией | Эксперт

Добрый день. Сам вопрос поставлен некорректно. Ложноположительных анализов на ВИЧ не стало больше или меньше. А публикуемая в интернете информация о росте ложноположительных результатов — лишь чьи-то домыслы, порой облачённые в красивые формы, но не имеющие ничего общего с реальностью.

В процессе диагностики и лечения ВИЧ-инфекции проводятся специальные рекомендованные ВОЗ иммуноферментные анализы (ИФА), выявляющие наличие образовавшихся антител к вирусу иммунодефицита человека в крови, иммуноблотинг — определение специфических белков вируса — и полимеразная цепная реакция (ПЦР), определеющая наличие генного материала ВИЧ в организме. Наиболее часто жители региона проходят ИФА, поскольку они бесплатны для всего населения РФ (остальные тесты доступны бесплатно только для людей, живущих с ВИЧ). Если его результат оказывается положительным, его перепроверяют тестом на иммуноблот, а затем проводят ПЦР. Только после этого человеку ставят диагноз. Кроме того, полученные результаты отправляют на арбитражное исследование в другой регион или город, чтобы удостовериться в их верности. Отметим, что в целом данный комплекс диагностических исследований проводится на роботизированном оборудовании 4-го поколения, позволяющем исключить человеческий фактор. Это те самые наннотехнологии, внедрённые в повседневную жизнь, доступные всему населению региона, и позволяющие проверить состояние здоровья пациента на самом глубоком — молекулярном уровне. После постановкт диагноза пациента продолжают наблюдать врачи, он проходит регулярные обследования. И если вдруг в такой большой комплекс тестов и их перепроверок, проведённых ранее, вкралась ошибка, её можно будет заметить в ходе этих исследований. Но за всю свою практику я не встречала ни одного такого случая, когда ВИЧ выявили в организме человека ошибочно. И тем не менее, мы перепроверяем результаты каждого анализа минимум на 2-3 тест-системах, потому что диагноз серьёзный, с ним придётся провести всю оставшуюся жизнь.

Так называемый ложноположительный результат может дать только ИФА и экспресс-тесты. Антитела, подобные тем, что появляются при попадании в организм ВИЧ, могут выработаться при ряде иммуносупрессивных (например, красная волчанка и др.) и некоторых онкологических заболеваниях. Поэтому положительный результат ИФА при отсутствии ВИЧ-инфекции — это повод серьёзно задуматься и пройти обследование на другие болезни.

Экспресс-тесты последних поколений, используемые на акциях по бесплатному и анонимному тестированию на ВИЧ-инфекцию используют антигенно-антительный метод. Их точность более 90-95%. Цифра высокая, но тем не менее, это меньше, чем при классических анализах в лабораторных условиях. Однако само проведение таких акций нацелено, в первую очередь, на популяризацию прохождения теста на ВИЧ и при постановке диагноза они в рассчёт не принимаются вообще. И поэтому при выявлении положительного результата сдавшего на акциях экспресс-тест человека попросят обратиться в Центр СПИД для более точного и детального обследования. Бывает (правда, это единичные случаи за всю историю), что при дальнейших анализах положительный результат экспресс-теста не подтверждается.

По поводу закупаемых препаратов отметим, что дёшево — не всегда некачественно. На этапе составления заявок на закупку в форме аукциона контрактной службой Центра СПИД совместно с врачами и лаборантами проводится большая работа. Детально изучается рынок, учитываются все нюансы и тонкости, которые могут быть истолкованы в ту или иную сторону участниками аукциона. Мы стараемся исключить появление в наших лабораториях некачественных реагентов. Как показывает практика, это получается. Иначе мы бы не говорили о том, что у нас одна из лучших в стране лабораторная база.

Медицинские новости — БУЗ РА «Центр по профилактике и борьбе со СПИД»

Четверг,  15  Декабрь  2016

Для того, чтобы выяснить, есть ли ВИЧ-инфекция у человека, необходимо пройти тестирование на наличие антител к вирусу. За почти три десятка лет диагностики ВИЧ-инфекции, благодаря разработке и введению новых технологий, был достигнут большой прогресс. За эти годы было создано четыре поколения тест-систем, которые сменяли друг друга. Прогресс в диагностике позволил при каждом поколении упростить процесс тестирования, автоматизировать его, тем самым минимализировав «человеческий фактор», а также увеличить достоверность результата на более ранних сроках. Применяемые в настоящее время тест-системы четвертого поколения способны определять как антитела, так и антиген ВИЧ, а также некоторые тест-системы четвертого поколения способны обнаружить ВИЧ-2 и редкие штаммы ВИЧ-1, такие как подтип 0. Определение антигена р24 позволяет определить наличие ВИЧ еще до наработки антител, что уменьшает период «серологического окна» (период от заражения до появления значимого количества антител, т. е. в этот период анализы могут быть отрицательными, а в реальности человек инфицирован).

В нашей стране порядок проведения лабораторного исследования на наличие антигенов вируса ВИЧ и антител к этому вирусу строго регламентирован приказами Министерства здравоохранения РФ и санитарно-эпидемиологическими правилами СП 3.1.5.2826-10«Профилактика ВИЧ-инфекции». Порядок включает:

— этап скринигового (отборочного) исследования иммуноферментными (ИФА) и иммунохемилюминесцентными (ИХЛА) методами, разрешенными к использованию;

— этап верификационного (подтверждающего) исследования методом иммуноблота в референс-лаборатории уполномоченной специализированной медицинской организации (СПИД-Центрах).

Скриниговые тесты призваны выявлять подозрительных лиц и отсеивать здоровых. Все скрининговые тесты обязаны быть высокочувствительными, чтобы не пропустить инфицированного. Из-за этого ИФА может дать положительный ответ («вероятно болен») у неинфицированных людей — ложноположительный результат. Такие результаты встречаются у больных аутоиммунными заболеваниями, миеломой, гемофилией, при инфекции, вызванной вирусом Эпштейн-Барра, алкогольном гепатите. Встречаются подобные ложно-положительные реакции в 0.020 — 0.5% случаев. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться в начальной стадии первичной ВИЧ-инфекции (в периоде «серонегативного окна»), при тяжелой иммунодепрессии в поздних стадиях СПИДа, наличии дефектов иммунной системы.

Как правило, рекомендуется сдавать тест 4-го поколения в 4-6 недель после возможного заражения — именно в это время присутствует пик антигена р 24 ВИЧ. Тем не менее, именно через 12 недель после возможного заражения гарантировано вырабатываются антитела и тест положителен. Поэтому при высоком риске заражения надо сдавать два теста: один спустя месяц (для обнаружения антигена), если тест отрицательный — второй тест спустя 12 недель. Замедление в выработке антител обусловлено приемом антиретровирусных препаратов (простконтактная профилактика), цитостатиков, наличием генетических врожденных дефектов иммунной системы.

Диагноз ВИЧ-инфекции ставится только после проведения подтверждающего теста (иммуноблота) и получения положительного результата. Если результат в иммунном блоте отрицательный или сомнительный, биологический образец исследуется в тест-системе для определения антигена р24 ВИЧ или ДНК/РНК ВИЧ методом ПЦР. При обнаружении антигена р 24 ВИЧ или ДНК/РНК ВИЧ также может быть определена ВИЧ-инфекция.

Как узнать свой ВИЧ-статус

Как узнать свой ВИЧ-статус

Человек может не подозревать, что у него в крови есть ВИЧ. И таких случаев достаточно много. Ситуация неведения очень опасна тем, что ВИЧ-инфицированный человек не может вовремя начать принимать специальную терапию, а также защитить своих близких от передачи вируса.

Знать свой ВИЧ-статус – это так же естественно, как знать о других своих хронических болезнях. Зная правду, пусть порой и горькую, человек сможет позаботиться о себе (регулярно наблюдаться у врача и при необходимости принимать бесплатную терапию) и защитить окружающих его людей.

 

Тестирование на ВИЧ проводится добровольно (по собственному желанию) или обязательно (например, при решении стать донором).

Пройти тестирование на ВИЧ можно практически в каждом городе нашей страны. Российское законодательство гарантирует каждому гражданину возможность бесплатно сдать тест на ВИЧ.

Пройти тестирование на ВИЧ или нет – решать Вам, но иногда люди ошибочно полагают, что у них в жизни не было ситуаций, в которых могла произойти передача вируса.

 

Обязательному тестированию на ВИЧ подлежат:

1. Доноры крови, жидкостей, тканей (в России тестируют самих доноров, за рубежом – образцы крови, жидкостей, тканей).

2. Люди, занимающиеся определенным видом деятельности:

2.1. Врачи, средний и младший медицинский персонал центров по профилактике и борьбе со СПИДом, учреждений здравоохранения, специализированных отделений и структурных подразделений учреждений здравоохранения, занятые непосредственным обследованием, диагностикой, лечением, обслуживанием, а также проведением судебно-медицинской экспертизы и другой работы с лицами, инфицированными вирусом иммунодефицита человека, имеющие с ними непосредственный контакт;

2.2. Врачи, средний и младший медицинский персонал лабораторий (группы персонала лабораторий), которые осуществляют обследование населения на ВИЧ-инфекцию и исследование крови и биологических материалов, полученных от лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека;

2.3. Научные работники, специалисты, служащие и рабочие научно-исследовательских учреждений, предприятий (производств) по изготовлению медицинских иммунобиологических препаратов и других организаций, работа которых связана с материалами, содержащими вирус иммунодефицита человека.

3. Иностранные граждане, въезжающие в Россию на срок более трех месяцев. Для получения российской визы на срок более трех месяцев иностранный гражданин обязан предоставить справку о своем ВИЧ-статусе. Иностранный гражданин, находящийся в России более трех месяцев, при обнаружении у него ВИЧ-инфекции будет немедленно депортирован.

 

Виды тестов на ВИЧ

Обнаружить вирус в организме человека возможно только при помощи специальных тестов. Процесс тестирования заключается в выявлении антител, которые вырабатываются организмом в ответ на появление вируса, или в определении ДНК самого вируса.

 

1-й тест – иммуноферментный анализ (ИФА). Самый распространенный метод диагностики, применяемый при стандартном обследовании в поликлиниках и больницах. ИФА определяет наличие антител к ВИЧ в крови человека. Достоверный результат этого теста можно получить примерно через три месяца после того, как вирус попал в организм. Именно за этот период в крови человека накапливается то количество антител, которое может определить иммуноферментный анализ.

Отрицательный результат этого теста означает, что в крови человека нет антител к ВИЧ, и соответственно, нет и самого вируса. Однако существует такое понятие, как ложноотрицательный результат. Он может быть получен, если антитела к вирусу еще не успели выработаться в достаточном количестве, то есть тестирование произошло в «период окна» — менее чем через три месяца после попадания ВИЧ в организм человека. Чтобы удостовериться, что отрицательный результат действителен, имеет смысл пройти тест еще раз через три месяца.

Положительный результат теста означает, что в крови есть антитела к ВИЧ, и соответственно, сам вирус. В 1% случаев результат этого теста может оказаться ложноположительным. Это может произойти, когда тест принимает за антитела к ВИЧ другие антитела. Ложноположительный результат чаще всего выявляется при обследовании пациентов с хроническими инфекционными, аутоиммунными, онкологическими и некоторыми другими заболеваниями, а также в случае беременности. Поэтому любой положительный результат обязательно проверяют на более чувствительном тесте.

 

2-й тест – иммуноблот (ИБ). Этот тест определяет наличие специфических антител к ВИЧ. Результат может быть положительным, отрицательным или неопределенным (сомнительным). Положительный результат иммуноблота в 99,9% случаев означает, что в крови есть ВИЧ.

Неопределенный результат может означать, что в кровотоке человека присутствует ВИЧ, но организмом выработаны еще не все виды антител к нему. Как правило, через 1-3 месяца с момента получения сомнительного результата в сыворотке появляются одно за другим все антитела к ВИЧ. В этом случае сомнительный результат является свидетельством начальной стадии ВИЧ-инфекции. Неопределенный результат иммуноблота также может означать, что человек не инфицирован ВИЧ, но в его организме есть антитела, похожие на антитела к ВИЧ. Такой результат бывает у больных туберкулезом, онкологических больных, у людей, получавших многократные переливания крови, у беременных женщин. При неопределенном результате ИБ пациент находится под наблюдением врача-инфекциониста и повторяет анализ через 1, 3 и 6 месяцев.

 

3-й тест – полимеразная цепная реакция (ПЦР). Он используется для определения РНК (наследственного материала) вируса. Это очень эффективная и чувствительная реакция, позволяющая получить результат, исследуя РНК всего одной клетки путем умножения (или амплификации) специфических последовательностей РНК.

ПЦР используется для:

•           определения наличия или отсутствия самого ВИЧ в «период окна» и при неясном результате иммуноблота;
•           для определения и контроля концентрации ВИЧ в крови;
•           для определения ВИЧ-статуса новорожденных, родившихся от ВИЧ-положительных матерей;
•           в службах переливания крови.

Чувствительность данного теста очень высока: он обнаруживает сам вирус, причем через короткое время: в среднем около десяти дней с момента предполагаемого заражения. Однако эта же высокая чувствительность позволяет тесту реагировать и на многие другие инфекции, что приводит к частым ложноположительным результатам. Поэтому по результатам этого теста никогда не ставится окончательный диагноз.

Проведение ПЦР требует сложного лабораторного оборудования и высокой квалификации специалистов. Метод является очень дорогостоящим.

Процедура сдачи анализа

Процедура сдачи анализа на ВИЧ одинакова вне зависимости от того, сдается кровь анонимно или нет. Сначала заполняется бланк (с указанием имени или без), затем происходит обычный забор крови из вены в объеме нескольких миллилитров при помощи шприца или специальной вакуумной помпы. Весь используемый инструментарий стерильный и одноразовый. Результаты анализов будут готовы, как правило, через один-два дня.

Перед анализом можно попросить консультанта рассказать, в чем суть анализа, и какие бывают результаты теста. На основании рассказа о какой-то конкретной ситуации специалист может оценить, насколько высок был риск передачи ВИЧ.

После получения результата теста также стоит поговорить с консультантом. Как правило, после теста обсуждается полученный результат и действия, которые рекомендуется предпринять в том или ином случае. Консультация проводится анонимно.

Иммуноблот рекомбинантный, антитела к вирусу гепатита С, IgG (recomBlot HCV IgG)

Метод определения Иммуноблот (технология: рекомбинантный Line Blot).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.   Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см. тест № 79). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы. Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты № 321 и № 323). Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест № 324) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.

Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.

Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.

Исключения:

1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
2. иммуносупрессированные пациенты;
3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).

Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.

результатов, положительных и отрицательных, причины

Что такое тест на антинуклеарные антитела?

Тест на антинуклеарные антитела — это анализ крови, который ищет в вашем организме определенные виды антител. Его также называют тестом на ANA или FANA (флуоресцентные антинуклеарные антитела).

Антитела — это белки, которые ваша иммунная система вырабатывает для борьбы с бактериями, вирусами и другими микробами. Но иногда ваша иммунная система может принять части вашего собственного тела за чужеродных захватчиков. Он высвобождает специальные антитела, называемые «аутоантителами», которые атакуют ваши клетки и ткани.Аутоантитела могут повредить ваши суставы, кожу, мышцы и другие части вашего тела. И они могут быть признаком аутоиммунных заболеваний, в том числе:

• Системная красная волчанка, наиболее распространенный тип волчанки
• Ревматоидный артрит
• Склеродермия
• Синдром Шегрена

Иногда люди с онкологическими заболеваниями или люди, принимающие определенные лекарства. на тесте ANA. Некоторые люди без каких-либо заболеваний дают положительный результат на тестах ANA.

Зачем мне нужен этот тест?

Ваш врач может назначить тест ANA, если у вас есть симптомы аутоиммунного заболевания, например:

Подготовка к тесту ANA

Обычно вам не нужно готовиться к тесту ANA.Но заранее сообщите врачу, какие лекарства, витамины и добавки вы принимаете. Они могут повлиять на результаты теста ANA.

Процедура антиядерного теста тела

Лаборант возьмет образец вашей крови — обычно из вены на руке. Они наложат повязку на верхнюю часть руки, чтобы вена наполнилась кровью и опухла. Затем они очистят это место антисептиком и введут вам иглу в вену. Ваша кровь будет собираться во флакон или пробирку.

Анализ крови должен занять всего пару минут.После того, как ваша кровь будет взята, игла и повязка будут удалены, и вы получите кусок марли и повязку, наложенную на эту область.

Образец крови будет отправлен в лабораторию для тестирования. Лаборатория проверит, есть ли в вашей крови антинуклеарные антитела.

Риски, связанные с антиядерным тестом тела

Анализ крови имеет очень мало рисков. Во время забора крови вы можете почувствовать легкое покалывание, а позже можете заметить небольшой синяк.

У вас также может быть небольшая вероятность:

• Головокружение или обморок
• Кровотечение
• Болезненность
• Ушиб

Результаты теста на антинуклеарные антитела

Ваш тест положительный, если он обнаружит антиядерные антитела в вашей крови.Отрицательный результат означает, что ничего не найдено. Положительный результат теста не означает, что у вас аутоиммунное заболевание. От 3% до 15% людей без заболеваний имеют антинуклеарные антитела. Некоторые лекарства или другие заболевания также могут вызывать их.

Не у всех, кто страдает аутоиммунным заболеванием, будет положительный результат теста. Вот почему анализ крови на ANA — это лишь часть диагностики аутоиммунного заболевания врачом. Они также учтут ваши симптомы, проведут физический осмотр и, скорее всего, проведут другие тесты.

Условия, которые обычно вызывают положительный результат теста ANA, включают:

Продолжение

Иногда результат теста ANA может быть положительным, если у вас есть одно из следующих условий:

Около 20% здоровых людей будут иметь положительный результат теста на антинуклеарные антитела, даже хотя у них нет аутоиммунного заболевания.У вас больше шансов получить ложноположительный результат, если вы:

Нужны ли мне другие тесты?

Тест ANA только показывает, что у вас может быть аутоиммунное заболевание; он не может определить точный.

Если ваш тест на ANA положительный, ваш врач может проверить вас на наличие ANA, специфичных для определенных заболеваний:

• Антицентромерный тест диагностирует склеродермию.
• Тест на наличие двухцепочечной ДНК (анти-дцДНК) позволяет диагностировать волчанку.
• Антигистоновый тест позволяет диагностировать волчанку, вызванную приемом лекарств.
• Панель ENA помогает врачу определить, какое у вас аутоиммунное заболевание.

Убедитесь, что вы понимаете результаты своего теста ANA. Спросите, какие еще тесты вам нужны для подтверждения вашего диагноза. Также узнайте, как результаты ваших анализов повлияют на ваше лечение.

Устранение недостатков тестирования ANA с помощью IFA

Чарна Альберт

, март 2020 г. — Стандартизация непрямого иммунофлуоресцентного тестирования на антинуклеарные антитела является критически важной задачей для лабораторного сообщества, и теперь это становится более актуальным, поскольку новые критерии классификации делают положительный ANA ключевым фактором в диагностике волчанки, — сказал Марк Х.Венер, доктор медицины, на заседании ежегодного собрания Американской ассоциации клинической химии в прошлом году.

Иммунофлуоресцентный анализ (IFA) с использованием культивированной линии клеток HEp-2 является традиционным предпочтительным методом скрининга ANA, рекомендованным Американским колледжем ревматологии, сказал д-р Венер, профессор кафедры лабораторной медицины и адъюнкт-профессор кафедры медицины. , Школа медицины Вашингтонского университета. Фактически, ACR считает его эталонным методом скрининга, как и Всемирная организация здравоохранения и Европейская инициатива по стандартизации аутоиммунных заболеваний.Согласно международным рекомендациям по оценке аутоантител (Agmon-Levin N, et al. Ann Rheum Dis. 2014; 73 [1]: 17–23), «если клиническое подозрение сильное, а альтернативный метод отрицательный, он обязательно для проведения ИФА », — сказал д-р Венер, который также является содиректором клиники склеродермии UW Medical Center и директором иммунологии и клинических лабораторий в UW Medical Center.

Тем не менее, ревматологи выразили обеспокоенность по поводу противоречивых результатов тестирования ANA, проведенного IFA.Некоторые из того, что слышат в ревматологическом сообществе: «Вы делаете это неправильно»; «Мы не можем доверять вашим результатам»; «Ваши ANA не всегда положительны при волчанке» (хотя ожидается).

«Какова реакция лабораторного сообщества?» — спросил доктор Венер. «Является ли IFA по-прежнему золотым стандартом? Это все еще полезно или устарело? Можно ли его улучшить или переработать? Как нам интегрировать ANA IFA с другими тестами? »

«Я думаю, многие скажут, что ANA от IFA не является золотым стандартом, — сказал он, — и у нас есть альтернативные методы ANA.«Они включают антиген-специфические твердофазные технологии, такие как ELISA, системы мультиплексных шариков и твердофазные флуоресцентные иммуноанализы. Но следует ли использовать твердофазные анализы для скрининга ANA вместо иммунофлуоресценции, остается открытым и спорным вопросом.

«Существует неоднозначный ответ на этот вопрос, — сказал доктор Венер. Тест ANA IFA можно улучшить. «Фактически, если бы у меня был выбор, мы бы назвали это Американской ассоциацией клинической алхимии, потому что я попытаюсь убедить вас, что мы можем пройти этот несовершенный тест ANA IFA и сделать его более совершенным, если не 24 -каратное золото.”

ACR созвал комитет (членом которого был доктор Венер) более десяти лет назад, чтобы обсудить растущее использование не-IFA методов для скрининга ANA. Его члены написали документ с изложением позиции, который подтвердил, что IFA является золотым стандартом в тестировании ANA в то время, и рекомендовал лабораториям указывать в отчетах об испытаниях ANA методы, используемые для скрининга (Meroni PL, et al. Ann Rheum Dis .2010; 69 [8]: 1420–1422).

ACR традиционно возражает против использования методов, отличных от IFA, для скрининга ANA.Венер сказал, потому что иммуноферментные и мультиплексные анализы не так чувствительны. Клетки HEp-2 содержат больше антигенов, чем твердофазные анализы. Иммунофлуоресценция имеет 95-процентную чувствительность для обнаружения волчанки; для сравнения, мультиплексный экран при заболеваниях соединительной ткани чувствителен на 69%, сказал он, цитируя статью 2018 года, опубликованную в Autoimmunity Reviews (Bizzaro N, et al. 2018; 17 [6]: 541–547). Для склеродермии чувствительность составляет 97 процентов по ИФА и 81 процент по экрану CTD. «Это беспокойство или жалоба ревматологов, если хотите», — сказал доктор.Венер сказал: «Если мы заменим скрининг чем-то, кроме иммунофлуоресценции, это станет проблемой».

Волчанка сложно диагностировать, потому что, хотя заболевание встречается относительно редко, его симптомы являются общими. «Но есть признак. Постоянным признаком волчанки является положительный результат ANA, а чувствительные тесты на волчанку и некоторые другие заболевания соединительной ткани зависят от положительного результата ANA ».

Но проверка ANA, проводимая IFA, далека от совершенства. Одним из решений, по словам доктора Венера, является скрининг как с помощью IFA, так и с помощью мультиплексного тестирования.

Доктор Венер

«Есть дополнительные расходы, но если есть достаточно высокая вероятность предварительного тестирования, я думаю, что комбинация будет полезной», — сказал он. Если ИФА и мультиплексное тестирование дают подтверждающие результаты, которые совпадают, это обеспечивает сильную положительную прогностическую ценность. Кроме того, информация от мультиплексного тестирования может сделать результаты IFA более интерпретируемыми, и наоборот. Например, по его словам, низко-положительные антитела против анти-U1-рибонуклеопротеина в результате мультиплексирования являются довольно распространенным результатом, который, вероятно, будет иметь клиническое значение только в том случае, если тестирование с помощью IFA обнаружит совместимый ANA с ядерным грубым пятнистым рисунком (образец, связанный с MCTD). .С другой стороны, низкий титр U1-RNP с отрицательным ANA, вероятно, не является диагностически значимым и может вводить в заблуждение.

«Опытные врачи могут понять это явление, и лаборатория может помочь с этой интерпретацией», — добавил он.

Для тех, кто работает в клинической лаборатории, существует еще один вид синергии: тесты могут использоваться «как мера качества» друг для друга. «Поскольку специфические антитела, такие как U1-RNP или центромера, должны иметь связанные паттерны IFA, если они противоречат друг другу, это настораживает лабораторию», — сказал он.

Несоответствие между различными методами тестирования можно использовать «для проверки и, возможно, сброса пороговых значений IFA и результатов конкретных антител», — сказал он, потому что тесты на антитела «действительно должны совпадать». В долгосрочной перспективе, по его словам, лабораторный результат мультиплексирования может частично зависеть от результатов IFA — другими словами, от того, является ли ANA положительным или отрицательным, а также от модели.

Интегрированный подход к тестированию может предоставить директорам лабораторий возможность расширить неопределенную область мультиплексных результатов, что часто является проблемой для интерпретации, сказал он.«Это также может быть предупреждением о пересмотре порогового значения положительного результата для IFA ANA, используемого в отдельной лаборатории». Результаты должны быть взаимодополняющими, то есть, если с течением времени наблюдается слишком много несоответствий, это сигнал для пересмотра того, что делается.

Например, неоднократно положительный рибонуклеопротеин с низким титром и отрицательный ИФА HEp-2 предполагает, что лаборатория может расширить неопределенный диапазон RNP, сказал он. «Мы не хотим быть слишком бесцеремонными», говоря, что отдельные лаборатории меняют результаты.Но «расширение неопределенной зоны для аналита или переоценка пороговых значений IFA» — это то, что лаборатории имеют право делать в пределах своей популяции.

«Многие из наших результатов испытаний попадают в этот неопределенный диапазон, и согласование результатов IFA с результатом мультиплексирования позволяет нам тщательно изменять этот результат, исходя из клинических данных, который мы считаем целесообразным», — добавил он.

По словам доктора Венера, проблема, с которой должно столкнуться лабораторное сообщество, заключается в отсутствии стандартизации тестирования ANA между различными тестами и разными лабораториями.

Исследование, проведенное в 2018 году, показало, что отрицательность ANA может варьироваться в зависимости от поставщика и комплекта (Pisetsky DS, et al. Ann Rheum Dis. 2018; 77 [6]: 911–913). Исследователи протестировали сыворотку 103 пациентов с установленной волчанкой с использованием трех разных наборов IFA и обнаружили, что «частота отрицательного ответа на ANA варьировала от 5 до 23 из 103 образцов», — пишут авторы. Тестирование также проводилось с использованием ELISA и мультиплексных анализов на шариках; 12 и 14 образцов были отрицательными соответственно. Авторы говорят, что результаты ставят под вопрос, следует ли использовать положительность ANA для определения права на участие в клинических испытаниях.

Расхождения в результатах ANA между лабораториями также могут иметь далеко идущие клинические последствия. Доктор Венер сослался на исследование 2016 года, в котором измерялось соответствие между парными результатами ANA, полученными в двух коммерческих лабораториях. Авторы провели анализ чувствительности, чтобы определить степень согласия с использованием различных критериев. Согласно наиболее консервативному определению согласия — отрицательные результаты тестирования в обеих лабораториях или положительные титры в двухкратном диапазоне друг от друга — совпадение наблюдалось в 18 процентах парных лабораторных результатов.Сорок два процента тестирования соответствовали наиболее мягким критериям, которые определяли титры ANA менее 1: 160 как отрицательные и допускали меньшую или равную четырехкратной разнице в титрах, чтобы быть приемлемым соглашением (Abeles AM, et al. Clin Rheumatol .2016; 35 [7]: 1713–1718).

Авторы пишут: «Это открытие ставит под сомнение надежность тестирования ANA в том виде, в каком оно проводится в настоящее время, и предполагает, что результаты могут частично зависеть от лабораторного центра, в который направляются пациенты.”

«Это проблема лабораторного сообщества», — сказал доктор Венер. «Легко увидеть что-то очень яркое или явно черное и негативное, но где же конечная точка? Где провести грань между положительным и отрицательным? » Фактически, это проблема для флуоресцентной микроскопии в целом.

Существует проблема внутри лабораторий и между лабораториями, «но есть также проблема между наборами и между реагентами», — сказал доктор Венер, цитируя исследование 2012 года, опубликованное в Американском журнале клинической патологии (Copple SS, et al.2012; 137 [5]: 825–830). Авторы сравнили результаты пяти анализов ANA IFA с использованием образцов сыворотки от пациентов с различными заболеваниями соединительной ткани и от 100 здоровых пациентов из контрольной группы. В целом, согласие между пятью анализами составило 78 процентов (анализы считались согласующимися, когда они демонстрировали одинаковый титр и удвоенное разведение).

«Это было тщательно проведенное исследование в рамках одной лаборатории с использованием единого критерия отсечения, при этом разные технологи смотрели на слайды», — сказал д-р.- сказал Венер. «Среди пациентов с волчанкой один и тот же образец, в зависимости от того, какой набор использовался, можно назвать положительным при 1:80 или положительным при 1: 2560. Один и тот же образец можно назвать отрицательным на АНА или положительным при титре до 1: 320 ».

По его словам, количественное определение титра

является сложной задачей, но оно важно для клинической интерпретации, клинических испытаний, эпидемиологической классификации, а также для назначения и оплаты лекарств. «Последнее может зависеть от результатов по аутоантителам».

Это будет иметь еще большее значение для диагностики волчанки, потому что в 2019 году ACR и Европейская лига против ревматизма выпустили новые критерии классификации волчанки, которые устанавливают положительный результат ANA с титром 1:80 как решающий для диагностики волчанки (Aringer M. . Arthritis Rheumatol. 2019; 71 [9]: 1400–1412).

«Используя предыдущие критерии классификации, положительный результат ANA был одним из нескольких равнозначных клинических и лабораторных признаков», — сказал д-р Венер. «Согласно новым критериям, если у пациента нет диагноза биопсии почки на наличие волчаночного нефрита, должен быть положительный ANA с титром 1:80 или выше 95-го процентиля для контрольной популяции».

«Это почти как если бы у вас не могло быть волчанки по критериям классификации, если у вас нет положительного ANA как минимум 1:80.”

Критерии 2019 года, по словам доктора Венера, придают положительности ANA «центральную роль — а не только роль участия — в классификации волчанки. В свою очередь, это ложится дополнительным бременем на лаборатории, которые должны знать пороговое значение 95-го процентиля референсного диапазона их метода ANA, и побуждает лаборатории передавать эту информацию врачам ».

Теперь, когда критерий входа для волчанки составляет 1:80, возникает вопрос, что такое 1:80?

В рекомендациях

, опубликованных в 2014 г., говорится, что «надлежащий [скрининг] ANA со стороны IFA зависит от реагентов, оборудования и других местных факторов; таким образом, скрининговое разведение следует определять на месте »(Agmon-Levin N, et al. Ann Rheum Dis .2014; 73 [1]: 17–23). И «аномальный ANA должен иметь титр выше 95-го процентиля здоровой контрольной популяции. В общем, скрининговое разведение 1: 160 на обычных субстратах HEp-2 часто подходит для обнаружения ANA », — сказал д-р Венер, цитируя руководящие принципы оценки ANA 2014 года.

По его словам, эта рекомендация противоречит недавно установленным критериям включения в диагностику волчанки. «С одной стороны, мы говорим, что лаборатории должны выбрать 1: 160 для скринингового титра.Да, но, кстати, 1:80 — критерий входа для волчанки. Ясно, что как профессия нам нужно прояснить, что мы подразумеваем под положительной АНА ».

ACR и EULAR предложили соотношение 1:80 на основе систематического обзора литературы и мета-регрессии диагностических данных по эффективности ANA для классификации волчанки, сказал доктор Венер (Leuchten N, et al., Arthritis Care Res . 2018; 70 [3] 428–438). «Но неявное предположение этого анализа состоит в том, что все анализы IFA дают одинаковый результат.”

Учитывая доказательства, он сказал: «Я просто не думаю, что это правда. Поэтому существует повышенная потребность в стандартизации, если мы собираемся поддерживать клинические и эпидемиологические группы, использующие этот титр ».

Хорошая новость, по его словам, заключается в том, что в настоящее время разрабатывается ряд подходов к повышению согласованности отчетности ANA. Например, Комитет по диагностической иммунологии и проточной цитометрии CAP, в котором он является представителем AACC, «изучает [это] более формальным образом.”

Организациям и отраслям необходимо координировать усилия, сказал он, добавив: «Я думаю, что такие организации, как ACR, EULAR, AACC и CAP, могли бы работать с FDA для этого». Он привел несколько примеров — INR для нормализации протромбинового времени, попытки стандартизировать тесты, такие как холестерин, — и сказал: «Я думаю, нам пора подумать о том, как это сделать для ANA».

Директора и сотрудники лабораторий могут улучшить последовательность отчетности в отдельных лабораториях, «зная распространенность ANA в популяции с использованием метода вашей лаборатории», — сказал он.Лаборатории также должны сообщать о методе ANA, используемом для скрининга — на самом деле, в 2019 году CAP добавила новое требование к контрольному списку Программы аккредитации лабораторий, в котором говорится, что лаборатории должны включать в отчет ANA описание метода, используемого для скрининга ANA (если метод не явным образом в имени теста) (IMM.39700).

По словам доктора Венера, автоматизация

— это еще один путь к повышению согласованности между лабораториями. «Автоматические инструменты устанавливают пороги срабатывания на основе интенсивности флуоресценции.По сути, калибровка по одной точке выше или ниже порога считается положительной. Это согласуется с интенсивностью флуоресцентного света ».

Но отдельные лаборатории могут делать почти то же самое, имея калибратор конечных точек или калибровку по одной точке выше или ниже порогового значения, сказал он. «Текущие положительные и отрицательные контроли редко используются на этом пороговом уровне. Но лаборатории могут разработать или приобрести калибраторы конечных точек, которые будут выполнять эту роль ».

Ключевой вопрос заключается в том, можно ли использовать расширенную автоматизацию для устранения ANA из-за недостатков тестирования IFA, сказала Мелисса Снайдер, доктор философии, содиректор лаборатории иммунологии антител Mayo Clinic, которая на той же сессии AACC рассказала, может ли автоматизация вывести тестирование ANA. из темной комнаты в современную лабораторию.”

Исследование, проведенное Bizzaro и др. В 2014 году, в котором сравнивали шесть автоматизированных платформ — Aklides, EuroPattern, Nova View, Helios, Zenit G-Sight и Image Navigator — обнаружило примерно 90-процентное согласие по положительным результатам ( Autoimm Rev . 2014; 13 [3]: 292–298). Авторы отправили 144 сыворотки ANA в шесть лабораторий для ручного тестирования ANA IFA, определили согласованный результат для каждого образца (за исключением 17 положительных и шести отрицательных образцов, по которым не удалось достичь консенсуса), а затем повторили тестирование на шести автоматизированных платформах.По отрицательным образцам системы отличались большей вариабельностью, от 79% до 94,1% согласия.

«Так что хороший консенсус по положительному соглашению, немного меньше по отрицательному», — сказал д-р Снайдер.

Доктор Снайдер сказал, что

Bizzaro и др. Также сравнили расчетный титр с ручным титром и автоматическую интерпретацию образца с ручной интерпретацией. Соглашение о титре (только для пяти платформ), которое авторы измерили с помощью калькулятора ро Спирмена, варьировалось от.С 627 до 0,839. Платформы имели большую вариативность в отношении соответствия шаблонов (сравнивались четыре), в диапазоне от 50 до 80 процентов.

Они также рассмотрели сравнение единиц интенсивности света как положительного / отрицательного отсечки и то, как изменение единицы интенсивности света влияет на чувствительность и специфичность по сравнению с согласованным результатом. Там тоже была «довольно приличная стандартизация».

«Что я понимаю из этого, так это то, что эти системы могут немного помочь нам в стандартизации положительного / отрицательного согласия», — сказал д-р.- сказал Снайдер. С другой стороны, согласование образца и титра «это то, над чем мы еще можем поработать».

Лаборатория доктора Снайдера использует передовую платформу автоматизации для проведения тестирования ANA. Система автоматизирует не только обработку слайдов и образцов, но также интерпретацию слайдов, идентификацию паттернов и оценку титра «на основе интенсивности флуоресценции, считанной с цифрового изображения», а не серийного разведения.

Хотя «мы, безусловно, сократили время нашего технолога на чтение, важно отметить, что вам по-прежнему требуется опыт работы с этими системами», — сказала она.Технологи Mayo Clinic просматривают результаты автоматических считывателей, уделяя особое внимание положительной / отрицательной интерпретации и закономерностям. «Они могут соглашаться с тем, что называет компьютер, или могут не соглашаться, и в этот момент они вносят изменения».

Для оценки производительности автоматизированной системы ее лаборатория собрала данные о 1559 образцах ANA, представленных для тестирования IFA, и сравнила интерпретации автоматического устройства для считывания слайдов с результатами, которые в конечном итоге были внесены в историю болезни.

Технологи лаборатории и устройство для считывания слайдов согласовали почти 100% отрицательных образцов. (Устройство для считывания слайдов идентифицировало 909 образцов как отрицательные; технологи не идентифицировали ни один из этих образцов как положительные, но повторили тестирование двух образцов.) Однако они подтвердили отрицательные 26 процентов образцов, определенных компьютером как положительные.

«Отсечка для положительного / отрицательного на компьютере может быть установлена ​​немного ниже, — предположил доктор Снайдер.В целом положительное / отрицательное согласие между ручным и автоматическим переводом составило 86,6%.

Согласованность образца составила 45 процентов. «Это очень похоже на то, что было изучено группой Биццаро», — сказал д-р Снайдер. В большинстве случаев, когда технологи не соглашались с автоматическим устройством считывания слайдов по шаблону, образец в конечном итоге был признан отрицательным.

В целом, автоматизированные системы могут привести к улучшенному качественному согласованию, сказала она, в то время как улучшения в согласовании образца и титра «еще не реализованы.”

«Мы видим немного больше объективности в нашей интерпретации, особенно в нашем положительном / отрицательном согласии». Но, по ее словам, опыт технологов по-прежнему является критически важным компонентом для выполнения анализа ANA с помощью IFA, даже при автоматизации чтения слайдов.

Чарна Альберт — помощник редактора CAP TODAY.

Антинуклеарные антитела (ANA) — ознакомьтесь с тестом

Источники, использованные в текущем обзоре

(28 декабря 2017 г.) Персонал клиники Мэйо.ANA тест. Доступно на сайте https://www.mayoclinic.org/tests-procedures/ana-test/about/pac-20385204. Доступ 23 марта 2018 г.

Американский колледж ревматологии. Антинуклеарные антитела (АНА). Доступно в Интернете по адресу: https://www.rheumatology.org/I-Am-A/Patient-Caregiver/Diseases-Conditions/Antinuclear-Antibodies-ANA. Доступ 23 марта 2018 г.

Петри М., Орбай А., Аларкон Г.С. и др. Получение и проверка критериев классификации системной красной волчанки в Международных сотрудничающих клиниках по системной волчанке. Arthritis Rheum. 2012 Август; 64 (8): 2677–2686. DOI: 10.1002 / art.34473. Доступно на сайте https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3409311/pdf/nihms-365115.pdf. Доступ 27 марта 2018 г.

Пагана, Кэтлин Д., Пагана, Тимоти Дж. И Пагана, Тереза ​​Н. (© 2015). Справочник по диагностическим и лабораторным испытаниям Мосби, 12-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. С. 87-89.

(4 сентября 2014 г.) Аль-Зугби А., Griffing GT. Антинуклеарные антитела. Доступно на сайте https: // emedicine.medscape.com/article/2086616-overview. Доступ 23 марта 2018 г.

(11 июля 2013 г.). Кассан С. Что нужно знать о синдроме Шегренса. Доступно в Интернете по адресу: https://resources.lupus.org/entry/what-you-need-to-know-about-sjögrens-syndrome. По состоянию на 25 марта 2018 г.

Патель Р., Шахан А. Эпидемиология синдрома Шегрена. Доступно на сайте https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4122257/pdf/clep-6-247.pdf. Доступ 25 марта 2018 г.

11 февраля 2018 г.) Ранатунга СК.Обследование при синдроме Шегрена. Доступно на сайте https://emedicine.medscape.com/article/332125-workup#c7. По состоянию на 25 марта 2018 г.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Медицинская энциклопедия Гейла: Тест на антинуклеарные антитела. Доступно в Интернете по адресу http://www.findarticles.com/p/articles/mi_g2601.

Кавано А., Томар Р., Ревейл Дж., Соломон Д.Х., Homburger HA. Руководство по клиническому использованию теста на антинуклеарные антитела и тестов на специфические аутоантитела к ядерным антигенам. Архив патологии и лабораторной медицины , 2000, 124 (1): 71-81.

Стивен Лобель, доктор философии, D-ABMLI, MBA. Директор лаборатории Quest Diagnostics, Балтимор, Мэриленд.

Х. Джеймс Уильямс, доктор медицины. Профессор медицины Томас Э. и Ребекка Д. Джереми, возглавляемые президентом кафедры исследований артрита, Медицинская школа Университета штата Юта, Солт-Лейк-Сити, штат Юта.

Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (© 2007). Справочник Мосби по диагностическим и лабораторным испытаниям, 8-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. С. 90-92.

Томас, Клейтон Л., редактор (1997). Циклопедический медицинский словарь Табера. Компания F.A. Davis, Филадельфия, Пенсильвания [18-е издание].

Ривз, У. (июль 2006 г.). Тест на флуоресцентные антинуклеарные антитела (FANA): «Ложноположительный». Американский колледж ревматологии [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.rheumatology.org/public/factsheets/fana.asp. Доступно 4 сентября 2007 г.

Fosam, H. (24 апреля 2006 г.). Многоликая волчанка: экспертное интервью со Стивеном Пэджетом, доктором медицины.Из Medscape Rheumatology, экспертное интервью 2006 г .; 8 (1) [он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/529590. Доступно 4 сентября 2007 г.

Релчлин, М. (3 февраля 2005 г., обновлено). Лабораторные тесты, используемые при диагностике волчанки. Lupus Foundation of America [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.lupus.org/education/brochures/labtests.html.

(август 2003 г., пересмотренный). Системная красная волчанка. Национальный институт артрита, скелетно-мышечных и кожных заболеваний, Раздаточный материал по здоровью [он-лайн информация].Доступно в Интернете по адресу http://www.niams.nih.gov/hi/topics/lupus/slehandout/. Доступно 15.04.07.

Bylund DJ, Nakamura RM: Органоспецифические аутоиммунные заболевания, в Клиническая диагностика и лечение Генри с помощью лабораторных методов , 21-е изд. Ричард Макферсон и Мэтью Пинкус, ред. Сондерс Эльзиевье: Филадельфия. ПП 945-960, 2007.

.

Питер JB. Антинуклеарные антитела, в Использование и интерпретация лабораторных тестов в ревматологии , Джеймс Б. Питер, изд.Специализированные лаборатории: Лос-Анджелес. С. 10-11, 1998.

Смолли DL. Аутоиммунные заболевания, в Использование и консультации в клинических лабораториях , Б. Г. Дэвис, Д. Массачусетс, М. Л. Бишоп, ред. У. Б. Сондерс: Филадельфия. Пп 467-483, 1999.

.

Пагана, Кэтлин Д. и Пагана, Тимоти Дж. (2006). Руководство Мосби по диагностическим и лабораторным тестам, 3-е издание: Mosby Elsevier, Saint Louis, MO. С. 91-93.

Burtis C, Ashwood E, Bruns D, ред. (2006). Учебник Тиц по клинической химии и молекулярной диагностике, 4-е издание, Saunders, Elsevier.

Arbuckle MR et al. Выработка аутоантител до клинического проявления системной красной волчанки. N Engl J Med 2003 Oct 16; 349: 1526-33.

Шмерлинг Р. Аутоантитела при системной красной волчанке — это еще не все. N Engl J Med 2003 Oct 16; 349: 1499-500.

Боригини, М. (Обновлено 3 февраля 2009 г.). Панель антинуклеарных антител. Медицинская энциклопедия MedlinePlus [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http: // www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003535.htm. По состоянию на июнь 2010 г.

Фон Фельдт, Дж. (Обновлено в апреле 2009 г.). Антинуклеарные антитела (АНА). Американский колледж ревматологии [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.rheumatology.org/practice/clinical/patients/diseases_and_conditions/ana.asp. По состоянию на июнь 2010 г.

(апрель 2009 г.). Раздаточный материал по здоровью: системная красная волчанка. Национальный институт артрита, скелетно-мышечных и кожных заболеваний [он-лайн информация].Доступно в Интернете по адресу http://www.niams.nih.gov/Health_Info/Lupus/default.asp. По состоянию на июнь 2010 г.

(обновлено в августе 2009 г.). Заболевания соединительной ткани. ARUP Консультации [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.arupconsult.com/Topics/ConnectiveTissueDz.html#. По состоянию на июнь 2010 г.

Артур Кавано, доктор медицины, Рассел Томар, доктор медицины, Джон Ревейл, доктор медицины, Дэниел Х. Соломон, доктор медицины, магистр здравоохранения, и Генри А. Хомбургер, доктор медицины. Руководство по клиническому использованию теста на антинуклеарные антитела и тестов на специфические аутоантитела к ядерным антигенам. Arch Pathol Lab Med 124 (1): 71-81, 2000.

Джейкобс Д.С., ДеМотт В.Р., Оксли, Д.К., ред. Справочник лабораторных испытаний, 5-е изд. LexiComp: Cleveland, Pp 507-509, 2001.

.

Панель антинуклеарных антител. (Обновлено 3 февраля 2014 г.) Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003535.htm. По состоянию на февраль 2014 г.

Фон Фельдт, Дж. М. (обновлено в феврале 2012 г.) Антинуклеарные антитела (ANA). Американский колледж ревматологии.Доступно в Интернете по адресу http://www.rheumatology.org/Practice/Clinical/Patients/Diseases_And_Conditions/Antinuclear_Antibodies_(ANA)/. По состоянию на февраль 2014 г.

Abelson, A. et al. Лабораторная оценка ревматических заболеваний. Фонд Кливлендской клиники. Доступно в Интернете по адресу http://www.clevelandclinicmeded.com/medicalpubs/diseasemanagement/rheumatology/laboratory-evaluation-rheumatic-diseases/. По состоянию на февраль 2014 г.

Идентификатор теста: ANA2 антинуклеарные антитела (ANA), сыворотка. Клиника Майо.Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Clinical+and+Interpretive/9026. По состоянию на февраль 2014 г.

Национальный институт артрита, скелетно-мышечных и кожных заболеваний. Вопросы и ответы об артрите и ревматических заболеваниях. Доступно в Интернете по адресу http://www.niams.nih.gov/Health_Info/Arthritis/arthritis_rheumatic_qa.asp. По состоянию на апрель 2014 г.

Интерпретации для тестирования на клещевые заболевания

TBRF и

B.burgdorferi sensu lato ПЦР в реальном времени

Тип образца: сыворотка, цельная кровь, спинномозговая жидкость, моча, объединенная моча и другие клинические образцы

TBRF Borrelia и B. burgdorferi sensu lato в режиме реального времени ПЦР-тест выявляет возвратную лихорадку Borrelia ДНК (включая B. hermsii ) и B. burgdorferi sensu lato ДНК. Далее он определяет RF Borrelia в подгруппу, которая включает B.turcatae , B. miyamotoi , B. parkeri , B. coriaceae и B. recurrentis . ДНК извлекается из клинических образцов. Экстрагированная ДНК амплифицируется с помощью ПЦР в реальном времени с использованием праймеров ДНК, специфичных для Borrelia ; RF ДНК Borrelia (при ее наличии) обнаруживается зондом RF Borrelia , специфицируемым к подгруппе RF Borrelia зондом RF Borrelia ; и B. burgdorferi sensu lato ДНК (если присутствует) обнаруживается B.burgdorferi одновременно. Праймеры и зонды, использованные для отбора фрагментов ДНК RF Borrelia и B. burgdorferi sensu lato , сконструированы из опубликованных последовательностей малых субъединиц рибосомной РНК группы RF Borrelia и группы B. burgdorferi sensu lato . Для диагностических целей результаты ПЦР следует использовать вместе с другими данными, доступными врачу.

Устный перевод:

RF

Род Borrelia (обнаружены виды RF Borrelia , в том числе B.hermsii , B. turicatae , B. miyamotoi , B. parkeri , B. coriaceae , B. turcica и B. recurrentis )

Положительно:
RF Обнаружена ДНК Borrelia .

Отрицательный:
RF ДНК Borrelia в анализируемом образце не обнаружена.

---

RF

Вид подгруппы Borrelia (обнаруживает B. turicatae , B.miyamotoi , B. parkeri , B. coriaceae и B.recurrentis )

Положительно:
РФ Обнаружена ДНК вида Borrelia .

Отрицательный:
RF ДНК вида Borrelia в анализируемом образце не обнаружена.

---

B. burgdorferi sensu lato (обнаруживает B. burgdorferi sensu stricto , B. afzelii , B. garinii , B.californiensis , B. mayonii , B. spielmanii и B. valaisiana )

Положительный:
Обнаружена ДНК B. burgdorferi sensu lato .

Отрицательный:
ДНК B. burgdorferi sensu lato не была обнаружена в проанализированном образце.

---

Borrelia (обнаруживает B. chiliensis , B. sinica и B. japonica )

Положительный:
Обнаружена ДНК Borrelia .

Отрицательный:
ДНК Borrelia в образце не обнаружена.

---

Ограничение: Исследование ингибирования было проведено примерно на 2000 клинических образцах, которые включали свежую цельную кровь, свежую сыворотку, замороженную мочу и замороженные образцы спинномозговой жидкости, в соответствии с руководящими принципами штата Нью-Йорк. Понятно, что для всех типов протестированных образцов ингибирование хорошо контролируется и наблюдается только в менее чем 1% образцов. Следовательно, в анализ не включен контроль ингибирования.

Заявление об ограничении ответственности: Диагностическая ценность отрицательного результата ПЦР сыворотки / мочи / крови для видов Borrelia сомнительна, поскольку количество микроорганизмов в сыворотке / моче / крови часто невелико или отсутствует у пациентов с болезнью Лайма.

Заявление об ограничении ответственности: Этот тест был разработан, и его рабочие характеристики определены IGeneX, Inc. Он не был одобрен или одобрен FDA. FDA определило, что в таком одобрении нет необходимости.Тест используется в клинических целях и не должен рассматриваться как исследовательский или исследовательский. IGeneX, Inc. имеет лицензию CMS и NYS на выполнение сложных клинических лабораторных исследований.

Серологические доказательства заражения человека простейшими Neospora caninum

РЕЗЮМЕ

Neospora caninum — простейший паразит, который тесно связан с Toxoplasma gondii . Собаки — окончательный хозяин. До его открытия в 1988 году N.caninum у животных часто ошибочно диагностировали как токсоплазмоз. Неоспороз у животных характеризуется энцефалитом, абортом и другими состояниями, которые клинически и патологически напоминают токсоплазмоз. Потенциал N. caninum инфицировать людей неизвестен. Таким образом, доказательства контакта человека с этим паразитом искали путем скрининга на антитела у доноров крови с помощью непрямых флуоресцентных тестов на антитела (IFA) и иммуноблоттинга. Из 1029 проверенных образцов 69 (6.7%) имели титры 1: 100 по результатам тестирования IFA. Пятьдесят из 69 (72%) сывороток, положительных на N. caninum , также оказались отрицательными на близкородственный простейший патоген человека, T. gondii . Иммуноблот-анализ подтвердил специфичность положительных сывороток в отношении антигенов N. caninum , при этом несколько сывороток распознали множественные антигены Neospora с молекулярными массами, сходными с молекулярными массами антигенов, распознаваемых обезьяной сывороткой против N. caninum . Иммунодоминантный антиген приблизительно 35 кДа наблюдался с 12 сыворотками.Эти данные свидетельствуют о воздействии на человека N. caninum , хотя титры антител у здоровых доноров были низкими. Значение воздействия этого паразита на человека и возможное заражение им неизвестно и требует дальнейшего изучения.

Нет сообщений о заражении человека протозойным паразитом Neospora caninum , но возможно, что случаи неоспороза ошибочно принимали за токсоплазмоз. Инокуляция беременных обезьян N. caninum приводит к трансплацентарной передаче паразита и индукции энцефалита плода (3). N. caninum (Apicomplexa; Sarcocystidae; Toxoplasmatinae) был описан и назван в 1988 г. (6). Он тесно связан с Toxoplasma gondii , как определено ультраструктурными и генетическими сравнениями (7), но его ооцисты выделяются собаками, а не кошками (10, 11). Инфекции часто встречаются у крупного рогатого скота, собак и ряда других домашних и диких животных (7). Неоспороз у животных характеризуется энцефалитом, абортом и другими состояниями, которые клинически и патологически напоминают токсоплазмоз (7).

Люди, инфицированные T. gondii , обычно протекают бессимптомно или страдают гриппоподобным заболеванием, но патоген клинически важен для людей с ослабленным иммунитетом и плодов инфицированных матерей (5). Инфекция у хозяина с ослабленным иммунитетом чаще всего приводит к энцефалиту. Женщины, впервые заразившиеся во время беременности, могут выкидыши или родить детей с энцефалитом или гидроцефалией. Многие пренатальные инфекции протекают субклинически при рождении, но могут привести к нарушению зрения или слуха, умственной отсталости или судорогам (5).

Целью этого исследования было определить, есть ли доказательства воздействия на человека N. caninum . Сыворотки были собраны у доноров крови в центральной Калифорнии, где N. caninum признано основной причиной абортов у молочного скота (1). Сыворотки проверяли на антитела против N. caninum с помощью непрямого теста флуоресцентных антител (IFA) и иммуноблоттинга. Чтобы подтвердить специфичность для N. caninum , сыворотки подвергали аналогичному скринингу на антитела против T.gondii .

сыворотки. Всего в Центре крови Центральной Калифорнии (Фресно, Калифорния) было получено 1029 образцов сыворотки. В качестве положительного контроля иммунную сыворотку против N. caninum получали путем иммунизации макаки-резуса тахизоитами N. caninum , убитыми формалином (штамм NC-Liverpool). Эта сыворотка была отрицательной при тестировании IFA на антитела T. gondii . Образец сыворотки человека, который был положительным на T. gondii антител при тестировании IFA, но отрицательным на N.caninum , использовали в качестве положительного контроля для скрининга T. gondii .

IFA-тест. Сыворотки человека были проверены на антитела против N. caninum и T. gondii с помощью IFA-теста. Слайды, на которых были нанесены цельные тахизоиты N. caninum (штамм NC-1), были приобретены у коммерческого поставщика (VMRD, Inc., Pullman, Wash.). Для тестирования T. gondii на предметные стекла были нанесены целые тахизоиты, полученные путем соскоба инфицированных культур эпителиальных клеток почки африканской зеленой мартышки (Vero) (CCL 81; Американская коллекция типовых культур) и фильтрации тахизоитов через поры размером 3 мкм. фильтр для удаления остатков клеток Vero.Затем тахизоиты трижды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS; 25 мМ NaPO ₄ –150 мМ NaCl [pH 7,2]) и разбавляли до 10 ⁶ на мл. По одной капле раствора помещали в каждую из 12 лунок на предметное стекло и давали высохнуть при 37 ° C. Клетки фиксировали смесью 80% ацетон – 20% метанол, промывали дистиллированной водой и хранили при –20 ° C до использования.

Сыворотки, использованные в тесте IFA, разбавляли 1: 100 в PBS, и 25 мкл каждого образца добавляли в лунку, содержащую тахизоиты, и инкубировали в увлажненной камере при 37 ° C в течение 30 минут.Затем сыворотки удаляли, каждую лунку ополаскивали и промывали в течение 10 минут промывочным буфером (25 мМ Na ₂ CO ₃ , 100 мМ NaHCO ₃ , 36 мМ NaCl [pH 7,4]). Затем в каждую лунку помещали конъюгированный с флуоресцеинизотиоцианатом козий иммуноглобулин G (IgG) плюс IgA плюс IgM (Accurate Chemical & Scientific Corp., Вестбери, штат Нью-Йорк), разведенный 1: 100 в PBS. Предметные стекла инкубировали и промывали, как описано выше, покрывали монтажной средой (50% глицерин – 50% промывочный буфер) и покровным стеклом и просматривали при увеличении × 400 с помощью флуоресцентной микроскопии.В качестве контролей одну лунку на каждом слайде тестировали с N. caninum -положительной контрольной сывороткой, а другую лунку тестировали с T. gondii -положительной контрольной сывороткой. Иммунная сыворотка обезьян имела титр от 1: 3200 до N. caninum по этой методике и не реагировала с T. gondii .

Иммуноблоттинг. N. caninum (штамм NC-1) и T. gondii тахизоитов, собранные из инфицированных клеток Vero, использовали в качестве антигенов в иммуноблотах. Инфицированные монослои удаляли соскабливанием, и клетки пропускали через иглу 20-го размера для высвобождения тахизоитов.Организмы дважды промывали PBS, и тахизоиты очищали от клеточного материала Vero путем осаждения через 30% -ный слой Renografin (E.R. Squibb & Sons, Inc., Princeton, N.J.) при 58,424 × g в течение 30 мин. Гранулы промывали PBS и суспендировали в буфере для образцов для электрофореза додецилсульфат-полиакриламидного геля натрия из расчета приблизительно 10 ⁸ организмов на мл. После электрофореза образцов в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия через 10% гель, белки были электрофоретически перенесены на мембрану Immobilon-P (Millipore Corp., Бедфорд, Массачусетс), и блоты блокировали в течение ночи в PBST (PBS плюс 0,1% Tween 20) плюс 2% бычий сывороточный альбумин (BSA-PBST). Затем блоты инкубировали с сывороткой человека, разведенной 1:50 в BSA-PBST, в течение 1-2 часов при комнатной температуре и трижды промывали PBST в течение 10 минут. Затем иммуноблоты инкубировали с разведением 1: 5000 протеина А, конъюгированного с пероксидазой хрена (Pierce, Rockford, IL), в течение 1 часа с последующими тремя промываниями PBST в течение 10 минут. Белок А, конъюгированный с пероксидазой хрена, детектировали с помощью хемилюминесценции с субстратной системой SuperSignal CL (Pierce).

Результаты. Из 1029 проверенных образцов сыворотки человека 69 (6,7%) имели титры 1: 100 в тесте N. caninum IFA. Положительные сыворотки показали однородное окрашивание периферической мембраны (рис. 1А) или усиленное окрашивание апикальной части в дополнение к периферическому окрашиванию (рис. 1В). Сыворотки считались отрицательными на антитела N. caninum , если не наблюдалось окрашивания тахизоитов или если периферическое окрашивание было неполным при разведении 1: 100 (рис. 1С). Неполное периферическое окрашивание, вероятно, связано с реакцией антител, неспецифичных для N.caninum (13). Все сыворотки человека были отрицательными при разведении 1: 200. Чтобы исключить возможность того, что положительный результат теста IFA для N. caninum был результатом предыдущего воздействия на T. gondii , мы протестировали 69 N. caninum -положительную сыворотку против T. gondii . Пятьдесят (72,5%) из 69 образцов, положительных на антитела N. caninum при тестировании IFA, были отрицательными на антитела T. gondii .

Рис. 1. Тестирование

IFA сывороток человека на реактивность против N.caninum . Слайды готовили с использованием тахизоитов N. caninum , как описано в тексте, и обрабатывали сывороткой человека в разведении 1: 100. (A) Положительная реакционная способность, показывающая равномерное периферическое окрашивание тахизоитов; (B) положительная реактивность, показывающая усиленное апикальное окрашивание в дополнение к равномерному периферическому окрашиванию тахизоитов; (C) отрицательная реактивность, показывающая сильное апикальное окрашивание, но не периферическое окрашивание тахизоитов.

Для подтверждения серореактивности к N. caninum , наблюдаемой при тестировании IFA, все 50 сывороток показали N.caninum -положительный и T. gondii -отрицательный титры проверяли с помощью иммуноблоттинга. Шестнадцать образцов сыворотки человека четко распознали отдельные антигенные полосы, которые совпадали с антигенами, распознаваемыми сывороткой обезьяны анти- N. caninum . Эти же полосы отсутствовали в дорожках, содержащих T. gondii или лизаты клеток Vero (фиг. 2 и данные не показаны). Двенадцать сывороток, включая образцы 15 и 630, распознали антигенов N. caninum размером примерно 35 кДа (рис.2). Эта диффузная полоса реактивности, по-видимому, является результатом двух близко мигрирующих антигенов, причем антиген с более низкой молекулярной массой проявляет большую реактивность. Антигены схожей молекулярной массы также распознавались иммунной сывороткой обезьян. Прямое сравнение спектров антигенов, распознаваемых образцом сыворотки человека 15, и антигенов, распознаваемых иммунной сывороткой обезьяны, выявило несколько дополнительных сопутствующих полос. Они включали реактивные частицы примерно 30, 43, 55 и 75 кДа. Чтобы еще раз подтвердить, что 35-кДа N.caninum специфически распознавались антителами N. caninum , 50 T. gondii -положительных образцов сыворотки, которые были отрицательными для N. caninum при тестировании IFA, были проверены на антиген N. caninum . Только один образец сыворотки, положительный на T. gondii , прореагировал с антигеном аналогичной молекулярной массы (данные не показаны). Таким образом, антиген 35 кДа, по-видимому, является основным иммуногеном, который специфически распознается в контексте некоторого воздействия на человека N.caninum .

Рис. 2.

Иммуноблот-анализ реактивности сывороток человека против лизатов клеток N. caninum (N), T. gondii (T) и Vero (V). Сыворотка, использованная для зондирования каждого блота, показана внизу. Сильные полосы реактивности в диапазоне 35 кДа очевидны для лизатов N. caninum , обработанных любым образцом сыворотки человека. Эта реактивность отсутствует в дорожках, содержащих клетки Vero или лизаты T. gondii . Молекулярные массы указаны в килодальтонах.Обсуждение. При тестировании IFA 50 (4,9%) из 1029 сывороток человека были положительными на антитела N. caninum и отрицательными на антитела T. gondii с титрами 1: 100. Шестнадцать из этих сывороток (1,6%) также сильно реагировали с антигенами N. caninum при иммуноблоттинге. Реактивные полосы совпадают с полосами, распознаваемыми обезьяной анти- N.caninum сыворотка. Более того, антигенные полосы с аналогичной молекулярной массой не наблюдались, когда эти сыворотки тестировали против T. gondii и лизатов клеток Vero.

Трудно определить четко установленный титр, который мог бы служить положительным индикатором заражения животных N. caninum . Титры> 1: 200 были обнаружены для всех подтвержденных случаев неоспороза у собак (7). Титры> 1: 320 были обнаружены в сыворотках инфицированных коров во время аборта или отела, а у крупного рогатого скота без признаков заражения N.caninum имел титры 1: 320 или менее (4). Однако повторное тестирование инфицированных коров в течение 5 месяцев после аборта показывает, что титры могут упасть до 1: 160, а затем снова повыситься во время последующей беременности (4). В настоящем исследовании сывороток человека, возможно, титры 1: 100 свидетельствуют о прошлых инфекциях, которые были преодолены или являются неактивными, или, возможно, системный гуморальный ответ оставался низким из-за ограничения инфекции слизистой желудочно-кишечного тракта. В качестве альтернативы, некоторые низкие титры могут быть результатом приема нежизнеспособного препарата Neospora .

Большинство положительных результатов теста N. caninum IFA, представленных в этом исследовании, не были связаны с перекрестной реакцией антител на T. gondii , поскольку 50 (72,5%) из 69 N. caninum — положительные образцы были отрицательными для T. gondii . Эти данные согласуются с данными Dubey et al. (8), которые описали минимальную перекрестную реактивность между N. caninum и T. gondii при тестировании IFA. Хотя наши данные убедительно свидетельствуют о воздействии на человека Н.caninum , мы не исключили возможность получения некоторых ложноположительных результатов в нашем тесте IFA. Было показано, что ложноположительные результаты теста N. caninum IFA с сывороткой животных являются результатом инфицирования Babesia spp. (14). Сообщалось также о ложноположительных результатах теста T. gondii IFA из-за перекрестной реакции с антинуклеарными антителами (2), хотя аналогичная перекрестная реакция для N. caninum еще не была продемонстрирована. Иммуноблот-анализ, использованный в этом исследовании, подтвердил положительные результаты теста IFA, продемонстрировав специфические реакции сывороточных антител на N.caninum не менее чем у 16 ​​человек. В некоторых образцах четко наблюдались множественные антигенные полосы, которые совпадали с полосами, распознаваемыми контрольной сывороткой обезьяны против N. caninum . Сильная полоса реактивности в диапазоне 35 кДа наблюдалась с рядом сывороток. Интересно, что недавний отчет Howe et al. (9) указывает, что поверхностный белок массой 35 кДа, обозначенный как Ncp35, является одним из двух основных антигенов, распознаваемых антисывороткой от мышей, собак и крупного рогатого скота, инфицированных Neospora .Это открытие в сочетании с нашим наблюдением, что окрашивание сывороткой человека с положительной по Neospora было локализовано главным образом на поверхности тахизоитов, приводит к предположению, что белок 35 кДа, наблюдаемый при иммуноблоттинге, может быть Ncp35. Некоторые сыворотки, которые были положительными на N. caninum при тестировании IFA, были отрицательными при иммуноблоттинге. Однако это может быть связано с ограничениями обнаружения процедуры иммуноблоттинга в сочетании с низкими титрами сыворотки или может указывать на ложноположительные результаты теста IFA для некоторых образцов.

Результаты этого серологического исследования предполагают воздействие на человека N. caninum , но необходимы дальнейшие исследования для определения степени и значимости воздействия. Потенциал воздействия на человека N. caninum велик, потому что собаки являются окончательным хозяином и выделяют ооцисты с фекалиями (10). В этом исследовании использовались сыворотки, взятые у предположительно здоровых людей в районе, где, как известно, инфекция молочного скота N. caninum является эндемической. Заражение здоровых людей N.caninum может протекать так же, как T. gondii , где подавляющее большинство инфекций протекает бессимптомно (12). Исследование тканей и жидкостей людей с ослабленным иммунитетом и плодов с подозрением на токсоплазмоз на N. caninum может выявить, что субпопуляция этих пациентов инфицирована N. caninum .

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Дэна Рокки и Шелли Робертсон за критический обзор рукописи и Ребекку А.Завещания о технической помощи.

Эта работа была поддержана Программой грантов для факультетов Университета Вайоминга и Национальными институтами здравоохранения, грант AI-39454 (L.M.W.).

СНОСКИ

• Получено 25 января 1999 г.
• Возвращено для модификации 1 апреля 1999 г.
• Принято 16 июня 1999 г.

• Авторское право © 1999 Американское общество микробиологии, 1999 г.

Может ли человек с отрицательным ANA титр еще есть волчанка?

Ответ на вопрос: «Существует ли ANA-отрицательная волчанка?» технически «да» с большим количеством «но», «если» и «когда».Это зависит от того, что подразумевается под «волчанкой» и что подразумевается под «АНА». В определениях того и другого есть много нюансов.

Как определить волчанку?

Для начала — определение волчанки: Системная красная волчанка (СКВ) — одно из многих подобных заболеваний, которые в первую очередь поражают молодых женщин и вызывают артрит, сыпь, низкое количество лейкоцитов, низкое количество тромбоцитов и заболевание почек. (Я проигнорирую в этом обсуждении дискоидную [кожную], лекарственную волчанку и неонатальную волчанку, которые имеют одно название, но считаются отдельными заболеваниями.)

Признаками, однозначно диагностирующими СКВ, являются:

1. антитело против двухцепочечной ДНК с высоким титром
2. антитело против Смита (именуемое анти-Sm) антитело
3. Заболевание почек, подтвержденное биопсией
4. Подтвержденное биопсией кожное заболевание в сочетании с другим симптомом

Врачам трудно согласовать стандартное определение для отдельных пациентов (диагностические критерии), потому что могут быть задействованы многие органы, и они могут быть задействованы по-разному.Диагностических критериев, которые используются для постановки диагноза отдельному пациенту, не существует для волчанки.

Критерии классификации, которые используются для отбора типичных пациентов для исследований, таких как испытания лекарственных препаратов, недавно изменились. Новые критерии классификации Американского колледжа ревматологии (ACR) и Европейской лиги против ревматизма (EULAR) [1] присваивают разные баллы различным патологиям.

Различные аномалии имеют разный вес. Например, пациенту с заболеванием почек, в зависимости от типа заболевания почек, будет присвоено 4, 8 или 10 баллов; один с низким содержанием лейкоцитов — 3 балла; и один с артритом — 6 баллов.Подсчет тестов на антитела. Антитело против ДНК или антитело против Sm зарабатывает 6 баллов. (Учитывается только один; пациент, у которого есть оба антитела, не получает 12 баллов.) Согласно критериям классификации, пациент, у которого есть 10 баллов, страдает волчанкой; тот, у кого только 9 — нет. Тесты на антитела засчитываются только в том случае, если у пациента есть симптомы. Нельзя сказать, что у него волчанка, если антитела ненормальные, но человек здоров. Новые критерии требуют, чтобы тест на антинуклеарные антитела (ANA) был положительным, по крайней мере, один раз, но не обязательно во время постановки диагноза, поскольку ANA может стать отрицательным при лечении или ремиссии.

Среди врачей нет единого мнения о том, как лучше описывать пациентов с симптомами, которые не соответствуют критериям, то есть тех, у которых нет хотя бы 10 критериальных баллов [2, 3]. Для описания этих пациентов автор использует следующие термины:

• «волчаночноподобное» заболевание
• «Смешанное заболевание соединительной ткани»
• «недифференцированная болезнь соединительной ткани»
• «forme fruste» (что означает зарождающаяся или скрытая форма) волчанки

Этот вопрос задавали и другие врачи [4].Тем не менее, каждый из этих расплывчатых терминов имеет особое значение, описывающее разные формы болезни. «Смешанное заболевание соединительной ткани» описывает специфический синдром, состоящий из признаков волчанки, склеродермии и дерматомиозита, вместе с антителом с высоким титром к RNP. В практике этого автора почти половина пациентов, направленных с подозрением на СКВ, попадает в категорию не совсем волчанку; и наоборот, люди с совместимыми симптомами и высоким титром антител к ДНК, антителам против Sm и / или заболеванием почек страдают СКВ.Большинство статей о пациентах с определенной волчанкой включают в это определение пациентов, которые:

• необработанные
• обращаются
• имеют новое начало болезни
• давно болеют

В этих статьях сообщается о антителах к ДНК примерно у половины пациентов, к антителам против Sm — примерно у одной трети и ANA — у 87–94% пациентов. В исследованиях, включающих только новых, нелеченных пациентов, практически все эти пациенты будут иметь ANA и анти-ДНК, или анти-Sm, или и то, и другое.

Некоторые врачи используют термин «волчанка» для описания пациентов с вариантными формами, а также с явно выраженной волчанкой. Для этого автора было бы предпочтительнее использовать другой термин. Диагностировать ли пациента волчанку или волчаночноподобное заболевание — это не правильно или неправильно, это вопрос стиля врача. В любом случае варианты лечения одинаковы.

Что такое истинно положительный АНА?

Теперь к вопросу о значении ANA. Тест на антинуклеарные антитела проводится разными методами в разных лабораториях; некоторые методы более чувствительны, чем другие.Из-за различий в тестах одна лаборатория может найти (обычно слабый) положительный результат, а другая — отрицательный.

Некоторые лаборатории разбавляют образцы крови в 10 раз (1:10) для скрининга, некоторые в 100 раз (1: 100), а некоторые совсем не разбавляют. Обычно используемый метод начинается с разведения 1:10, затем удваивается при каждом последующем разведении, поэтому следующий тестируемый образец составляет 1:20, затем 1:40, 1:80 и т. Д. лабораторные отчеты (например, 1: 1280).Лаборатория, которая начинается с 1:40, может назвать тест положительным, а лаборатория, которая начинается с 1: 100, может назвать его отрицательным. Большинство пациентов с волчанкой имеют очень положительные результаты анализов — всегда более 1:80, часто более 1: 5120. В большинстве лабораторий однозначно положительным считается значение 1:80 и выше.

Дело в том, что ANA-отрицательный не обязательно означает полностью отрицательный; это просто означает, что он ниже лабораторного порога, позволяющего считать его положительным. Другой момент заключается в том, что пятнистые (в отличие от диффузных или периферических) узоры ANA плохо читаются в автоматических тестах иммунофлуоресценции, поэтому могут быть зарегистрированы как более низкие титры или отрицательные, чем если бы они были прочитаны вручную опытным специалистом.В последнее время большое внимание уделяется трудности стандартизации теста ANA [5, 6]. Существует цель достичь лучшего консенсуса, но на момент написания этой статьи все еще существуют разногласия по поводу того, как определять и интерпретировать АНА с низким титром.

А как насчет других лабораторных тестов?

Есть еще одна сложность. ANA используется для скрининга волчанки, а не для ее диагностики — это означает, что для практических целей, если ANA отрицательный, волчанки не существует, и дальнейшее тестирование не требуется.Действительно, некоторые лаборатории не будут проводить дальнейший скрининг сывороток, отрицательных по ANA. Новые критерии классификации ACR / EULAR требуют, чтобы тест ANA был положительным перед суммированием других баллов. (Ранее критерии присваивали ANA отдельные баллы.)

Положительный результат ANA означает только то, что возможна волчанка. Это означает, что тесты на антитела к двухцепочечной ДНК, Sm, Ro / SSA (синдром Шегрена A), La / SSB (синдром Шегрена B) и RNP (рибонуклеопротеин) — «специфические» антитела — должны быть выполнены для определения есть ли волчанка, волчаночноподобное заболевание или нет.

Из-за множества технических факторов возможен отрицательный результат теста на АНА, но положительный результат теста на специфические антитела, хотя это очень редко. Таким образом, «ANA-отрицательный» человек с сильно положительными антителами к Sm считается болеющим волчанкой. Поскольку лаборатории различаются по тому, как они сообщают, и (чтобы быть эффективными) автор, оценивая нового пациента на волчанку, одновременно тестирует на ANA, анти-ДНК, анти-Sm, анти-Ro / SSA, анти-La / SSB, анти -RNP, а иногда и другие антитела, которые могут иметь отношение к конкретному состоянию пациента.Если тест ANA отрицательный, диагноз волчанки гораздо менее вероятен, но не невозможен.

Отличается ли вновь возникшая волчанка от давно возникшей волчанки?

Теперь еще одно осложнение: все правила тестирования на антитела применимы к оценке новых симптомов у нелеченного пациента. Во время лечения тесты часто возвращаются к норме, и со временем они могут меняться, улучшаться или ухудшаться.

На вопрос: «Может ли ANA-отрицательный человек болеть СКВ?» спрашивают нового, нелеченного пациента, ответ, вероятно, отрицательный.Если его спросят у пациента, чей тест отрицательный через несколько лет после постановки диагноза, может быть невозможно ответить да или нет. Если пациент, даже с активными симптомами, принимает высокие дозы преднизона или иммунодепрессантов, отрицательный результат ANA не исключает диагноз.

Важен ли вопрос об «АНА-отрицательной» волчанке?

По мнению автора, вопрос об ANA-отрицательной или ANA-положительной волчанке не важен, потому что пациенты с симптомами нуждаются в лечении, а лечение не требует заявления о том, что у пациента явно есть или нет волчанка.(Я игнорирую тот факт, что страховые компании часто не соглашаются.) Важно то, что врач оценивает текущие симптомы, помещает эти симптомы в общий контекст, который включает анализы крови, продолжительность симптомов, другие возможные заболевания и лекарства, и разрабатывает план лечения, основанный на общей информации, а не только на анализе крови.

Список литературы

[1] Аринджер М., Костенбадер К., Дайх Д. и др. Европейская лига против ревматизма 2019 г. / Критерии классификации системной красной волчанки Американского колледжа ревматологии.2019; Arthritis Rheum 71 (9): 1400-1412.

[2] Локшин М.Д., Левин А.Б., Эркан Д. Пациенты с перекрывающимся аутоиммунным заболеванием отличаются от пациентов с «чистым» заболеванием. Lupus Sci Med. 2015 6 мая; 2 (1): e000084. DOI: 10.1136 / lupus-2015-000084. eCollection 2015. PubMed PMID: 25973214; PubMed Central PMCID: PMC4422903.

[3] Локшин М.Д., Барбхайя М., Измирлы П. и др. СКВ: согласование неоднородности. Lupus Sci & Med 2019; 6: e000280. DOI: 10.1136 / lupus-2018-000280.

[4] Lambers WM, Westra J, Jonkman MF и др.Неполная системная красная волчанка — что остается после применения критериев ACR и SLICC? Arthritis Care Res (Хобокен). 1 апреля 2019 г. doi: 10.1002 / acr.23894. [Epub перед печатью].

[5] Писецкий Д.С., Спенсер Д.М., Липский П.Е. и др. Вариации анализа при обнаружении антинуклеарных антител в сыворотке крови пациентов с установленной СКВ. Энн Рум Дис 2018; 77: 911–913. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2017-212599.

[6] Писецкий Д.С., Томпсон Д.К., Вайдула Дж. И др. Вариабельность тестирования антинуклеарных антител для оценки соответствия пациентов критериям клинических испытаний новых методов лечения системной красной волчанки.Артрит и ревматология 2019; 71 (9): Т. 71, No. 9, сентябрь 2019 г., стр. 1534–1538. DOI 10.1002 / art.40910.

Обновлено: 10.10.2019

Авторы

Михаил Д. Локшин, MD
Лечащий ревматолог, Госпиталь специальной хирургии
Директор, Центр Барбары Волкер для женщин и ревматических заболеваний

Скрининг иммуноферментного анализа с последующим косвенным подтверждением иммунофлуоресценции антинуклеарных антител | Американский журнал клинической патологии

Аннотация

Целью этого исследования было проанализировать скрининг на антинуклеарные антитела (ANA) с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) с последующим непрямым флуоресцентным тестированием на антитела (IFA) для подтверждения и характеристики структуры и титра антитела.Мы оценили 4 ANA ELISA и 1 субстрат HEp-2 IFA в 224 клинически определенных образцах сыворотки, включая 30 случаев системной красной волчанки (СКВ), 94 случаев ревматоидного артрита и 100 образцов здоровых доноров плюс 495 образцов сыворотки, представленных для рутинного тестирования ANA. и 12 эталонных образцов сыворотки, распространенных Центрами по контролю и профилактике заболеваний. Тесты IFA были прочитаны независимо 2 сертифицированными медицинскими технологами.

Чувствительность

ELISA варьировала от 90% до 97% по сравнению с 80% по IFA в образцах сыворотки SLE.ELISA имел специфичность от 36% до 94%, тогда как IFA имел специфичность 99%.

В целом, ELISA для анализов ANA продемонстрировали лучшую чувствительность и хорошую специфичность, что позволяет предположить, что ELISA является более рентабельной альтернативой IFA-тестированию для первоначального скрининга ANA. Образцы, положительные с помощью ANA ELISA, должны быть протестированы на HEp-2 для определения титра и структуры.

Растущий объем тестирования на антинуклеарные антитела (ANA) привел к разработке методов, альтернативных тестированию на непрямые флуоресцентные антитела (IFA) для обнаружения ANA.Тестирование IFA требует, чтобы опытные сертифицированные технологи прочитали и интерпретировали анализ, а стандартизация материалов IFA отсутствует. Это исследование было разработано для оценки диагностической эффективности и полезности тестирования ANA с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) для скрининга ANA по сравнению с традиционным HEp-2 ANA с использованием тестирования IFA. Для этого были исследованы образцы сыворотки от здоровых субъектов, образцы сыворотки от пациентов с клинически определенным заболеванием, стандартные контрольные образцы и большое количество образцов, отправленных в референс-лабораторию для рутинного тестирования ANA.

Пациенты с несколькими заболеваниями соединительной ткани (CTD), включая системную красную волчанку (SLE), синдром Шегрена, склеродермию, полимиозит и другие, часто имеют положительный результат на ANA. Хотя считается, что отрицательный результат ANA при тестировании IFA исключает диагноз СКВ, положительный результат ANA не является специфическим для какого-либо CTD. ^1–6 Многочисленные исследования показали, что здоровые люди, а также пациенты без CTD могут иметь титры ANA IFA до 1: 320 без признаков клинического заболевания. ^7–14 Трудности, присущие клинической диагностике CTD, привели к увеличению объемов тестирования ANA.

Тест IFA в настоящее время считается «золотым стандартом» для тестирования ANA в клинической практике. Используя клетки HEp-2 в качестве субстрата, тест IFA позволяет обнаруживать антитела к более чем 30 различным ядерным и цитоплазматическим антигенам, содержащим более 50 аутоантител. ¹⁵ Результаты теста ANA IFA обычно представляются на основе 4 основных паттернов: гомогенного, пятнистого, ядрышкового и центромеры.Кроме того, обычно указываются титры для каждого образца, наблюдаемого при тестировании IFA. Однако это трудоемкий анализ, который сильно зависит от навыков читателя. ^{1,5,6,15–18}

Тестирование ANA методом ELISA появилось как инструмент скрининга для решения проблемы заметного увеличения объемов тестов ANA. ELISA для скрининга ANA обычно включает следующие антигенные специфичности: двухцепочечная ДНК (dsDNA), гистон, Smith, U1 рибонуклеопротеин (RNP), SSA (Ro), SSB (La), центромера B, Jo-1, рибосомный-p ( Ribo-p), склеродермия-70 (Scl-70) и митохондрии; но они могут различаться в использовании нативных или рекомбинантных антигенов Таблица 1.В большинстве анализов ELISA для скрининга ANA в анализ также включаются разрушенные клетки HEp-2 для обеспечения тех же антигенных сайтов, что и в тесте HEp-2 IFA. Некоторые исследователи считают, что включение субстрата HEp-2 увеличивает чувствительность, в то время как другие утверждают, что он только снижает специфичность. Большинство образцов сыворотки, проверяемых клиническими лабораториями на АНА, отрицательны; следовательно, скрининг с помощью ELISA позволяет проводить меньше тестов ANA IFA с меньшими затратами для лабораторий и пациентов. Мы сравнили эффективность 4 ANA ELISA с тестом ANA IFA на клетках HEp-2.

Материалы и методы

Отбор образцов от пациентов и контрольных образцов

Всего для этого исследования было проанализировано 731 образец. Из выборок 30 были от пациентов с клинически установленной СКВ и 94 от пациентов с клинически определенным ревматоидным артритом (РА) на основании критериев Американского колледжа ревматологии (ACR). Также был протестирован набор из 12 четко определенных эталонных образцов сыворотки крови человека, распространенных Центрами по контролю и профилактике заболеваний (CDC), и 100 образцов от здоровых доноров из нормального исследования Decades of Life в лабораториях ARUP, Солт-Лейк-Сити, Юта .Образцы сыворотки здоровых доноров были взяты из популяции, состоящей из 70% женщин и 30% мужчин в возрасте от 19 до 59 лет. Расовые / этнические группы по самооценке были следующими: европеоид — 83%; Испаноязычные — 7%; Азиатский — 5%; Средиземноморье, 4%; и афроамериканец — 1%. Также была оценена группа из 495 клинических образцов, отправленных в лаборатории ARUP для рутинного анализа ANA. Из 495 образцов 50 изначально дали отрицательный результат методом скрининга ARUP, а 445 были положительными. Все образцы в этом исследовании были деидентифицированы, и исследование было одобрено Наблюдательным советом Университета штата Юта (Солт-Лейк-Сити).

Таблица 1 Антигены

, включенные в четыре ELISA

Таблица 1 Антигены

, включенные в четыре ELISA

Обнаружение ANA

Тестирование

IFA и ELISA были методами, используемыми для тестирования ANA. В качестве анализа IFA использовали NOVA Lite HEp-2 ANA (INOVA Diagnostics, Сан-Диего, Калифорния), в котором используется конъюгат, специфичный для тяжелой цепи IgG. Образцы сыворотки крови были протестированы в разные дни, и слайды были прочитаны двумя медицинскими технологами с использованием одного из двух флуоресцентных микроскопов, каждый из которых был оснащен светодиодным источником света, чтобы свести к минимуму влияние истощения срока службы лампы.Медицинские технологи не видели показаний друг друга. Оба имеют сертификат Американского общества клинической патологии и от 4 до 8 лет опыта чтения IFA. Согласованное значение ANA IFA определяли путем присвоения положительного результата, если оба считывателя сообщили, что образец имеет титр 1:40 или выше. Согласованное значение использовали для сравнения результатов ANA IFA с результатами других анализов. Используя ANA ELISA от 4 производителей (Aeskulisa ANA HEp-2, Aesku Diagnostics, Wendelsheim, Германия; Bio-Rad ANA Screen, Bio-Rad, Hercules, CA; Phadia Varelisa ANA 8 Screen, Phadia, Uppsala, Швеция; и QUANTA Lite. ANA ELISA, INOVA Diagnostics) был протестирован 731 образец.Ни один из 4 ANA ELISA не был составлен одинаково. Однако все они содержали dsDNA, Smith, RNP, SSA (60 кДа), SSB, Scl-70, центромеры B, Jo-1, антигены Ribo-p и субстрат, разрушенный HEp-2, за исключением анализа Phadia, который не показал содержат субстрат HEp-2. Состав антигенов, опубликованный конкретным производителем, показан в таблице 1. Все анализы были выполнены в соответствии с рекомендациями производителя техническими специалистами, компетентными в проведении ELISA.

Результаты

Аналитические и диагностические характеристики IFA при обнаружении ANA

Исследование было начато с первой оценки тестирования IFA для обнаружения ANA в образцах сыворотки наших групп пациентов.Поскольку интерпретация результатов тестирования IFA сильно зависит от наблюдателя, двух сертифицированных опытных медицинских технологов попросили прочитать и интерпретировать эти результаты. Для статистического анализа образцу присваивался 1, если оба считывателя сообщили о титре 40 или более, или 0, если один или оба считывателя сообщили о менее 40 (<1:40). ¹⁹ Общий анализ показал значительное совпадение результатов, полученных обоими читателями (α Кронбаха 0,86). Это было верно для положительных результатов в образцах SLE и CDC (α Кронбаха 0.98 и 0,93 соответственно). Повышенная вариативность интерпретации наблюдалась среди 495 ежедневных образцов сыворотки, отправляемых на анализ ANA. В целом, отличное совпадение наблюдалось для титров менее 1:20 и 1: 320 или больше в ежедневных образцах сыворотки (данные не показаны).

Оценка образцов сыворотки здоровых доноров для определения специфичности анализа

На рисунке 1 показано сравнение 5 анализов ANA (4 ELISA и 1 тест IFA, все с использованием IgG-специфического конъюгата), выполненных на группе из 100 образцов сыворотки от здоровых доноров.С помощью теста IFA все образцы сыворотки здоровых доноров были представлены как менее 1:40 для ANA, что демонстрирует отрицательную прогностическую ценность 1,0 или 100% специфичности. ИФА Phadia, Aesku и INOVA продемонстрировали специфичность 94%, 96% и 80% соответственно, что привело к ложноположительным результатам 6%, 4% и 20% соответственно в образцах сыворотки здоровых доноров при сравнении. с результатами IFA в качестве стандарта. ELISA Bio-Rad продемонстрировал 36% специфичность, что привело к 64% ложноположительным результатам.

Определение специфичности анализа в образцах контрольной сыворотки на заболевание

На рис. 1 показаны характеристики теста при использовании 3 из 4 ELISA и анализа IFA для тестирования образцов сыворотки RA. Эти образцы сыворотки были отобраны в клинике ревматолога на предмет соответствия диагностическим критериям РА. ²⁰ Из-за ограниченного объема образца анализ Bio-Rad не использовался для оценки образцов сыворотки RA. Анализы ANA ELISA, Phadia, Aesku и INOVA, выявили 22%, 9% и 45% положительных результатов, соответственно, при тестировании на ANA в 94 образцах RA.Только 6 из 94 образцов дали положительный результат на ANA по тесту IFA. В целом, 89 из 94 образцов сыворотки были меньше 1:40. Пять образцов имели согласованный титр 1: 160 с однородными структурами. 5 образцов, положительных при тестировании IFA, также были положительными при 3-х ELISA.

Чувствительность при использовании клинически определенных образцов сыворотки

Чувствительность определялась путем анализа 30 клинически определенных образцов сыворотки крови, соответствующих критериям ACR. ²¹ Как показано на Рисунке 1, тест ANA IFA имел только 80% чувствительность для 30 подтвержденных образцов сыворотки крови, в то время как ELISA Bio-Rad, Phadia, Aesku и INOVA ANA продемонстрировали превосходную чувствительность скрининга 96.6%, 96,6%, 90% и 96,6% соответственно. Из 30 образцов сыворотки, полученных при СКВ, отрицательных результатов теста Aesku ELISA, 2 были близки к положительному пороговому значению анализа, а результаты других 3 тестов были положительными. Один из этих образцов имел титр менее 1:40, а другой — 1:40 титр и смешанный образец при тестировании HEp-2 IFA.

Рисунок 1

Сравнение процента положительных образцов с использованием 4 иммуноферментных анализов (ELISA) и тестирования непрямых флуоресцентных антител (IFA) эпителиальных клеток человека (HEp) -2 среди популяций образцов сыворотки.Из-за ограниченного объема пробы образцы RA не использовались в анализе Bio-Rad. HC, здоровые контрольные образцы сыворотки; РА, образцы сыворотки от ревматоидного артрита; и образцы сыворотки СКВ, системной красной волчанки. Клинические образцы были отобраны образцы сыворотки, ранее отправленные в ARUP Laboratories (Солт-Лейк-Сити, Юта) для тестирования на антинуклеарные антитела (ANA) (50 отрицательных и 445 положительных с помощью Bio-Rad ANA ELISA).

Рисунок 1

Сравнение процента положительных образцов с использованием 4 иммуноферментных анализов (ELISA) и тестирования непрямых флуоресцентных антител (IFA) эпителиальных клеток человека (HEp) -2 среди популяций образцов сыворотки.Из-за ограниченного объема пробы образцы RA не использовались в анализе Bio-Rad. HC, здоровые контрольные образцы сыворотки; РА, образцы сыворотки от ревматоидного артрита; и образцы сыворотки СКВ, системной красной волчанки. Клинические образцы были отобраны образцы сыворотки, ранее отправленные в ARUP Laboratories (Солт-Лейк-Сити, Юта) для тестирования на антинуклеарные антитела (ANA) (50 отрицательных и 445 положительных с помощью Bio-Rad ANA ELISA).

Образцы, определенные CDC

CDC предоставляет набор из 12 четко определенных образцов сыворотки, содержащих антитела к определенным антигенам, производителям наборов для анализа ANA, лабораториям, проводящим тестирование на ANA, и другим лицам, которые хотят определить рабочие характеристики своих анализов.В таблице 2 показаны антитела, включенные в индивидуальный образец CDC, и результаты анализа. ELISA Bio-Rad, Phadia и Aesku были положительными в 12, 9, 10 и 10 из этих 12 контрольных образцов соответственно, а анализ IFA был положительным в 11 из 12 образцов сыворотки. Три ELISA не выявили фибрилларин или полимиозит-склеродермию. Антитело к фибрилларину, которое обнаруживается менее чем у 3% пациентов с СКВ, было обнаружено при титре 1:80, создавая комковатый рисунок ядрышка на клетках HEp-2 при тестировании IFA.Антитела к полимиозиту-склеродермии выявляли с помощью 2 из 5 анализов. Это ядрышковые антитела, обнаруживаемые примерно у 15% пациентов с полимиозитом.

Таблица 2

Образцы эталонной сыворотки человека, распределенные CDC для тестирования ANA

Таблица 2

Образцы эталонной сыворотки человека, распределенные CDC для тестирования ANA

Образцы, представленные для стандартного тестирования ANA

Эта группа состояла из 495 образцов, отправленных в лаборатории ARUP для рутинного анализа ANA.Первые 445 образцов, которые были положительными, и первые 50 образцов, которые были отрицательными по результатам анализа Bio-Rad ANA ELISA, использованного для скрининга ANA в лабораториях ARUP, были выбраны для дальнейшего исследования. Характеристики других ANA ELISA (Phadia, Aesku и INOVA) сравнивали с результатами HEp-2 ANA IFA.

Большинство образцов были положительными с помощью методов ELISA и IFA или отрицательными с помощью обоих методов. Рис. 2. Далее мы исследовали образцы, которые дали титры ANA IFA от 1:40 до 1: 160, но были отрицательными с помощью ELISA.Эти образцы состояли из 29, 26 и 17 образцов для ELISA Phadia, Aesku и INOVA соответственно. В этой группе 20 образцов имели титр ANA IFA 1:40 с однородным или смешанным образцом, а еще 4 образца давали титры 1:80 с однородным образцом. Эти 24 образца соответствуют аутоантителам с низким титром, обнаруженным у здорового населения. Только 1 образец, который был отрицательным с помощью INOVA ELISA, и 2 образца, который был отрицательным с анализами Phadia и Aesku, дали титры 1: 160 с однородными структурами.Результат ANA IFA обычно считается значимым при титре 1: 160 или выше при скрининге на аутоантитела. Таким образом, ELISA INOVA, Aesku и Phadia продемонстрировали чувствительность 98,3%, 96,4% и 92,3%.

Рисунок 2

Из 495 образцов сыворотки 50 отрицательных и 445 положительных образцов были отобраны путем скрининга с помощью иммуноферментного анализа на антинуклеарные антитела Bio-Rad, используемого в ARUP Laboratories (Солт-Лейк-Сити, Юта). Показан процент положительных результатов с использованием анализов Phadia, Aesku и INOVA по сравнению с тестом непрямых флуоресцентных антител (IFA) эпителиальных клеток человека (HEp) -2.

Рисунок 2

Из 495 образцов сыворотки 50 отрицательных и 445 положительных образцов были отобраны путем скрининга с помощью твердофазного иммуноферментного анализа на антинуклеарные антитела Bio-Rad, используемого в ARUP Laboratories (Солт-Лейк-Сити, Юта). Показан процент положительных результатов с использованием анализов Phadia, Aesku и INOVA по сравнению с тестом непрямых флуоресцентных антител (IFA) эпителиальных клеток человека (HEp) -2.

Эта группа образцов (IFA + и ELISA–) была дополнительно протестирована с помощью 4 различных множественных иммунофлуоресцентных тестов на экстрагируемый ядерный антиген (ENA).Каждый из 4 анализов состоял из комбинаций SSA (60 кДа), SSA (52 кДа), SSB, Smith, Smith / RNP, рекомбинантных RNP, Scl-70, центромеры B, дцДНК, хроматина, гистонов, Ribo-p и Джо-1. В этой группе образцов с отрицательным ELISA все, кроме 2 из 29 образцов, были отрицательными для всех аналитов, включенных в 4 мультиплексных анализа ENA. 2 отрицательных образца, которые были отрицательными при анализе Aesku ELISA и положительными при 1:80 при анализе ANA IFA, были положительными на SSA (60 кДа) по всем 4 анализам ENA, а также положительными при анализе ELISA Bio-Rad, Phadia и INOVA. , предполагая, что это были истинные промахи Aesku ELISA.Эти результаты также предполагают, что низкие титры, от 1:40 до 1: 160, демонстрируют предвзятость читателя.

Обсуждение

Тестирование на ANA — это начальный логический шаг в оценке CTD у пациентов с проявлениями, указывающими на такой диагноз. Чувствительность, специфичность и прогностическая ценность теста зависят от специфики теста, выбранного лабораторией. На тестирование ANA IFA также влияют многие переменные, такие как специфичность субстрата, конъюгата, колбы микроскопа и, особенно, считывающего устройства.Лабораториям с большим объемом, таким как ARUP, которые обрабатывают 14 000 или более ANA в месяц, нужна платформа для скрининга этих образцов сыворотки.

В этом исследовании мы стремились провести скрининг ANA с помощью ELISA с последующим выборочным использованием тестирования IFA в качестве рутинного подхода для скрининга и подтверждения присутствия ANA. Данные показали более высокую чувствительность, от 90% до 97%, для оцененных ELISA по сравнению с 80% чувствительностью для теста HEp-2 IFA в клинически определенных образцах SLE. Высокая чувствительность ELISA позволяет использовать его для скрининга на ANA, так что об отрицательных образцах сыворотки можно сообщать напрямую, тогда как образцы сыворотки, положительные с помощью ELISA, могут быть подтверждены тестированием IFA.Из-за более низкой специфичности ELISA (от 36% до 94%) все положительные образцы будут подвергаться дальнейшему тестированию с помощью тестирования IFA, чтобы подтвердить присутствие ANA, а также титр и образец. Использование ELISA с чувствительностью 95% или выше позволит лаборатории регистрировать большинство отрицательных проб пациентов с меньшими затратами и более коротким временем обработки. Напротив, ELISA со специфичностью 36% приведет к неприемлемому количеству ненужных тестов ANA IFA.

В 2009 году Qin et al. ²² сообщили о своем сравнении тестирования HEp-2 IFA с ELISA для тестирования ANA и ДНК.Они пришли к выводу: «Предварительный скрининг ELISA в сочетании с IIFA [непрямым иммунофлуоресцентным анализом] может получить информацию о ядерном паттерне и позволить наблюдать изменения титра. Комбинация двух или более методов тестирования может значительно повысить точность результатов ». ²² Исследование Tonuttia et al. ²³ продемонстрировало, что коммерчески доступные ELISA ANA демонстрируют разную степень чувствительности и специфичности и что некоторые из них имеют диагностическую точность, сравнимую или, в некоторых случаях, выше, чем тестирование IFA.

В декабре 1996 года Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам опубликовал руководство по обеспечению качества непрямого иммунофлюоресцентного тестирования для ANA, которое предлагает добровольный стандарт, разработанный на основе консенсуса сообщества клинических лабораторных тестов. ¹⁷ В данном руководстве рассматривается использование конъюгата против человеческого IgG по сравнению с поликонъюгатом против человека при тестировании на ANA с помощью IFA на клетках HEp-2. В нем говорится, что использование поликонъюгата позволит выявить АНА класса IgM, связанные с РА, лекарствами и возрастом, которые обычно не имеют диагностического значения.В руководстве рекомендуется использовать конъюгат, специфичный к человеческому IgG, для повышения положительной прогностической ценности этих анализов ANA. ^17,24 Недавно ACR опубликовал заявление о позиции, в котором говорится, что тест IFA является предпочтительным методом скрининга ANA. ²⁵ Хотя эту рекомендацию можно назвать разумной, учитывая низкую эффективность некоторых коммерчески доступных анализов мультиплексных иммунофлуоресцентных микросфер ANA, несколько исследований показали ограниченную полезность тестирования IFA в качестве инструмента скрининга. ^5,16,26,27 Действительно, обнаружение специфической антинуклеарной реактивности, такой как SSA и антитела Ribo-p, было зарегистрировано у пациентов с отрицательными результатами скрининга ANA IFA из-за низкой экспрессии этих антигенов и / или плохой фиксации клеток. . ^15,17,25,27

Другой распространенной проблемой, связанной с тестом IFA, является использование неспецифического IgG (тяжелые и легкие цепи) или поливалентного конъюгата, который обнаруживает IgA, IgG и IgM ANA. В январе 2000 года Коллегия американских патологов опубликовала специальную статью об использовании поливалентных конъюгатов в тестировании ANA. ²⁴ Хотя использование IgG-неспецифических или поливалентных конъюгатов увеличивает положительную прогностическую ценность этих анализов, это часто связано с обнаружением клинически незначимых антител. ^17,24 Результаты недавнего опроса, CAP SA 2008, ²⁸ показали, что титры варьировались от 1:40 до 1: 1,280 при тестировании аликвот одного и того же образца с использованием тестов HEp-2 разных производителей, отчасти из-за этого. поливалентные или IgG-неспецифические конъюгаты.

Все более распространенная практика использования теста ANA для исключения аутоиммунных заболеваний в сочетании с субъективностью чтения тестов IFA и неспособностью стандартизировать производство тестов ANA IFA поставила под сомнение его полезность в качестве предпочтительного метода скрининга. ^1,16,26,29 Для нашего исследования мы использовали показания 2 опытных сертифицированных медицинских технологов в качестве стандарта для сравнения в каждой из исследуемых групп. Тестирование ANA IFA продемонстрировало хорошую чувствительность и специфичность. Однако случайный отбор ежедневных образцов, отправленных в лабораторию ARUP для тестирования ANA, привел к 13,5% вероятности того, что тест ANA IFA даст положительный результат. Пациенты, образцы сыворотки которых дали ложноотрицательные результаты, в этом исследовании 4,5%, скорее всего, будут иметь постоянные симптомы и в конечном итоге пройдут последующее тестирование и получат правильный диагноз.Однако 9% положительных результатов IFA могут быть ложноположительными. Лаборатории, выполняющие анализ ANA IFA с использованием поликонъюгата против IgG, IgM и IgA, потенциально могут дать еще большее количество потенциальных ложноположительных результатов. Пациенты с результатами, попадающими в категорию ложноположительных результатов, часто направляются к специалисту, нуждаются в дополнительном тестировании с соответствующими затратами или им прописываются лекарства, которые потенциально являются ненужными и вредными. ^30,31 Даже если частота ложноположительных результатов ANA IFA составляет 1%, это потенциально может засорить клиники ревматологов, вызывая задержку в диагностике и лечении пациентов с реальным аутоиммунным заболеванием. ²⁹

Поскольку анализа ANA со 100% чувствительностью и специфичностью не существует, клиницисты должны искать баланс между чувствительностью и специфичностью. Основываясь на этом исследовании, клиницисты должны проверять ANA только тогда, когда CTD предполагается на основании истории болезни пациента и результатов физикального обследования. Экономически эффективно использовать чувствительный ANA ELISA при скрининге тысяч образцов пациентов каждый месяц. Из-за его низкой специфичности ANA ELISA следует использовать только для скрининга, а положительные результаты следует отправлять для подтверждения с помощью тестирования HEp-2 IFA или дальнейшего тестирования ENA для определения присутствия и специфичности антител.Скрининг ANA с помощью чувствительного ELISA снижает субъективность, стоимость и время обработки. Однако тщательное исследование и валидация скринингового анализа на ANA важны для выбора правильного анализа для лаборатории. Имея на выбор огромное количество анализов и методов, для клиницистов и сотрудников лаборатории чрезвычайно важно знать и понимать ограничения всех анализов, используемых для тестирования ANA. ^1,3,5,18 Наши данные подтверждают рутинное использование скрининга ANA ELISA у пациентов с подозрением на СКВ или других аутоиммунных заболеваний с последующим IFA на положительных образцах для подтверждения антител, структуры и титра.

Мы благодарим Diana Knapp, MT (ASCP), Jeanette Enbody, MT (ASCP), и Carri Craig, NCA I за их многочасовое чтение слайдов HEp-2 IFA. Все наборы, использованные в этом исследовании, были любезно предоставлены бесплатно производителями, которые не принимали участия в сборе, анализе или интерпретации данных или написании рукописи.

Список литературы

1.

.

Использование лабораторных тестов в диагностике СКВ

.

Дж. Клин Патол

.

2000

;

53

:

424

—

432

.2.

и другие.

Использование лабораторных тестов в диагностике и мониторинге системной красной волчанки

.

Дж Нефрол

.

2002

;

15

(

доп. 6

):

S20

—

S27

. 3.

.

Определение случаев волчанки для клинических исследований: Бостонские взвешенные критерии для классификации системной красной волчанки

.

Дж Ревматол

.

2002

;

29

:

2545

—

2550

.4.

.

Обновление пересмотренных Американским колледжем ревматологов критериев классификации системной красной волчанки [письмо]

.

Rheum артрита

.

1997

;

40

:

1725

.5.

и другие.

Обнаружение антинуклеарных антител методами твердофазного иммуноанализа и иммунофлуоресцентного анализа

.

Clin Chem

.

2004

;

50

:

2141

—

2147

.6.

.

Обнаружение антител

. В:, под ред.

Аутоантитела и аутоиммунитет: молекулярные механизмы в здоровье и болезнях

.

Вайнхайм, Германия

:

Wiley-VCH Verlag

;

2006

:

159

—

188

.7.

и другие.

Распределение титров антинуклеарных антител у «нормальных» детей и взрослых

.

Дж Ревматол

.

1999

;

26

:

914

—

919

.8.

и другие.

Диапазон антинуклеарных антител у «здоровых» людей

.

Rheum артрита

.

1997

;

40

:

1601

—

1611

.9.

.

Результат положительных антинуклеарных антител с высоким титром у лиц без заболевания соединительной ткани: 10-летнее наблюдение

.

Clin Rheumatol

.

2008

;

27

:

1399

—

1402

.10.

и другие.

Распространенность специфических для болезни антинуклеарных антител в общей популяции: оценки на основе ежегодных медицинских осмотров жителей небольшого городка за 5-летний период

.

Mod Rheumatol

.

2008

;

18

:

153

—

160

.11.

и другие.

Распространенность повышенных антитиреоидных и антинуклеарных антител у детей с иммунной тромбоцитопенической пурпурой

.

Ам Дж. Гематол

.

2005

;

79

:

175

—

179

.12.

и другие.

Распространенность и клиническое значение теста на повышенные антинуклеарные антитела у детей и взрослых пациентов с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой

.

Дж Тромб

.

2007

;

24

:

163

—

168

. 13.

и другие.

Частота появления антинуклеарных антител у здоровых детей и подростков

.

Клиника педиатра

.

2004

;

43

:

637

—

642

. 14.

и другие.

Распространенность положительных антинуклеарных антител у здоровых детей

.

Allergy Immunol

.

2005

;

23

:

153

—

157

. 15.

.

Иммунофлуоресцентные тесты на антинуклеарные антитела

. В:, ред.

Руководство по клинической лабораторной иммунологии

. 7-е изд.

2006

:

995

—

1006

. 16.

.

Клиническое значение антинуклеарных антител: сравнение обнаружения с помощью иммунофлуоресценции и иммуноферментного анализа

.

Rheum артрита

.

1997

;

40

:

1612

—

1618

. 17.

Институт клинических и лабораторных стандартов

. Обеспечение качества лабораторных тестов на аутоантитела к ядерным антигенам: (1) непрямой флуоресцентный анализ для микроскопии и (2) методы иммуноферментного микротитрования; Утвержденное руководство, 2-е изд. Уэйн, Пенсильвания: Институт клинических и лабораторных стандартов; 1996. Документ CLSI I / LA2-A2.18.

и другие.

Критическая оценка иммуноферментных анализов для обнаружения антинуклеарных аутоантител определенной специфичности

.

Rheum артрита

.

1999

;

42

:

455

—

464

.19.

.

SPSS для Windows: пошаговое руководство: простое руководство и справочник, обновление 11.0

. 4-е изд.

Бостон, Массачусетс

:

Аллин и Бэкон

;

2004

.20.

и другие.

Американская ассоциация ревматизма 1987 г. пересмотрела критерии классификации ревматоидного артрита

.

Rheum артрита

.

1988

;

31

:

315

—

324

. 21.

и другие.

Пересмотренные в 1982 г. критерии классификации системной красной волчанки

.

Rheum артрита

.

1982

;

25

:

1271

—

1277

. 22.

и другие.

Сравнение непрямого иммунофлуоресцентного анализа и ELISA для обнаружения антинуклеарных антител и антител к двухцепочечной ДНК [на китайском языке]

.

Нан Фанг И Кэ Да Сюэ Сюэ Бао

.

2009

;

29

:

472

—

475

. 23.

и другие.

Диагностическая точность методов ELISA как альтернативного скринингового теста непрямой иммунофлуоресценции для обнаружения антинуклеарных антител: оценка пяти коммерческих наборов

.

Аутоиммунитет

,

2004

;

37

:

171

—

176

.24.

и другие.

Руководство по клиническому применению теста на антинуклеарные антитела и тестов на специфические аутоантитела к ядерным антигенам

.

Arch Pathol Lab Med

.

2000

;

124

:

71

—

81

. 25.

Американский колледж ревматологии

. .26.

и другие.

Выявление специфической антиядерной реактивности у пациентов с отрицательными скрининговыми иммунофлуоресцентными тестами на антиядерные антитела

.

Clin Chem

.

2002

;

48

:

2171

—

2176

. 27.

и другие.

Ограниченная надежность метода непрямой иммунофлуоресценции для обнаружения антител против Rib-P [опубликованная поправка появилась в Arthritis Res Ther.